في المختبر توصيف الخصائص الكهربية لألياف الزبائ Colonic في الفئران

الهدف العام من هذا البروتوكول هو توضيح منهجية التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية للأعصاب الحسية للقولون والمستقيم في المختبر. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال القلم المختبري مثل مساهمة حساسية الفوارين المحيطية الخارجية في تصحيح فرط الألم. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بتمييز القولون والمستقيم بطريقة مماثلة لتمييز الشريان السباتي في الجسم الحي أو في أو في المرضى.

العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأن تحديد موقع العقد وتشريح الأعصاب أمر صعب نسبيا. لبدء هذا الإجراء ، قم بكشف تجويف البطن لفأر مخدر بعمق عن طريق إجراء شق خط الوسط على جدار البطن باستخدام مشرط. بعد ذلك ، اسحب المساريق والأنسجة الأخرى جانبا لكشف القولون والمستقيم.

ثم ضع تحت المجهر التشريح. من خلال التشريح الدقيق ، حدد موقع عقدة الحوض الأيسر وحدد أعصاب الحوض والأعصاب الحشوية القطنية التي تنضم إليها. بعد ذلك ، قم بقطع هذه الأعصاب على بعد بضعة ملليمترات من عقدة الحوض.

يعد تحديد موقع العقدة الحوضية وتشريح الأعصاب الخطوة الأكثر أهمية وأصعب في هذا الإجراء. بعد ذلك ، قم بقطع عظم الارتفاق لفضح المستقيم. قم بإزالة الأنسجة الموجودة فوق القولون والمستقيم واحرص على ترك عقدة الحوض سليمة.

بعد التضحية بالجرذ عن طريق الحقن الوريدي لجرعة زائدة من البنتوباربيتال ، قم بتحويل القولون على ارتفاع حوالي ثلاثة سنتيمترات فوق عقدة الحوض وإزالة القولون والمستقيم من باستخدام الملقط. بعد ذلك ، انقل القولون إلى طبق بتري مليء بمحلول كريبس المبرد مسبقا. قم بإزالة البراز عن طريق شطف القولون برفق.

بعد ذلك ، قم بإزالة المثانة البولية المتبقية والأنسجة الأخرى بعناية ، دون المساس بالعقدة الحوضية. في هذا الإجراء ، ضع القولون في غرفة التسجيل وقم بغزارة الأنسجة باستمرار بمحلول كريبس المكربوجن. بعد ذلك ، قم بتقشير القولون والمستقيم في كل من طرفي الفم والشرج ، ثم ابدأ التسريب داخل اللمعة للقولون بالمحلول الملحي في اتجاه الفم إلى الشرج ، بعد ذلك ، حدد موقع العقدة الحوضية الرئيسية تحت المجهر التشريحي واستخدم دبابيس الحشرات لفضح العقدة.

مع التشريح الدقيق ، ابحث عن فرع رفيع من العصب ينبعث من العقدة ويمتد نحو القولون ، ثم قم بقطع العصب بالقرب من العقدة. قبل الخطوة التالية ، قم بتشغيل حمام التدفئة واحتفظ بمحلول كريبس عند 34 درجة مئوية. الآن ، افحص ماصة زجاجية مسحوبة مسبقا تحت المجهر التشريح.

اكسر طرف القطب الكهربائي بزوج من الملقط بحيث يكون بحجم متوافق مع قطر العصب المراد تسجيله. بعد ذلك ، قم بشطف الطرف عن طريق وضعه بالقرب من توهج أخف. قد يجد الجديد في هذه المنهجية أيضا أنه من الصعب شطبة طرف القطب المتوافق مع حجم العصب.

بعد ذلك ، ضع القطب المشطوف في حامل القطب ، ثم قم بتوصيل حقنة سعة 10 مليلتر بالمنفذ الجانبي للحامل لتطبيق الضغط السلبي أو الإيجابي على القطب. بعد ذلك ، قم بتوصيل الحامل بمرحلة الرأس لمكبر الصوت الحيوي ، وقم بتركيب مرحلة الرأس على مناور. بعد ذلك ، انقل القطب إلى حمام الأنسجة واملأ القطب بمحلول كريبس عن طريق تطبيق شفط لطيف حتى يلامس السلك الفضي للحامل.

بعد ذلك ، ضع طرف القطب بالقرب من الطرف المقطوع للعصب وقم بالضغط السلبي لامتصاص العصب في القطب. بعد ذلك ، قم بتطبيق المزيد من الضغط السلبي ، بحيث يتم سحب حوالي ملليمتر واحد من العصب إلى القطب الكهربائي وتشكيل ختم محكم. الآن ، قم بتشغيل مكبر الصوت الحيوي واضبط الفلتر على 300 إلى ثلاثة آلاف هرتز.

راقب الإشارة على راسم الذبذبات وسجل الإشارة العصبية وإشارة الضغط داخل اللمعان في برنامج معالجة بيانات السنبل. بعد ذلك ، قم بتطبيق انتفاخ المنحدر للقولون عن طريق إغلاق الصنبور ثلاثي الاتجاهات على قنية المخرج أثناء نقعه باستمرار داخل اللمعة. راقب الضغط داخل اللمعة حتى يصل إلى 60 ملم من الزئبق ، ثم افتح الصنبور ثلاثي الاتجاهات على قنية التصريف.

كرر هذا الإجراء على فترات منتظمة مدتها خمس عشرة دقيقة واستخدم أدوية إضافية أو داخل اللمعة لاختبار الحساسية الكيميائية للأعصاب الواردة. فيما يلي الرسم التوضيحي التخطيطي للإعداد التجريبي لإعداد القولون والمستقيم الأنبوبي خارج الجسم الحي مع تسجيل تمثيلي من العصب البعيد إلى العقدة الحوضية. في الاستعدادات من الفئران العادية ، عادة ما يكون للأعصاب الواردة القولون مستوى منخفض من النشاط التلقائي المنتظم.

انتفاخ القولون المنحدر إلى زيادة تدريجية في معدل إطلاق النار. يتم تمثيل الخاصية الحسية الميكانيكية لكل عصب من خلال رسم منحنى استجابة العصب الوارد للضغط داخل اللمعة. بدلا من ذلك ، يمكن إجراء التسجيل من فرع من أعصاب الحوض القريبة من العقدة الحوضية.

ما يكون المظهر الجانبي للنشاط الحسي الميكانيكي للأعصاب الحوضية القريبة مشابها لتلك التي تظهر في العصب البعيد عن عقدة الحوض. يمكن إجراء تحليل المكون الرئيسي لأشكال موجة إمكانات الفعل من التسجيل متعدد الوحدات للتمييز بين نشاط الوحدة الواحدة. فيما يلي الأشكال الموجية المتراكبة لاثنين من الأحجار الزجاجية في الحوض.

بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في غضون ساعتين إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لتشريح العقد الحوضية الرئيسية والأعصاب الأخرى وأن تكون قادرا على تحديد موقع العقد لتشريح الأعصاب وتسجيل النشاط الوارد. تتمثل إحدى مزايا هذا البروتوكول في أنه قد يسمح بمقارنة الخصائص الفيزيولوجية الكهربية والملامح الدوائية للأعصاب الواردة في الحوض والأعصاب الحشوية.