تسجيل الكهربية من ذبابة الفاكهة تريتشويد سنسيلا في الاستجابة ل أودورانتس من التقلب المنخفض

الهدف العام من هذه التقنية هو تقديم روائح منخفضة التقلب بشكل فعال للخلايا العصبية المستقبلة الشمية وذبابة الفاكهة للتسجيل الفيزيولوجي الكهربي. توجد هذه الخلايا العصبية في sensilla trichoid وتستجيب للفيرومونات الجلدية طويلة السلسلة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التواصل مع فرمون الحشرات من خلال توفير تقنية محسنة لتوصيل الرائحة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بتقديم الروائح التي كان يتعذر الوصول إليها سابقا بسبب تقلبها المنخفض بشكل فعال أثناء التسجيل في الجسم الحي. على وجه التحديد ، يتم تقديم الفيرومونات من مسافات قريبة تحاكي النطاق بين مغازلة الذكور والإناث المستهدفة. يبدأ تحضير مكون خرطوشة توصيل الرائحة لتسجيلات AT4 بإزالة 0.9 سم من الطرف الضيق لطرف ماصة سعة 200 ميكرولتر.

ثم ، من طرف الماصة الثاني ، قم بإزالة 1.7 سم من الطرف الضيق ، و 1.5 سم من الطرف العريض ليصبح طوله 1.8 سم. بعد ذلك ، استخدم الملقط لوضع قرص قطره 1/8 بوصة من ورق الترشيح عند طرف القسم 1.8 سم. اترك فتحة صغيرة يمكن أن يمر من خلالها الهواء.

ثم قم بتأمين أقسام الماصة مع القسم الأصغر بزاوية لأسفل لاستهداف المستحضر. استخدم الآن P10 لتطبيق الرائحة عند التخفيف المطلوب على ورق الترشيح. ثم ، لتبخير المذيب ، اترك الخراطيش المحملة تجلس في مجفف فراغ لمدة ساعة.

أولا ، قم بتجميع شريحة تحضير الذبابة. على شريحة زجاجية ، قم بإرفاق زلة غطاء زجاجي بطين النمذجة ، لإنشاء زاوية حوالي ثلاث درجات بين الشريحة وانزلاق الغطاء. ثم قم بإرفاق شريط على الوجهين في مكانين ، الحافة الداخلية لانزلاق الغطاء والشريحة أسفل زلة الغطاء مباشرة.

استخدم دائما شريطا جديدا. الآن اجمع الذبابة ذات الأهمية في أنبوب الشفاط. ثم ضع طرف ماصة سعة 200 ميكرولتر فوق نهاية الأنبوب، وحرك الأنبوب في نفس الوقت أثناء النفخ، لدفع الذبابة إلى نهاية طرف الماصة.

ثم استخدم شفرة حلاقة لقطع الطرف أسفل جسم الذبابة مباشرة. الآن قم بتحميل طين التشكيل بعناية في الطرف العريض من الطرف لإجبار رأس الذبابة على الدخول في الفتحة الأصغر. بمجرد أن يتعرض كلا الهوائيين ، توقف عن التعبئة في الطين.

استخدم الآن الملقط لوضع الإعداد على الشريحة. ضع المشبك ليواجه أفقيا مع الجانب الجانبي للهوائي مقابل سطح انزلاق الغطاء المسجل. ثم ضع قضيب التثبيت على الأريستا لتثبيت الهوائي على الشريط.

بعد ذلك ، ضع الإعداد على مسرح الحفارة. تأكد من أن المثلث الصبغي مرئي على طول الحافة الجانبية البعيدة للجزء الثالث من الهوائي. يجب أن تكون الحساسة مظللة بوضوح على الخلفية.

حافظ على الإعداد تحت تدفق هواء مرطب مستمر يتم توصيله عبر أنبوب منفصل على مسافة حوالي سنتيمترين. لالتقاط التسجيلات ، أدخل القطب المرجعي في المقطع باستخدام حركة سريعة وسلسة. ضعه أسفل البشرة مباشرة حيث سيكون ملامسا للهيموليمف.

بعد ذلك ، قم بخفض قطب التسجيل ببطء حتى يدخل نفس مستوى الرؤية مثل حساس الهدف. ثم أدخل قطب التسجيل في القاعدة الحسية. قبل المتابعة ، تأكد من وجود نسبة إشارة إلى ضوضاء عالية ، مع طفرات يمكن تحديدها من الخلايا العصبية AT4-A و AT4-C.

يجب ألا تطلق الخلايا العصبية AT4-A أسرع من 20 هرتز. الآن قم بتوصيل الخرطوشة بأنبوب توصيل الرائحة. ابدأ بالتحكم في المذيبات وتقدم نحو أعلى تركيز للرائحة.

في هذه الحالة ، يتم إرفاق خرطوشة حمض البالمتوليك. بعد ذلك ، استخدم المعالج الدقيق لمناورة الخرطوشة باتجاه الإعداد أثناء توجيهها إلى الرأس. ضع طرف الخرطوشة مشيرا مباشرة إلى الهوائي من مسافة حوالي أربعة ملليمترات.

يجب أن تكون الخرطوشة أيضا حوالي ملليمتر واحد فوق الشريحة. يعد تحديد المواقع بدقة للخرطوشة فيما يتعلق بالإعداد هو الخطوة الوحيدة الأكثر أهمية في هذا الإجراء. تتوقف الاستجابات العصبية المتسقة على الموضع القابل للتكرار للخرطوشة عبر التجارب.

قد تكون الخرطوشة محاطة بشكل وثيق بالأقطاب الكهربائية والشريحة. من الناحية المثالية ، يجب أن يكون على الأقل أربعة ملليمترات من أي من القطبين. للتحفيز، اضبط وحدة التحكم في تدفق الرائحة على رشقات نارية تبلغ 500 مللي ثانية، واستخدم معدل تدفق 500 ملليلتر في الدقيقة.

لكل انفجار محفز ، سجل النشاط الكهربائي لمدة 10 ثوان. بعد تطبيق الرائحة ، اسحب الخرطوشة بعناية قبل استبدالها بخرطوشة تحتوي على أعلى تركيز تالي. بعد أخذ جميع التسجيلات لهذا اليوم ، اشطف قطب التسجيل جيدا بالماء المقطر.

باستخدام الطرق الموصوفة على ذكور الذباب البري من برلين البالغ من العمر سبعة أيام ، تمت مقارنة الفعالية النسبية لحمض البالميتوليك المتحول. كان ترانس بالميتوليك منبها أقوى للخلايا العصبية للمستقبلات الشمية Or47b. من كل ذبابة ، تم تسجيل خلية عصبية واحدة فقط.

كان للمسافة بين فتح خرطوشة الرائحة ورأس الذبابة تأثير كبير على الاستجابات العصبية. عند أربعة ملليمترات ، كان هناك العديد من المسامير التي تم إطلاقها استجابة لحمض البالميتوليك. على مسافة 11 ملم ، لم تكن هناك أي استجابات يمكن ملاحظتها بواسطة الخلايا العصبية O47b.

كان العرض القريب من حمض البالمتوليك مهما جدا لدراسة آثاره كرائحة. نأمل أنه بعد مشاهدة هذا الفيديو ، سيكون لديك فهم واضح لكيفية تقديم حمض البالميتوليك أو غيره من الروائح منخفضة التقلب في الخلايا العصبية لمستقبلات ذبابة الفاكهة الشمية أثناء تسجيل الحس الفردي في الجسم الحي. بمجرد إتقان هذه التقنية ، يمكن تسجيل منحنى جرعة كامل من ذبابة واحدة في حوالي 20 دقيقة.

بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال شمية الحشرات لاستكشاف الفيزيولوجيا العصبية وآليات نقل الإشارات للكشف عن الفرمون.