في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال

نقدم هنا، فائدة التصوير الطولي في فيفو في متابعة التغييرات الشكلية من neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر في الفئران.

تعتبر عمليات الأوعية الدموية الجديدة سمة مميزة للعديد من أمراض العين السائدة. أبرزها ، الضمور البقعي المرتبط بالعمر النضحي أو التنكس البقعي الرطب لاعتلال الشبكية السكري التكاثري القصير ، واعتلال الشبكية الخداجي. تمثل هذه الاضطرابات معا معظم حالات العمى القانوني في جميع أنحاء العالم وترتبط بمضاعفات عينية إضافية ، مثل النزيف الزجاجي والزرق الوعائي الجديد.

ومع ذلك ، على الرغم من انتشارها ، فإن الخيارات العلاجية لاضطرابات الأوعية الدموية الجديدة في العين محدودة. المعيار الحالي للرعاية للأوعية الدموية الجديدة المرتبط ب AMD واعتلال الشبكية السكري التكاثري هو الحقن داخل الجسم الزجاجي للأجسام المضادة المتوافقة مع البشر الموجهة ضد وسيط حاسم لتكوين الأوعية الدموية والأوعية الدموية الجديدة ، عامل نمو بطانة الأوعية الدموية أو VEGF. ومع ذلك ، على الرغم من الفعالية في وقف تطور المرض وتحسين الرؤية الوظيفية ، فإن الحقن داخل الجسم الزجاجي مكلف وبعيد كل البعد عن أن يكون خاليا من المخاطر.

يمكن أن تشمل المضاعفات الالتهابات والتهاب باطن المقلة وانفصال الشبكية ونزيف العين. لذلك ، هناك حاجة ملحة لتطوير خيارات علاجية جديدة فعالة وآمنة وأقل تكلفة. من أجل تعزيز تطوير الأدوية لاضطرابات الأوعية الدموية الجديدة ، فإن النماذج الحيوانية الصغيرة لها أهمية حاسمة.

يجب أن تكون هذه النماذج قابلة للتكرار ، وأن تكون قد تم إنشاؤها والتحقق من صحتها ، واستخدام مركب مرجعي ذي صلة سريريا بشكل مثالي ليكون بمثابة تحكم إيجابي. في هذا البروتوكول ، سنقدم نموذج الأوعية الدموية المشيمية للفأر ، أو نموذج CNV ، وهو أحد أكثر النماذج استخداما لكل من دراسة الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تساهم في CNV وتطوير عوامل جديدة مضادة للأوعية الدموية الجديدة. في نموذج CNV ، يتم تمزق غشاء Bruch باستخدام ليزر الأرجون.

وبالتالي بدء عمليات الأوعية الدموية الجديدة التي تنشأ من المشيمية. يوفر استخدام التصوير الطولي في الجسم الحي عن طريق التصوير المقطعي للتماسك البصري في المجال الطيفي ، أو SD-OCT باختصار ، وتصوير الأوعية بالفلورسين ، وسيلة لمتابعة انتشار وانحدار CNV. وبالتالي ، لتقييم فعالية التدخلات الصيدلانية الجديدة ومسارها الزمني.

علاوة على ذلك ، تسمح التطورات الحديثة في معالجة الصور بالتجزئة الآلية لقياس سمك الشبكية ، مما يوفر منهجية خالية من تحيز المحقق لتقييم وجود الوذمة. هنا ، سنناقش فائدة برنامج InVivoVue Diver الجديد من Leica Microsystems للتجزئة الآلية لطبقات الشبكية في نموذج CNV للماوس. أخيرا ، سنناقش كيف يمكن للتحليل النسيجي لحوامل الشبكية الكاملة أن يكمل التصوير الطولي في الجسم الحي في هذا النموذج.

يتم وضع قطرة واحدة من التروبيكاميد على كل عين لتوسيع الحدقة بعد ذلك ، يتم وضع برفق في مرحلة محاذاة القوارض. يتم ضبط الماوس لكشف العين وتثبيته باستخدام حامل الأنف وقطعة من شريط المختبر توضع برفق على الظهر.

بعد ذلك ، يتم وضع قطرة من مواد التشحيم على العين للترطيب ، ويتم إزالة أي سائل زائد بعناية باستخدام مسحات ورق الترشيح. أخيرا ، يتم محاذاة المرحلة أمام جهاز OCT لتصوير OCT الأساسي. يتم إجراء التصوير المقطعي البصري للتماسك البصري في المجال الطيفي في الجسم الحي في خط الأساس ، قبل تطبيق الليزر ، من أجل التحقق من عدم وجود أي تشوهات في الشبكية.

قم بإزالة الماوس برفق من الحامل. ضع قطرة واحدة من Viscotears Gel على زلة غطاء لتثبيت القرنية. قم بتوجيه الفأر برأس العصب البصري في المنتصف ، وركز شعاع الليزر على ظهارة صبغة الشبكية.

قم بعمل ثلاث جرعات ليزر عن طريق تجنب الأوعية الدموية في الشبكية في مواضع الساعة الرابعة والثمانية والساعة 12 حول العصب البصري. افحص صلابة العين بعد كل حقن الليزر بحثا عن عدم وجود أي نزيف في الشبكية. كما كان من قبل ، قم بمحاذاة الفأر في الحامل وقم بإجراء تصوير الأوعية بالفلورسين وتصوير OCT لتأكيد تلف غشاء Bruch.

بالنسبة لتصوير الأوعية بالفلورسين ، تم التركيز أولا على مناطق حرق الليزر باستخدام وضع انعكاس الأشعة تحت الحمراء ، والذي يسمح بتصور المواقع بالليزر. حقن بعناية 0.1 مل من ملح الصوديوم الفلوريسئين 5٪ ، لحوالي 20 جراما من وزن جسم الفأر دون تغيير وضع عين الفأر. ابدأ في التقاط صور تصوير الأوعية بالفلورسين على مستوى المشيمية وعلى مستوى شبكية العين ، كل 30 ثانية تقريبا.

قم بمحاذاة العين لتصوير OCT كما كان من قبل وابدأ التصوير. يساعد متوسط إشارة SD-OCT على تصور مورفولوجيا الشبكية التفصيلية بشكل أفضل ، كما هو موضح في هذا التسلسل. بمجرد إجراء تصوير SD-OCT ، قم بإزالة الماوس بعناية من الحامل.

ضع مادة التشحيم لكلتا العينين. في هذه المرحلة ، يمكنك اختيار عكس التخدير عن طريق الحقن تحت الجلد لمضاد ألفا 2 للميديتوميدين أو الأتيباميزول أو انتظار تعافي من التخدير. كرر التصوير في الجسم الحي SD-OCT و FA في المخدرة في أيام المتابعة الخامسة و10 و14.

استخدم ميزة التجزئة الآلية بواسطة برنامج InVivoVue Diver لقياسات سمك الشبكية. بالنسبة لشبكية العين السليمة ، يعتبر سمك الشبكية الكلي هو سمك جميع الطبقات ، من طبقة الألياف العصبية إلى RPE. في شبكية العين السليمة ، يمكن للتجزئة الآلية اكتشاف طبقات الشبكية الفردية بدقة ، كما يتضح من هذا المثال.

ومن الجدير بالذكر أنه في الأماكن التي يوجد فيها CNV ، يجب إجراء القياس اليدوي لسمك الشبكية لكل موقع آفة CNV على حدة. من طبقة الألياف العصبية إلى خط وهمي يمر عبر طبقة RPE. يوضح هذا التسلسل سير العمل لقياسات السماكة اليدوية في المواقع التي توجد بها آفات CNV.

طبقة الألياف العصبية في الأعلى ، والمشيمية في الجزء السفلي من الصورة. باستخدام الماوس أو لوحة اللمس ، يتم تحديد حدود طبقة الألياف العصبية والمشيمية يدويا ، ويقوم البرنامج تلقائيا بحساب إجمالي سمك الشبكية بناء على هذه الإحداثيات. يوضح هذا الشكل صورا تسلسلية يتم التقاطها كل 20 ثانية على المستوى المشيمي.

تم الحصول على الصورة الأولى في وضع انعكاس الأشعة تحت الحمراء. في حين أن الآخرين, بعد حقن الفلورسين داخل الصفاق. تشير الأسهم البيضاء في الصورة الأولى إلى مواقع الليزر ، والتي تظهر تسرب الفلورسين في نقاط زمنية لاحقة ، وتسليط الضوء عليها الأسهم البيضاء في الصورة 18.

تظهر هذه الصورة التصوير التسلسلي FA الذي تم الحصول عليه على مستوى الشبكية. يشير السهم الأبيض في الصورة 18 إلى موقع ليزر، والذي يظهر تسرب الفلورسين بشكل أسرع من الاثنين الآخرين، كما هو موضح في دوائر في الصورة 18. يوضح هذا الشكل الملخص مسارا زمنيا لصور SD-OCT.

في خط الأساس ، مباشرة بعد الليزر ، ونقاط وقت المتابعة في الأيام الخامسة والعاشرة والرابع عشر. باختصار ، يسمح بروتوكول التصوير الطولي في الجسم الحي لآفات CNV باستخدام التصوير SD-OCT و FA بتصنيف سريع ومتعدد الوسائط وموثوق لأمراض CNV ووجود وذمة الشبكية. شكرا لك على اهتمامك.