Name: في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: تعلم التصوير الطولي في الفئران باستخدام SD-OCT والتصوير بالفلورسين لتتبع نمو الأوعية المشيمية المستحثة بالليزر. تتيح هذه الطريقة تقييم فعالية العلاجات المضادة للتكوّن الوعائي بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

المؤلف يود أن يشكر يوليا ناومتشوك (جامعة لويولا شيكاغو) وأجني Žiniauskaitė (اكسبيريمينتيكا المحدودة) للدعم التقني و videographic ممتازة. برنامج أبحاث الدكتور Kaja معتمد من قبل الدكتور جون ص وتيريز هاء مولكاهي وهبت الأستاذية في طب العيون في "جامعة لويولا شيكاغو".

جميع الحيوانات يعاملون وفقا "بيان آرفو" "استخدام الحيوانات" في أوفثالميك والبحث الرؤية "توجيه الجماعة الأوروبية" 86/609/EEC للتجارب على الحيوانات، باستخدام البروتوكولات المعتمدة ويرصدها المجلس تجربة الحيوان في "فنلندا".
1-المستحثة بالليزر الماوس المسيحي نموذج 5
<ol><li>فحص عيون الحيوان الميكروسكوب لأي شذوذ.</li>
	<li>وزن الماوس.</li>
	<li>حساب وإعداد مبلغ مناسب للمسكنات لاستخدام، استناداً إلى وزن الحيوان، مثل خليط من الماء المقطر (محلول كلوريد الصوديوم 0.9%) بنسبة 1:1.5:2.5، أو الكيتامين (40-75 مغ/كغ)، ميديتوميديني (1 مغ/كغ) والكيتامين (75 ملغ/كغ) إكسيلازيني (5 ملغ/كغ)، والماء المقطر (محلول كلوريد الصوديوم 0.9%) بنسبة 5:1؛ 1:2. ماوس ز 20، حقن 0.1 مل مخلوط.</li>
	<li>حقن مخدر إينترابيريتونيلي.</li>
	<li>ضع الماوس مرة أخرى إلى القفص وانتظر حتى يتم تخديره من الحيوان. تأكيد هو تخديره الماوس بشكل صحيح بسبب الافتقار إلى منعكس الدواسة.</li>
	<li>ضمان استخدام الليزر سلامة معدات الحماية الشخصية.</li>
	<li>قم بتشغيل مصباح شق وليزر صمام ثنائي 532 نانومتر.</li>
	<li>إزالة الماوس من القفص والمكان على منصة التدفئة.</li>
	<li>تطبيق قطره واحدة من تروبيكاميدي لتمدد الحدقة. الانتظار لمدة 3-5 دقيقة لتمدد الحدقة الكاملة (3 مم).</li>
	<li>ضع الماوس على المسرح مصباح الشق.</li>
	<li>ضع قطره واحدة من جل السائل أوبثالميك على ساترة إلى أبلاناتي القرنية.</li>
	<li>توجيه العين الماوس مع رأس العصب البصري في المركز.</li>
	<li>تعيين السلطة الليزر إلى 100 ميغاواط، والمدة إلى 100 مللي ثانية، وحجم البقعة إلى 50 ميكرومتر.</li>
	<li>وتركز شعاع الليزر على ظهارة صباغ الشبكية (RPE).</li>
	<li>جعل ثلاث طلقات الليزر إلى عين واحدة عن طريق تجنب الأوعية الدموية الشبكية في موقع مثالي في 4 و 8 و 12:00 م مواقع حول العصب البصري، على التوالي. فحص قاع العين بعد كل الليزر لقطات لعدم وجود نزيف الشبكية. العين كونترالاتيرال بمثابة عنصر تحكم غير lasered.</li>
	<li>تجاهل الماوس ساترة والمكان مرة أخرى على منصة التدفئة.</li>
	<li>تطبيق قطره واحدة من قطرات جل شماعة في كلتا العينين.</li>
</ol>2-التنمية المستدامة-OCT 6،7
<ol><li>ضع الماوس في مرحلة المحاذاة القوارض، وشل الرأس.</li>
	<li>قم بمحاذاة العدسة منظومة التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر (مثلاً، R2200 انفيسو بيوبتيجين/إيكا) لمواجهة العين للتصوير في فيفو باستخدام وحدات تحكم المرحلة X و Y.</li>
	<li>إجراء مسح SD، تشرين الأول/أكتوبر للتحقق من فواصل غشاء بروخ في: مجرد SD-OCT فحص العين كله، يدوياً نقل خط مرجعي في مواقع لاسيريد. فواصل غشاء بروخ في ينبغي أن تكون واضحة للعيان في المناطق lasered (انظر الشكل 1).</li>
</ol>3-فلوريسسين الأوعية 7،،من89
<ol><li>إزالة الماوس مع الحامل، ووضعه على نظام اتحاد كرة القدم (مثلاً، هايدلبرغ سبيكتراليس HRA2).</li>
	<li>التركيز على الليزر حرق مناطق قاع العين باستخدام طريقة انعكاس الأشعة تحت الحمراء مع رأس العصب البصري في منتصف نافذة عرض.</li>
	<li>حقن 0.1 مل ملح الصوديوم فلوريسسين 5% لماوس ز 20 تحت الجلد أو إينترابيريتونيلي.</li>
	<li>وتركز على مستوى تشورويدال.</li>
	<li>التقاط صورة من مستوى التركيز تشورويدال.</li>
	<li>إعادة التركيز على مستوى الشبكية وتأخذ صورة.</li>
	<li>انتظر 30 ثانية وكرر الخطوات 3، 3، 4-6.</li>
	<li>إزالة الماوس من الحامل ووضعه على منصة التدفئة.</li>
	<li>عكس التخدير بخصم α2 ميديتوميديني، أتيباميزولي (0.5 ملغ/كغ، والقائمة)، أو الانتظار لاستعادة الحيوانات من التخدير.</li>
	<li>كرر في فيفو SD، تشرين الأول/أكتوبر، واتحاد كرة القدم التصوير في تخديره من الحيوانات في متابعة أيام 5 و 10 و 14.</li>
</ol>4. متعددة الدرجات
<ol><li>درجة ضرر غشاء بروخ لمن أكتوبر والصور تشورويدال FA اتخاذها فورا بعد اللايزر في اليوم 0 كما يلي: 0--غشاء بروخ لعدم تضرر 1-نجاح تلف غشاء بروخ</li>
	<li>الصف وجود المسيحي من البقع lasered كان التسرب كما لوحظ بمقارنة ديناميات إشارة فلوريسسين في سلسلة من الصور فا الشبكية كما يلي: 0--المظهر الطبيعي لشبكية العين تلوين باهتة 0.5-التسرب 1.0-راشح متعددة المجالات ملاحظة: استخدام التصوير أكتوبر لتأكيد إضافية متعددة أو في كرة القدم مشكوك فيها حيث يوحي وجود السوائل إينتراريتينال في أكتوبر صور متعددة الدرجات.</li>
</ol>5-قياسات سمك الشبكية
<ol><li>استخدام برمجيات تجزئة تلقائية لقياسات سمك الشبكية. التأكد من أن يعتبر سمك الشبكية الكلي، كسمك كل الطبقات من طبقة الألياف العصبية RPE (مواقع القياس الصحي)، أو بخط وهمي يربط RPE المحيطة بموقع الضرر (lasered المواقع) (انظر الشكل 7).</li>
</ol>

<ol><li>Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+experimental+choroidal+neovascularization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol.+Chic.+Ill+1960%22%5BJournal%5D)">A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat.</a> Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).</li>
<li>Tobe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+neovascularization+in+mice+with+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).</li>
<li>Seo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+inhibition+of+retinal+and+choroidal+neovascularization+by+oral+administration+of+a+kinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor.</a> Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).</li>
<li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li>
<li>Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+for+Laser-induced+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization.</a> J Vis Exp. (106), e53502(2015).</li>
<li>Giani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).</li>
<li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+Image-Guided+Laser-Induced+Choroidal+Neovascularization+Model+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice.</a> PloS One. 10, e0132643(2015).</li>
<li>Sheets, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotectin+D1+attenuates+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse.</a> Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).</li>
<li>Hoerster, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+and+ex-vivo+characterization+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+variability+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol.+Albrecht+Von+Graefes+Arch.+Klin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).</li>
<li>Sulaiman, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Optical+Coherence+Tomography+Quantification+Method+for+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization.</a> J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).</li>
</ol>

صاحب البلاغ سيمانتاس راجوسكاس، دكتوراه هو الموظف (باحث) ومساهم في شركة اكسبيريمينتيكا أن يقدم عقد خدمات الأبحاث التي تستخدم النموذج المسيحي الإكلينيكية المستخدمة في هذه المقالة.
إيفا كيلكزيوسكي مقدم البلاغ هو موظف (مهندس تطبيقات البحوث، أكتوبر) Microsystems إيكا التي تنتج نظم التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر المستخدمة في هذه المقالة.
صاحب البلاغ فانس جوزيف موظف (أكتوبر نا مدير المبيعات) لايكا Microsystems تنتج نظم التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر المستخدمة في هذه المقالة. فانس جوزيف هو أيضا رئيس ومدير عام سبيكتيفي، شركة ذات مسؤولية محدودة.
المؤلف سيمون Kaja، دكتوراه هو مستشار رئيس العلمية ومساهم في اكسبيريمينتيكا المحدودة، هي عقد السريري بحوث منظمة عروض التعاقد على خدمات البحوث، الطراز المسيحي الإكلينيكية المستخدمة في هذه المادة بما في ذلك. سيمون Kaja، دكتوراه هو أيضا الرئيس التنفيذي لشركة ك & ف العلمية، شركة ذات مسؤولية محدودة، علوم الحياة، شركة استشارات، ويعمل كالدكتور جون ص وتيريز هاء مولكاهي وهبت أستاذ في طب العيون في "شيكاغو جامعة لويولا"، مدرسة ستريتش للطب. تم استعراض شروط هذا الترتيب وأقرتها "جامعة لويولا شيكاغو" وفقا لسياسة تضارب المصالح.
صاحب البلاغ جيدريوس كاليسنيكاس، دكتوراه هو الموظف (المدير التنفيذي) ومساهم في شركة اكسبيريمينتيكا أن يقدم عقد خدمات الأبحاث التي تستخدم النموذج المسيحي الإكلينيكية المستخدمة في هذه المقالة.

ويقدم التصوير المتعدد الوسائط أدوات قيمة لتقييم أمراض متعددة. وقد عرضنا هنا بروتوكولا تصوير تتألف من اتحاد كرة القدم، التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، وتجزئة التلقائي للتقييم السريع واستنساخه، وموثوق بها من أمراض متعددة. فاصل غشاء بروخ في بعد أن أكدت الإدارة الليزر. وباﻹضافة إلى ذلك، كما يسمح باستخدام SD، تشرين الأول/أكتوبر في هذه المرحلة التصور فوري لنزيف إينتراريتينال وسوبريتينال المحتملة، التي يمكن الخلط بين تفسير النتائج. تم تصنيف الثقوب الشبكية بناء على إشارة فلوريسسين من الصور اتحاد كرة القدم. استخدام SD، تشر...

أول محاولة ناجحة لتقليد علم الأمراض البشرية المسيحي في القوارض اتضح منذ ثلاثة عقود تقريبا مع ليزر كريبتون في لونغ-إيفانز الفئران1. وبعد ذلك، استخدمت ليزر كريبتون لكسر غشاء بروخ لسلالة الماوس الأكثر شعبية، C57BL/6J2،،من34. تم التحقق من معدل نجاح الاستقراء متعددة مع اتحاد كرة القدم والبقع النسيجي. تطور سريع لأساليب التصوير موسع، مثل OCT، عزز نمو مجال القوارض نماذج الإكلينيكية. القدرة على رصد التغييرات الشكلية في الشبكية في نقاط زمنية متعددة في العين نفسها إلى حد كبير يسهم في الحد استخدام الحيوانات، وزيادة الكفاءة في الدراسات التجريبية. التقييم النسيجي لآفات متعددة بدلاً من ذلك واضحة، ويتطلب وضع العلامات لنمو الأوعية الدموية غير طبيعي حول الموقع الإدارة الليزر، والحصول على الصور، وتقدير مساحة/وحدة التخزين باستخدام برنامج تحليل صورة. وفي المقابل، يعرض في فيفو طرائق التصوير تحاليل أكثر تعقيداً من أمراض متعددة وتفسيرها.
هنا نقدم طريقة بسيطة وسريعة نسبيا للصف التعريفي، والتدرج، والانحدار الذي استخدام FA، SD--أكتوبر، والأسلوب الآلي تجزئة في الماوس الليزر المستحثة المسيحي النموذجي.

<table><tbody><tr><td>ميديتوميدين (الاسم التجاري Domitor)</td> <td>Orion</td><td>Vnr 01 56 02</td><td>Anesthesia</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Intervet</td><td>Vnr 51 14 85</td><td>Anesthesia</td></tr><tr><td>0,9٪ NaCl</td><td>B Braun</td><td>357 0340</td><td>Anesthesia</td></tr><tr><td>Xylazine (الاسم التجاري Rompun vet)</td><td>Bayer</td><td>vnr 14 89 99</td><td>Anesthesia</td></tr><tr><td>Tropicamide</td><td>Santen</td><td>Vnr 04 12 36</td><td>Mydriatic وكيل</td></tr><tr><td>Viscotears</td><td>Alcon</td><td>Vnr 44 54 81</td><td>زيوت التشحيم</td></tr><tr><td>Systane</td><td>Alcon</td> <td>&nbsp ؛ -</td> <td>زيوت التشحيم</td></tr><tr><td>5٪ ملح الصوديوم الفلورسين</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6377-100G</td><td>عامل الفلورسنت</td></tr><tr><td>Atipamezole (الاسم التجاري Antisedan)</td> <td>Orion</td><td>Vnr 47 19 53</td><td>التخدير</td></tr></tbody></table>

في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر (المسيحي) نموذج راسخة لتقليد النموذج الرطب لكبر السن البقعي (AMD). في هذا البروتوكول، ونحن نهدف إلى توجيه القارئ ليس ببساطة من خلال الاعتبارات التقنية لتوليد آفات المستحثة بالليزر لتحريك عمليات نيوفاسكولار، ولكن بدلاً من التركيز على المعلومات القوية التي يمكن الحصول عليها من الطولية النقل المتعدد الوسائط المجراة في التصوير طوال فترة المتابعة.
الماوس المستحثة بالليزر النموذجي الذي تم إنشاؤها بواسطة إقامة ليزر صمام ثنائي. واستخدمت تقنيات التصوير المتعدد الوسائط في فيفو لرصد التعريفي المسيحي والتقدم والتراجع. أولاً، أنجز التصوير المقطعي التماسك الضوئية المجال الطيفي (SD--أكتوبر) فورا بعد اللايزر للتحقق من فاصل غشاء بروخ في. وأكد اللاحقة في فيفو التصوير باستخدام الأوعية فلوريسسين (اتحاد كرة القدم) الضرر ناجحة من غشاء بروخ لمن صور المسلسل المكتسبة على مستوى تشورويدال. متابعة طولية من الانتشار المسيحي والانحدار في أيام 5 و 10 و 14 بعد اللايزر أجرى باستخدام كل من التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر واتحاد كرة القدم. ويرد بسيطة وموثوق بها الدرجات من راشح المسيحي ليسيونس من الصور اتحاد كرة القدم. التجزئة التلقائية لقياس مجموع سمك الشبكية، جنبا إلى جنب مع تطبيق عيار يدوي لقياس سماكة الشبكية في مواقع متعددة، والسماح بتقييم غير متحيز لوجود وذمة. وأخيراً، النسيجي التحقق من الذي تتم باستخدام تلطيخ إيسوليكتين GS-IB4 على فلاتمونتس تشورويدال. تلطيخ ثريشولديد، ومنطقة إيسوليكتين-إيجابيا يحسب مع إيماجيج.
هذا البروتوكول مفيدة بشكل خاص في دراسات المداواة التي تتطلب عالية-الإنتاجية-مثل الفحص الباثولوجي المسيحي أنها تتيح سرعة، متعدد الوسائط، وتصنيف موثوق بها ذمة الشبكية وأمراض متعددة. وبالإضافة إلى ذلك، تمكن عالية الدقة التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر تسجيل بصمات المرضية الأخرى، مثل تراكم السوائل سوبريتينال أو إينتراريتينال. ومع ذلك، هذا الأسلوب لا يوفر إمكانية أتمتة تحليل حجم المسيحي من صور التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، الذي يجب أن تتم يدوياً.

فقاعة أو سوبريتينال النزيف فورا بعد اللايزر غير مرئي دائماً. ولذلك، أهمية خاصة للتحقق من الأضرار لغشاء بروخ في SD، تشرين الأول/أكتوبر. ويبين الشكل 1 مثال على تصوير أكتوبر عند نقاط زمنية مختلفة بعد الليزر.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig1.jpg"> الشكل 1 : أكتوبر أون الوجه رأي العين النظارة (صورة كبار الشخصيات) يظهر ثلاث...

نقدم هنا، فائدة التصوير الطولي في فيفو في متابعة التغييرات الشكلية من neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر في الفئران.

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

تُعد العمليات الوعائية الجديدة سمة مميزة للعديد من الأمراض العينية الشائعة، وأبرزها التنكس البقعي المرتبط بالسن النضحي، أو Wet AMD اختصاراً، واعتلال الشبكية السكري التكاثري، واعتلال الشبكية لدى الخداج. وتشكل هذه الاضطرابات مجتمعة معظم حالات العمى القانوني في جميع أنحاء العالم، وترتبط بمضاعفات عينية إضافية، مثل النزيف الزجاجي والمياه الزرقاء الوعائية الجديدة.ومع ذلك، وعلى الرغم من انتشارها، تظل الخيارات العلاجية لاضطرابات التوعي الدموي العيني محدودة. ويتمثل معيار الرعاية الحالي للتوعي الدموي المرتبط بالتنكس البقعي المرتبط بالسن (AMD) واعتلال الشبكية السكري التكاثري في الحقن داخل الجسم الزجاجي لأجسام مضادة مأنسنة موجهة ضد وسيط حاسم في عملية تكوين الأوعية الدموية والتوعي الدموي، وهو عامل نمو البطانة الوعائية أو VEGF. ولكن، وبالرغم من الفعالية في وقف تطور المرض وتحسين الرؤية الوظيفية، فإن الحقن داخل الجسم الزجاجي مكلفة وليست خالية من المخاطر.يمكن أن تشمل المضاعفات الإصابات العدوائية، والتهاب داخل المقلة، وانفصال الشبكية، والنزيف العيني. لذا، هناك حاجة ملحة لتطوير خيارات علاجية جديدة تكون فعالة وآمنة وأقل تكلفة. ومن أجل دفع عجلة تطوير الأدوية لعلاج الاضطرابات الوعائية الحديثة، تكتسب نماذج الحيوانات الصغيرة أهمية بالغة.يجب أن تكون هذه النماذج قابلة للتكرار، وأن تمتلك قراءات ونقاط نهاية محددة وموثقة، ومن المثالي أن تستخدم مركباً مرجعياً ذا صلة سريرية ليكون بمثابة ضابط موجب. سنعرض في هذا البروتوكول نموذج التوعي الحديث المشيمي في الفئران، أو نموذج CNV، وهو أحد أكثر النماذج استخداماً لدراسة الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تساهم في حدوث CNV وتطوير عوامل جديدة مضادة للتوعي الحديث. في نموذج CNV، يتم تمزيق غشاء Bruch باستخدام ليزر الأرغون.مما يؤدي إلى بدء عمليات تكوّن أوعية دموية جديدة تنشأ من المشيمية. ويوفر استخدام التصوير الطولي الحي عبر التصوير المقطعي المتساند بصرياً في المجال الطيفي، أو SD-OCT اختصاراً، وتصوير الأوعية بالفلوريسين، وسيلة لمتابعة تكاثر وتراجع CNV. وبذلك، يمكن تقييم فعالية والجدول الزمني للتدخلات الدوائية الجديدة.علاوة على ذلك، تتيح التطورات الحديثة في معالجة الصور إمكانية التقسيم الآلي لقياس سماكة الشبكية، مما يوفر منهجية خالية من تحيز الباحث لتقييم وجود الوذمة. سنناقش هنا فائدة برنامج InVivoVue Diver الجديد من شركة Leica Microsystems للتقسيم الآلي لطبقات الشبكية في نموذج CNV لدى الفئران. وأخيرًا، سنناقش كيف يمكن للتحليل النسيجي للعينات الكاملة من الشبكية أن يكمل التصوير الطولي داخل الجسم الحي في هذا النموذج.توضع قطرة واحدة من tropicamide في كل عين لتوسيع حدقة العين. بعد ذلك، يوضع الحيوان برفق في مرحلة محاذاة القوارض. يتم ضبط وضعية الفأر لكشف العين وتثبيته باستخدام حامل الأنف وقطعة من الشريط اللاصق المختبري توضع برفق فوق الظهر.بعد ذلك، يتم وضع قطرة من المزلق على العين للترطيب، ويتم إزالة أي سائل زائد بعناية باستخدام مسحات من ورق الترشيح. وأخيراً، يتم محاذاة المنصة أمام جهاز OCT لإجراء تصوير OCT المرجعي. يتم إجراء تصوير المقطع العرضي البصري في النطاق الطيفي (spectral-domain optical coherence tomography) داخل الجسم في المرحلة المرجعية، وذلك قبل تطبيق الليزر، للتحقق من عدم وجود أي تشوهات في الشبكية.أخرج الفأر برفق من الحامل. ضع قطرة واحدة من Viscotears Gel على شريحة غطاء لتسطيح القرنية. وجه الفأر بحيث يكون رأس العصب البصري في المركز، وركز شعاع الليزر على الظهارة الصبغية للشبكية.قم بإجراء ثلاث نبضات ليزر مع تجنب الأوعية الدموية الشبكية عند مواضع الساعة الرابعة والثامنة والثانية عشرة حول العصب البصري. افحص صلابة العين بعد جميع نبضات الليزر للتأكد من عدم وجود أي نزيف شبكي. وكما سبق، قم بمحاذاة الفأر في الحامل وأجرِ تصوير الأوعية بالفلوريسين وتصوير المقطع العرضي البصري (OCT) لتأكيد تضرر غشاء بروك.بالنسبة لتصوير الأوعية بالفلورسين، قم أولاً بضبط التركيز على مناطق الحرق بالليزر باستخدام وضع الانعكاس بالأشعة تحت الحمراء، والذي يسمح بتحديد المواقع التي تم فيها تطبيق الليزر. احقن بعناية 0.1 milliliters من ملح الصوديوم للفلورسين بتركيز 5%، لكل 20 grams تقريباً من وزن جسم الفأر دون تغيير وضعية عين الفأر. ابدأ في التقاط صور تصوير الأوعية بالفلورسين على مستوى المشيمية وعلى مستوى الشبكية، كل 30 seconds تقريباً.قم بمحاذاة العين للتصوير المقطعي للترابط البصري (OCT) كما سبق وابدأ التصوير. يساعد حساب متوسط إشارة SD-OCT في تحسين رؤية المورفولوجيا التفصيلية للشبكية، كما هو موضح في هذا التسلسل. بمجرد الانتهاء من تصوير SD-OCT، قم بإخراج الفأر من الحامل بعناية.ضع المادة الم lubricant لكلتا العينين. في هذه المرحلة، يمكنك اختيار عكس التخدير عن طريق الحقن تحت الجلد لمضاد alpha-2 للميديتوميدين، وهو أتيباميزول، أو الانتظار حتى يستعيد الحيوان وعيه من التخدير. كرر تصوير SD-OCT و FA في الجسم الحي للحيوانات المخدرة في أيام المتابعة الخامسة والعاشرة والرابعة عشرة.استخدم ميزة التجزئة الآلية في برنامج InVivoVue Diver لقياسات سمك الشبكية. بالنسبة للشبكية السليمة، يُعتبر إجمالي سمك الشبكية هو سمك جميع الطبقات، بدءاً من طبقة الألياف العصبية وصولاً إلى الظهارة الصباغية للشبكية (RPE). وفي الشبكية السليمة، يمكن للتجزئة الآلية تحديد الطبقات الفردية للشبكية بدقة، كما هو موضح في هذا المثال.ومن الجدير بالذكر أنه في المواضع التي يتواجد فيها تدمير وعائي Choroidal (CNV)، يجب إجراء قياس يدوي لسماكة الشبكية لكل موقع من مواقع آفات CNV على حدة، وذلك من طبقة الألياف العصبية إلى خط وهمي يمر عبر طبقة الظهارة الصباغية للشبكية (RPE). يوضح هذا التسلسل سير العمل لعمليات قياس السماكة اليدوية في المواضع التي توجد بها آفات CNV.تقع طبقة الألياف العصبية في الأعلى، والمشيمية في أسفل الصورة. باستخدام الماوس أو لوحة اللمس، يتم تحديد حدود طبقة الألياف العصبية والمشيمية يدوياً، ويقوم البرنامج تلقائياً بحساب السماكة الكلية للشبكية بناءً على هذه الإحداثيات. يوضح هذا الشكل صوراً متسلسلة تم التقاطها كل 20 ثانية عند مستوى المشيمية.تم الحصول على الصورة الأولى في وضع الانعكاس بالأشعة تحت الحمراء، بينما تم الحصول على الصور الأخرى بعد الحقن الصفاقي للفلوريسين. تشير الأسهم البيضاء في الصورة الأولى إلى المواقع التي تم تعريضها لليزر، والتي تظهر تسرباً للفلوريسين في نقاط زمنية لاحقة، وهو ما توضحه الأسهم البيضاء في الصورة 18.تظهر هذه الصورة تصويراً تسلسلياً بفلوروسين الصوديوم (FA) تم الحصول عليه على مستوى الشبكية. يشير السهم الأبيض في الصورة 18 إلى موقع تم تعريضه لليزر، والذي يظهر تسرباً للفلوروسين بشكل أسرع من الموقعين الآخرين المحددين بدوائر في الصورة 18. يوضح هذا الشكل الملخص التسلسل الزمني لصور التصوير المقطعي المتسق البصري ذو النطاق الطيفي (SD-OCT).عند نقطة الأساس، ومباشرة بعد استخدام الليزر، ونقاط المتابعة الزمنية في الأيام الخامس والعاشر والرابع عشر. وباختصار، فإن بروتوكول التصوير الطولي الحي لآفات CNV باستخدام تصوير SD-OCT وFA يتيح التصنيف السريع ومتعدد الأنماط والموثوق لباثولوجيا CNV ووجود الوذمة الشبكية. نشكركم على اهتمامكم.

in-vivo-multimodal-imaging-analysis-mouse-laser-induced-choroidal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

توضح هذه المقالة تسلسل الأحداث الأمثل للتصوير المتعدد الوسائط من الطعوم الخلوية في الدماغ القوارض باستخدام: (ط) في التألق الحيوي المجراة والتصوير بالرنين المغناطيسي، و (ب) تحليل التشريح النسيجي. الجمع بين هذه الطرائق التصوير على حيوان وحيد يسمح تقييم الكسب غير المشروع الخليوي مع حساسية عالية، وخصوصية القرار.

التصوير المتعدد الوسائط من زرع الخلايا الجذعية في الجهاز العصبي المركزي من الفئران

المصدر: بوسكو، أ.،  وآخرون.  In Vivo ديناميكيات تنشيط الشبكة الدبقية الدقيقة أثناء التنكس العصبي: التصوير بالمنظار متحد البؤر وقياس شغور الخلايا في الجلوكوما الفأرية. J. Vis. Exp. (2015) } يوضح هذا الفيديو التصوير في الجسم الحي للشبعية الدبقية الصغيرة في نموذج فأر من الجلوكوما. يتم وضع فأر معدل وراثيا مع الخلايا الدبقية الصغيرة الشبكية التي تعبر عن البروتين الفلوري تحت منظار العين. تستخدم إضاءة الأشعة تحت الحمراء لتحديد موقع رأس العصب البصري (ONH) ، ويتم إنشاء المستوى البؤري باستخدام الأوعية...

التصوير في الجسم الحي للدبقية الصغيرة في الشبكية في نموذج فأر من الجلوكوما

هنا ، نقدم بروتوكول الأوعية الدموية المشيمية الجديدة (CNV) الناجم عن ليزر الفأر ، وهو نموذج تجريبي يعيد إنشاء السمات المميزة للأوعية الدموية للتنكس البقعي المرتبط بعمر الأوعية الدموية الجديدة (AMD). بمجرد إتقانها ، يمكنها تحفيز CNV بشكل موثوق وفعال كنظام نموذجي لاختبار التدابير التجريبية المختلفة.

نموذج الفأر ليزر بفعل اتساع الأوعية الدموية المشيمية

ويصف هذا البروتوكول عالية الدقة كيف تقنيات التصوير مثل التصوير المقطعي التماسك الضوئية المجال الطيفي وفحص تنظير العين الليزر يمكن أن تستخدم في القوارض الصغيرة، باستخدام نظام منصة تصوير العيون، للحصول على معلومات حول ميكروجليال وسمك الشبكية خلية التوزيع، على التوالي.

في فيفو التصوير من "الفئران مراسل" Cx3cr1التجارة والنقل/التجارة والنقل مع المجالات الطيفية الضوئية التماسك التصوير المقطعي وفحص تنظير العين الليزر

هنا هو منصة مجهرية متعددة الصور للتصوير حية سطح العين الماوس. الماوس الفلوري المحورة تمكن من تصور نواة الخلية، أغشية الخلية، والألياف العصبية والشعيرات الدموية داخل سطح العين. توفر إشارات الجيل التوافقي الثاني غير الخطي المشتقة من الهياكل الكولاجينية تصويرًا خاليًا من التسمية لبنيات ال stromal.

مخصص متعدد الصور المجهر منصة للتصوير الحي من القرنية ماوس وConjunctiva

التصوير في الجسم الحي هو أداة قوية لدراسة علم الأحياء في الصحة والمرض. يصف هذا البروتوكول التصوير عبر الحدقتين لشبكية الفأر باستخدام مجهر قياسي ثنائي الفوتون. كما أنه يوضح اختلافا في طرق التصوير الحي لتسمية مجموعات خلوية متعددة من شبكية العين.

تصوير الفوتون عبر الحدقة في الجسم الحي لشبكية العين الفأرية

هنا ، نصف بروتوكولا محسنا لانسداد الوريد الشبكي باستخدام وردة البنغال ونظام مجهر تصوير الشبكية الموجه بالليزر مع توصيات لزيادة قابليته للتكاثر في السلالات المعدلة وراثيا.

تحسين نموذج ماوس انسداد الوريد الشبكي للحد من التباين

هنا ، نصف تقنية التصوير في الجسم الحي باستخدام التصوير المقطعي للتماسك البصري لتسهيل التشخيص والقياس الكمي لاعتلال الشبكية في الفئران.

تطبيق التصوير المقطعي للتماسك البصري على نموذج فأر لاعتلال الشبكية

هنا ، نقدم ثلاثة بروتوكولات لتحليل البيانات لتصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) والتصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) في دراسة انسداد الوريد الشبكي (RVO).

في الجسم الحي قراءات إصابة الأوعية الدموية في شبكية الفأر لتعزيز التكاثر

يصف هذا البروتوكول زرع وتقييم سرطان الجلد في المشيمية الفئران باستخدام التصوير المقطعي للتماسك البصري.

زرع وتقييم سرطان الجلد في المشيمية الفئران عن طريق التصوير المقطعي للتماسك البصري

تعلم التصوير الطولي في الفئران باستخدام SD-OCT والتصوير بالفلورسين لتتبع نمو الأوعية المشيمية المستحثة بالليزر. تتيح هذه الطريقة تقييم فعالية العلاجات المضادة للتكوّن الوعائي بدقة عالية.

في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال

استكشف المزيد من الفيديوهات