Name: تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية عن طريق حقن صبغة أزرق الميثيلين (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: تعلم تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية في أجنة الفئران باستخدام حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي. هذه الطريقة البسيطة تُمكّن الباحثين من تصور الهياكل التناسلية البولية ودراسة التطور الجنيني.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

أود أن أشكر الدكتور ألن سين بيرانتونى (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لدعم تقديم هذه المخطوطة. أود أيضا أن أشكر الدكتور مايكل هول (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) و Nirmala شارما (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لتحرير هذه المخطوطة. أنا ممتن لأي ثانغ (سايك) لتربية ماوس ممتازة له. وأيد هذا العمل المعاهد الوطنية للصحة، المعهد الوطني للسرطان، ومركز "أبحاث السرطان".

الفئران (فلكس Wnt5a/فلكس الفئران (Wnt5a tm1.1Tpy) وخط Dll1Cre، ونموذج الماوس أوفجو) 7 تدار وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ودراسة في إطار بروتوكول أقرته لجنة الاستخدام ورعاية الحيوان NCI-فريدريك.
 1-"إعداد حل صبغة أزرق الميثيلين" <ol><li>قياس مسحوق أزرق الميثيلين 0.1 غ.</li>
	<li>حل أزرق الميثيلين في المحلول الملحي العادي 10 مل أو 1 × الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) تماما بواسطة فورتيكسينج.</li>
	<li>تصفية الحل الميثيلين الأزرق 10 ملغ/مل مع عامل تصفية المحاقن (حجم المسام غشاء 0.45µm) للقضاء على انسداد أثناء حقن.</li>
	<li>تجميع فروة الرأس عقيمة الوريد مجموعة (27GX3/4 &#8243;) مع 3 مل حقنه المتاح وملء المحاقن مع 3 مل تصفية حل أزرق الميثيلين. 
	ملاحظة: لمنع الضغط الهيدروليكي وتدفق صبغ اللاحقة، ضع طرف إبرة أعلاه حقنه مليئة الأزرق الميثيلين الحل.</li>
</ol> 2. تشريح الأجنة "قبل الولادة" <ol><li>نظيفة تشريح المقص والملقط مع الإيثانول 70%-</li>
	<li>لجمع الأجنة قبل الولادة في E18.5 أو E19.5، euthanize الفئران الحوامل استخدام استنشاق أول أكسيد الكربون 2 أولاً ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة- 
	ملاحظة: الماوس الإناث الحوامل وعادة ما تلد البدء في E18.5، إلا أن الكليتين أكبر أسهل للتعامل معها. ولذلك، الكلي في E19.5 أقرب للولادة أسهل لإجراء هذا التحليل على. ومع ذلك، من الجراء مع المسالك البولية ثنائية العراقيل يموت بعد الولادة. وينبغي تبعاً لخصائص الفئران التجريبية، تحديد يوم أو وقت جمع مناسب تجريبيا.</li>
	<li>رذاذ الإيثانول 70% على سطح البطن البطني ثم قم بفتح التجويف البطني بطنيا باستخدام مقص وملقط تشريح.</li>
	<li>رفع الرحم كامل وفصل من الجسم بالقطع مع تشريح مقص على نصائح قرون الرحم.</li>
	<li>شطف الرحم كامل مع برنامج تلفزيوني 1 x في طبق بيتري.</li>
	<li>الرحم سيجمينتالي مع تشريح مقص قطع وإزالة المشيمة أوروبية مع تشريح الملقط للكشف عن الأجنة في الأكياس صفار.</li>
	<li>إزالة كيس الصفار أولاً ومن ثم إزالة الغشاء السلوى بتشريح الملقط لتحرير الأجنة قبل الولادة-</li>
	<li>قطع رأس جنين بتشريح المقص. تمحو الدم الزائد مع منصات شاش معقم. دبوس الجنين إلى أسفل مع سطحه البطني حتى على مجهر تشريح مجهزة بكاميرا رقمية للتصوير. جمع ذيله للتنميط إذا لزم الأمر- 
	ملاحظة: إجراء حقن الأجنة واحد في وقت واحد.</li>
	<li>بعناية فتح التجويف البطني للجنين بالملقط بتمزق الجلد. ثم، بعناية إزالة الزائدة والأنسجة مثل الكبد والمعدة والأمعاء بالملقط بقصها أو الانسحاب منها لفضح الكليتين والحالب والمثانة التي تقع في دورسالي ( الشكل 1A). امتصاص الدم الزائد من تشريح الجنين مع منصات شاش معقم إذا لزم الأمر- 
	ملاحظة: الدم الزائد يتداخل مع تحديد الحوض الكلوي لحقن صبغة.</li>
</ol> 3. حقن صبغة "أزرق الميثيلين" إلى الحوض الكلوي ورصد تدفق صبغ <ol><li>إزالة الفقاعات في الإبر والأنابيب بطرد أزرق الميثيلين الحل من طرف الإبرة بالضغط الهيدروليكي. رفع المحاقن التي تحتوي على الحل صبغ فوق مستوى الحافة إبرة لبدء تدفق، وثم انخفاض المحاقن لوقف التدفق.</li>
	<li>أدخل الإبرة في الحوض الكلوي قرب الحالب الدانية، مع الحرص على عدم الإخلال بأنها وضعت مرة واحدة. إجراء حقن صبغة في الكلي لتحديد به انسداد المسالك البولية. 
	ملاحظة: إجراء صبغ حقن في أي الكلي غير طبيعي 7 الأولى باتباع نفس الطريقة لتحديد به انسداد المسالك البولية.</li>
	<li>رفع المحاقن يصل حوالي 20 سم لتوفير الضغط الهيدروليكي واسمحوا ميليلتر 15-60 ميليلتر من تدفق الحل الصبغ. معدل التدفق ستكون حوالي 3 ميليلتر/s إذا أثير المحاقن لهذا الارتفاع فوق الجنين.</li>
	رصد <li>اللون الأزرق لصبغ ابتداء من أول في الحوض الكلوي، ثم في طول الحالب، وأخيراً في التجويف المثانة. 
	ملاحظة: يستغرق حوالي 5 s لمشاهدة لون صبغة ضعيفة تنشأ داخل التجويف المثانة إذا كان يتم بشكل صحيح إدراج الحالب في المثانة. تسمح الصبغة تتراكم في موقع المحظورة حوالي 15 ثانية إذا ظهر أي لون الصبغة في تجويف المثانة.</li>
	<li>مكان المحاقن وصولاً إلى وقف تدفق صبغ وإزالة الإبرة من الكلي.</li>
	<li>تأخذ الصور الكلي والحالب والمثانة تتبع مع الحل صبغ استخدام الكاميرا والتصوير البرنامج متصلاً ستيريوميكروسكوبي.</li>
	<li>جعل سجل hydronephrosis الكلي، هيدروريتير، والموقف النهائي للحل صبغ في دفتر ملاحظات معمل.</li>
	حقن <li>أداء الكلي كونترالاتيرال كما هو موضح في المقاطع 3.1) إلى 3.5) والسماح بتدفق صبغ حوالي 20 s في المجموع- 
	ملاحظة: سيتم ملء التجويف المثانة مع الحل الصبغ، المبين بلون أزرق قوي، إذا كان الحالب يتم إدراجها بشكل صحيح في تجويف المثانة. بعد تقييم لعرقلة مفرق المسالك البولية، يمكن أن تكون ثابتة الحالب والمثانة من أجل تمزيقها.</li>
</ol>

<ol><li>Rasouly, H. M., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+urinary+tract+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Lower urinary tract development and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).</li>
<li>Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Box+Genes+in+the+Kidney+and+Urinary+Tract%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract.</a> Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).</li>
<li>Bohnenpoll, T., Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ureter+growth+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Ureter growth and differentiation.</a> Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).</li>
<li>Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic%2C+environmental%2C+and+epigenetic+factors+involved+in+CAKUT%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT.</a> Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).</li>
<li>Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+canonical+Smad+signaling+in+ureteral+and+bladder+mesenchyme+causes+ureteropelvic+junction+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction.</a> J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).</li>
<li>Aoki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Id2+haploinsufficiency+in+mice+leads+to+congenital+hydronephrosis+resembling+that+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cells%22%5BJournal%5D)">Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans.</a> Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).</li>
<li>Yun, K., Perantoni, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydronephrosis+in+the+Wnt5a-ablated+kidney+is+caused+by+an+abnormal+ureter-bladder+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection.</a> Differentiation. 94, 1-7 (2017).</li>
<li>Uetani, N., Bouchard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plumbing+in+the+embryo%3A+developmental+defects+of+the+urinary+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Genet%22%5BJournal%5D)">Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts.</a> Clin Genet. 75, 307-317 (2009).</li>
<li>Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+urinary+tract+defects+in+mice%3A+methods+to+detect+the+presence+of+vesicoureteric+reflux+and+urinary+tract+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction.</a> Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).</li>
<li>Weiss, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephric+duct+insertion+requires+EphA4%2FEphA7+signaling+from+the+pericloacal+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme.</a> Development. 141, 3420-3430 (2014).</li>
</ol>

ليس له علاقة بالكشف عن صاحب البلاغ.

الماوس الكلي الوظيفية بدءاً E16.5 واختبار حقن صبغة من الممكن نظرياً من هذه النقطة الزمنية. ومع ذلك، الكلي صغير جداً بالحقن مع الحل صبغ وتعمل مثل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير لا تراعي وضوح حيث تعمل هذه تأثير ثانوية من البول التي تراكمت بسبب النقل البول غير طبيعي. وتتضح هذه تعمل، من العراقيل مثل آبجو أو أوفجو، في E18.5 منتفخة الكليتين والحالب. الكلي أكبر من الأجنة في E19.5 أو المواليد الجراء أسهل للتعامل مع تلك الأجنة في E18.5 أو الأصغر سنا. ومع ذلك، من الجراء مع المسالك البولية ثنائية العراقيل يموت بعد الولادة. لذلك، إجراء ت...

الجهاز البولي يتكون من زوج من الكلي والحالب والمثانة ومجرى البول مشتركة. والوظيفة الرئيسية للجهاز البولي المحافظة على التوازن الجسم بإدارة توازن الماء والكهرباء للدم. الكلي تصفية الدم لتركيزات اﻻلكتروﻻيت التحكم وحمض قاعدة التوازن، وإنتاج البول تفرز فائض المياه والنفايات بما في ذلك الذوائب ونواتج الأيض. ثم يتم نقل البول من خلال الحالب من الحوض الكلوي الكلي إلى بلاديرين بطريقة أحادية الاتجاه حيث يتم تخزينها والقضاء عليها في نهاية المطاف عن طريق الاحليل1.
الحالب أنابيب مستقيمة مصدرها القناة ونمائية. بعد الناشئين من لاصق ونمائية يوم الجنينية 10.5 (E10.5) في الماوس، ساق الحالب الغضروفي ويفرق في بنية متعددة الطبقات تسمى أوروثيليوم وكتيمه بين الماوس E12.5 و E16.5. كما تختلف الخلايا الوسيطة التي تحيط بساق الحالب إلى ثلاث طبقات مكونة من الخلايا اللحمية الداخلية وخلايا العضلات الملساء سميكة الوسيطة الليفية أدفينتيتيال الخارجي. موجات تمعجية الحالب الشروع في الحوض الكلوي تنتشر من خلال طبقة العضلات الملساء لجدار الحالب إلى المثانة لنقل البول2،3، الذي يتم إنتاجه في بداية E16.5 في الماوس1.
التشوهات الخلقية في الكلي والمسالك البولية (كاكوت) من بين الأمراض الوراثية الأكثر شيوعاً، في حوالي 1 في المائة من الأجنة البشرية1،4، وتتألف من مجموعة متنوعة من تعمل بما في ذلك هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويؤدي التراكم غير طبيعي للبول في الكلي والحالب تشكيل هيدرونيفروتيك hydroureter والكلى. أحد الأسباب لتشكيل هيدرونيفروسيس و/أو هيدروريتير من انسداد المسالك البولية. انسداد مفرق أوريتيروبيلفيك (أوبجو) بسبب تدفق البول الشاذة بسبب انسداد الحالب الدانية بين الحوض الكلوي، مما أدى إلى هيدرونيفروسيس وتضييق hydroureter الدانية مع أنجولاتيون أو المستمرة للطي5، 6. وباﻹضافة إلى ذلك، إدراج الحالب القاصي حمل خارج الرحم في جدار المثانة أو المسالك التناسلية يسمى عرقلة مفرق أوريتيروفيسيكال (أوفجو). يمكن أيضا لحمل أوفجو هيدرونيفروسيس وهيدروميجوريتير7،تشكيل8. هو عيب مفرق (أوفج) أوريتيروفيسيكال إضافية الجزر فيسيكوريتيريك (فور). فور يتسم بالتدفق إلى الوراء البول من المثانة نحو الكلي في أوفج. بالمقارنة مع أوفجو، الأجنة قبل الولادة مع فور لا واضح إظهار الكلي منتفخة هيدرونيفروتيك أو هيدروريتير الشديد النمط الظاهري9.
في مختبر الماوس، يمكن دراسة تدفق البول بحقن صبغة، مثل الميثيلين الأزرق، في الحوض الكلوي9. الحل إينجيكتيدميثيليني الأزرق وسوف تتبع مسار البول من الحوض الكلوي عن طريق الحالب والمثانة. Hydronephrosis يمكن أن تعترف بزيادة الصبغة في الكلي. ويمكن الكشف عن آبجو كانسداد تدفق الصبغة في الحالب الدانية مع الحوض الكلوي منتفخة5. أي تمدد الحالب المؤشرة قطرها اتسعت يوضح مثال على هيدروريتير. أخيرا، يشير إلى أوفجو مع هيدرونيفروتيك منتفخة الكلي تراكم صبغ في جدار المثانة أو في موقع المسالك التناسلية والمتوسعة7،هيدروميجوريتير10. للكشف عن فور، يتم حقن الحل صبغ في المثانة ورصد تدفق تراجعية لاحقة في الكلي9.
ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين إلى الحوض الكلوي الجنين قبل الولادة. هذا البروتوكول يسمح لتعقب تدفق البول من الحوض الكلوي من خلال الحالب والمثانة والتحقق من المسالك البولية مفرق العراقيل المحتملة مثل آبجو أو أوفجو.

<table><tbody><tr><td>الميثيلين الأزرق</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>M9140</td><td></td></tr><tr><td>الجودة البيولوجية Inc. عادي الملح - 500 مل</td><td>فيشرساينتيك</td><td>50-983-204</td><td></td></tr><tr><td>3 مل حقنة يمكن التخلص منها مع طرف BD Luer-Lok</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>مرشحات حقنة Acrodisc مع Supor Membrane</td><td>Pall corporation</td><td>4614</td><td></td></tr><tr><td>Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets؛ 27G × 3/4 " 12"&nbsp;</td><td>EXELINT</td><td>26709</td><td></td></tr><tr><td>مقص التشغيل الدقيق</td> شركة <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-6702</td><td></td></tr><tr><td>ملقط تشريح دقيق</td><td>شركة Roboz للأدوات الجراحية</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>ملاقط دومون ؛ النمط # 5</td><td>شركة روبوز للأدوات الجراحية</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>BD إبر PrecisionGlide 30 جم × 1/2 بوصة</td> <td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية عن طريق حقن صبغة أزرق الميثيلين

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب هي التشوهات الخلقية حمل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. يمكن تقييم المسالك البولية موريني مفرق عرقلة العيوب من خلال تتبع تدفق صبغة أزرق الميثيلين داخل الجهاز البولي. يتم حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي للكلى الجنينية قبل الولادة، ورصد تدفق صبغ من الحوض الكلوي الكلي عن طريق الحالب وفي التجويف المثانة بعد الضغط الهيدروستاتي. تراكم صبغ سيكون واضحا في التجويف المثانة المسالك البولية الفترة المحيطة بالولادة الطبيعية، ولكن ستكون مقيدة بين الحوض الكلوي ونقطة نهاية الحالب غير طبيعي، في حالة حدوث عوائق المسالك البولية. ويسهل هذا الأسلوب تأكيدا للمسالك البولية مفرق العراقيل والتصور هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويصف هذه المخطوطة بروتوكول لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي لتأكيد العراقيل مفرق المسالك البولية.

تقع الظهرية لمعظم الأعضاء الداخلية مثل الكبد والأمعاء والكلى والجهاز البولي السفلي. بعد إزالة هذه الأجهزة الداخلية الأخرى، هي زوج من الكلي والحالب ومثانة مفردة مرئية (الشكل 1A). عند تشريح ناجحة، سوف يتدفق صبغ حقن الحوض الكلوي من الكلي إلى المثانة عن طريق الحالب. الحوض الكلوي هو الجزء الشبيهة بالقمع الدانية متسعة من الحالب في الكلي. ولذلك، نقطة حقن صبغة بالقرب من الحالب الدانية مرئية متصلة مع الكلي كما هو مبين بالأسهم السوداء (الشكل 1B</st...

حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي يسهل تقييم المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب أثناء تطوير المسالك البولية الجنينية الماوس. ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي.

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد انسدادات وصلات المسالك البولية عن طريق حقن صبغة الميثيلين في الكليتين. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال تطور الكلى والمسالك البولية السفلية، مثل اتصال الحالب بالمثانة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر طريقة بسيطة لتصور بنية المسالك البولية في أسوأ حالات تطور الكتلة، مما يتيح تحليل تطور المسالك البولية.لبدء التجربة، قم بقياس 0.1 جرام من مسحوق أزرق الميثيلين. أذب أزرق الميثيلين في 10 مليلتر من المحلول الملحي المنظم بالفوسفات (PBS) بتركيز 1x وقم برج الخليط باستخدام جهاز الفورتكس. بعد ذلك، قم بترشيح محلول أزرق الميثيلين بتركيز 10 مليجرام/مليلتر باستخدام مرشح حقنة لمنع حدوث انسداد أثناء الحقن.بعد ذلك، قم بتجميع مجموعة وريد فروة الرأس معقمة مع محقنة مجهزة للاستخدام مرة واحدة سعة ثلاثة ملليلتر، واملأ المحقنة بثلاثة ملليلتر من محلول ميثيلين الأزرق المفلتر. قم بتنظيف مقص التشريح والملاقط باستخدام 70%ethanol. لجمع الأجنة في الفترة المحيطة بالولادة عند E18.5 أو E19.5، قم أولاً بقتل الفئران الحوامل عن طريق استنشاق ثاني أكسيد الكربون.بعد ذلك، يتم إجراء خلع الرقبة وفقاً لإرشادات معاهد الصحة الوطنية (NIH). ثم يُرش الإيثانول بتركيز 70% على السطح البطني ventral للحيوان. ثم باستخدام مقص التشريح الموّقع وملقط، يتم فتح التجويف البطني من الناحية البطنية.ارفع الرحم بالكامل وافصله عن الجسم عند أطراف القرون الرحمية. بعد ذلك، اشطف الرحم بالكامل باستخدام 1x PBS في طبق بتري. قم بقص الرحم بشكل قطاعي باستخدام مقص التشريح، وأزل الساقط المشيمي باستخدام ملقط التشريح للكشف عن الأجنة وكيس المح. قم بإزالة كيس المح الأول، ثم أزل الغشاء السلوي باستخدام ملقط التشريح لتحرير الأجنة في الفترة المحيطة بالولادة. قم بفصل رأس الجنين باستخدام مقص التشريح. ثبّت الجنين بحيث يكون سطحه البطني للأعلى تحت مجهر تشريحي مجهز بكاميرا رقمية للتصوير.اجمع الذيل لإجراء التنميط الجيني. وباستخدام الملاقط، مزق الجلد بعناية لفتح التجويف البطني للجنين. ثم قم بإزالة الأعضاء والأنسجة الزائدة بعناية، مثل الكبد والمعدة والأمعاء، باستخدام الملاقط عن طريق قطعها أو سحبها للخارج للكشف عن الكلى والحالبين والمثانة الموجودة في الجهة الظهرية.امتص الدم الزائد من الجنين المشرح باستخدام وسادات شاش معقمة، ثم انتقل إلى حقن الصبغة. تخلص من الفقاعات الموجودة في الإبرة والأنابيب عن طريق دفع محلول ميثيلين الأزرق من طرف الإبرة باستخدام الضغط الهيدروستاتيكي. ارفع المحقنة التي تحتوي على محلول الصبغة فوق مستوى طرف الإبرة لبدء التدفق.ثم اخفض المحقنة لإيقاف التدفق. بعد ذلك، أدخل الإبرة في حويضة الكلية بالقرب من الحالب الداني، مع الحرص على عدم تحريكها بمجرد وضعها. قم بحقن الصبغة في الكلية لتحديد ما إذا كان هناك انسداد في المسالك البولية.بعد إدخال إبرة واحدة في حوض الكلية لضمان نجاح هذا الاختبار، يجب إدخال إبرة في حوض الكلية باتجاه الحالب، بحيث لا تمر عبر الكلية ولا تتجه نحو الوعاء الدموي. ارفع المحقنة إلى ارتفاع 20 centimeters تقريباً لتوفير ضغط هيدروستاتيكي، واترك 15 إلى 16 µL من محلول الصبغة تتدفق. ثم راقب اللون الأزرق للصبغة بدءاً من حوض الكلية، ثم على طول الحالب، وأخيراً في تجويف المثانة.ضع المحقنة لأسفل لإيقاف تدفق الصبغة، ثم اسحب الإبرة من الكلية. قم بتسجيل حالة استسقاء الكلية، واستسقاء الحالب، والموضع النهائي لمحلول الصبغة في دفتر المختبر. أخيراً، قم بإجراء الحقن في الكلية المقابلة واترك الصبغة تتدفق لمدة 20 ثانية إجمالاً.التقط صوراً للكلية والحالب والمثانة المصبوغة بمحلول الصبغة باستخدام الكاميرا وبرنامج التصوير المتصل بالمجهر الستيريوسكوبي. بعد الحقن في إحدى الكليتين، تتدفق صبغة ميثيلين الأزرق من حويضة الكلية عبر الحالب وصولاً إلى المثانة، مما يؤدي إلى ظهور لون أزرق مرئي في تجويف الحالب والمثانة. ويظهر لون أزرق أكثر كثافة في تجويف المثانة نتيجة التدفق لفترة أطول، وذلك بعد حوالي 20 ثانية من حقن كلتا الكليتين بالصبغة، مما يشير إلى عدم وجود انسداد في وصلات المسالك البولية في الجهاز البولي الثاني.عند حقن حالب متوسع بشكل غير طبيعي، يكون الموضع النهائي لمحلول الصبغة غير واضح. ولا يمكن التحقق من انسداد الوصلة الحالبية المثانية (UVJO) رغم غياب الصبغة عن تجويف المثانة، وذلك بسبب تضرر الحالب المتوسع في المنتصف. وأثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر حساب أكياس الصبغة في الأجنة المحيطة بالجنين للحصول على جهاز بولي سليم.وإزالة الفقاعات لضمان عدم إعاقة تدفق الصبغة.

assessing-urinary-tract-junction-obstruction-defects-methylene-blue

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

فقدان النزاهة البريتوني يقدم نموذجا جديدا لفهم وعلاج الألم الحوضي المزمن عند النساء مع الأشكال الخفيفة من التهاب بطانة الرحم، ويمكن أن يتم الكشف عن أثناء العملية بسهولة باستخدام تقطير صبغة في وقت تنظير البطن.

جراحة داخلية الكشف عن بطانة الرحم خفية: نموذج رواية لاكتشاف وعلاج آلام الحوض المصاحبة لفقدان النزاهة البريتوني

التحقيق القائم على الليزر endomicroscopy مبائر تمكن في الوقت الحقيقي المجهري في المسالك البولية أثناء تنظير المثانة الإنسان، وتوفير دينامية، والتصوير intravital من الحالات المرضية مثل سرطان المثانة لقرار الخلوية. قد Endomicroscopy زيادة دقة التشخيص على مستوى التنظير الضوء الأبيض أثناء العملية وتوفير التوجيه لتحسين صورة استئصال الجراحي.

التحقيق المستندة إلى Endomicroscopy الليزر متحد البؤر في المسالك البولية: تقنية

في هذا الفيديو ، نقوم بإعطاء حقن صبغة الميثيلين الزرقاء في المسالك البولية للفأر الجنيني في الفترة المحيطة بالولادة لتقييم التشوهات الخلقية المتعلقة بانسداد المسالك البولية.

حقن صبغة الميثيلين الزرقاء في المسالك البولية الجنينية للفأر: طريقة لتقييم الانسداد الخلقي في المسالك البولية

تصوير المثانة الضوئي (PAC) لديها امكانات كبيرة لرسم خريطة قربة البولية، الأشعة جهازا الداخلية الحساسة في طب الأطفال المرضى، من دون استخدام أي الإشعاع المؤين أو عامل تباين السامة. نحن هنا لشرح استخدام PAC لرسم خرائط قربة البول مع حقنة من استشفاف البصرية مبهمة في...

تصوير المثانة الضوئي

تقطير transurethral هو إجراء صعبة ولا يوصف كذلك في الأدب. والهدف من هذه المخطوطة لوصف تقنية لإدخال قسطرة لتسليم إينترافيسيكال من السوائل المحتوية على المواد النشطة في المثانة و/أو البروستاتا في الفئران الذكور البالغين ترانسوريثرال.

تقطير ترانسوريثرال الداخلي في الماوس الذكور البالغين

نحن نصف استخدام الموجات فوق الصوتية عالية التردد مع التصوير على النقيض من ذلك كوسيلة لقياس حجم المثانة، سمك جدار المثانة، سرعة البول، حجم الفراغ، مدة الفراغ، وقطر مجرى البول. ويمكن استخدام هذه الاستراتيجية لتقييم خلل الفراغ وفعالية العلاج في نماذج الماوس المختلفة من خلل في المسالك البولية السفلى (LUTD).

التصوير بالموجات فوق الصوتية للمسالك البولية الذكور الكبار للاختبار الوظيفي البولي

يصف هذا البروتوكول الإجراء الخاص بقياس تركيزات ATP في تجويف المثانة في القوارض المخدرة.

في الجسم الحي القياس اللمعي لإطلاق ATP اليوروتيني المستحث بالانتفاخ في القوارض

يوفر هذا البروتوكول دليلا لعزل الجلد باستخدام cyanoacrylate لمنع امتصاص البول عن طريق الفراء والجلد. يتضمن تعليمات لتطبيق الغراء على الجلد ، وزرع قسطرة المثانة ، وأقطاب لقياس المثانة وتسجيلات تخطيط كهربية العضلة العاصرة للإحليل الخارجية في الفئران المستيقظة.

تحسين تقنيات ديناميكا البول للماوس لتحسين الدقة 

يصف البروتوكول الحالي نموذجا تدريجيا وقابلا للتكرار لانسداد الحالب من جانب واحد.

نموذج الفئران غير الناضج لانسداد الحالب أحادي الجانب القابل للانعكاس

تطبيق الكهربية لنقاط الاشتباك العصبي للوصول يوفر قدرا من النشاط متشابك قابلة للقياس الكمي ، ومفيدة في تحليل المسوخ متشابك. توضح هذه المقالة أسلوب تشريح المستخدمة للكشف عن الوصلات العصبية والعضلية (NMJ)...

تشريح والتسجيل من مفرق العضلية جيم ايليجانس

تعلم تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية في أجنة الفئران باستخدام حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي. هذه الطريقة البسيطة تُمكّن الباحثين من تصور الهياكل التناسلية البولية ودراسة التطور الجنيني.

تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية عن طريق حقن صبغة أزرق الميثيلين

استكشف المزيد من الفيديوهات