تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية عن طريق حقن صبغة أزرق الميثيلين

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد عوائق تقاطعات المسالك البولية عن طريق حقن صبغة الميثيلين في الكلى. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال نمو الكلى والمسالك البولية السفلية، مثل اتصال المثانة المبولية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر طريقة بسيطة لتصور بنية المسالك البولية في أسوأ الحالات ، مما يتيح تحليل نمو المسالك البولية.

لبدء التجربة ، قم بقياس 0.1 جرام من مسحوق الميثيلين الأزرق. قم بإذابة الميثيلين الأزرق في 10 ملليلتر من محلول ملحي مخزن 1x من الفوسفات أو PBS ودوامة الخليط. بعد ذلك ، قم بتصفية محلول الميثيلين الأزرق 10 ملليغرام لكل مليلتر باستخدام مرشح حقنة للتخلص من الانسداد أثناء الحقن.

ثم قم بتجميع مجموعة وريد فروة الرأس المعقمة مع حقنة يمكن التخلص منها ثلاثة ملليلتر واملأ المحقنة بثلاثة ملليلتر من محلول الميثيلين الأزرق المصفى. نظف المقص والملقط التشريح بنسبة 70٪ من الإيثانول. لجمع أجنة الفترة المحيطة بالولادة عند E18.5 أو E19.5 ، قم أولا بالقتل الرحيم للفئران الحامل باستخدام استنشاق ثاني أكسيد الكربون.

ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة. بعد ذلك ، رش 70٪ من الإيثانول على سطح البطن البطني للحيوان. ثم باستخدام مقص التشريح المعقم والملقط ، افتح تجويف البطن بطنيا.

ارفع الرحم بالكامل وافصله عن الجسم عند أطراف قرون الرحم. ثم اشطف الرحم بالكامل مع 1x PBS في طبق بتري. اقطع الرحم بشكل مقطعي باستخدام مقص تشريح وقم بإزالة المشيمة بملقط تشريح لكشف الأجنة وأكياس الصفار.

قم بإزالة كيس الصفار أولا ثم قم بإزالة الغشاء الأمنيوسي باستخدام ملقط تشريح لتحرير الأجنة في الفترة المحيطة بالولادة. قطع رأس الجنين بمقص تشريح. قم بتثبيت الجنين مع سطحه البطني لأعلى على مجهر تشريح مزود بكاميرا رقمية للتصوير.

اجمع ذيله للتنميط الجيني. باستخدام الملقط ، قم بتمزيق الجلد بعناية لفتح تجويف البطن للجنين. ثم قم بإزالة الأعضاء والأنسجة الزائدة بعناية مثل الكبد والمعدة والأمعاء بالملقط عن طريق قطعها أو سحبها لفضح الكلى والحالب والمثانة الموجودة ظهريا.

امتصاص الدم الزائد من الجنين المقطوع باستخدام ضمادات شاش معقمة ثم استمر في حقن الصبغة. قم بإزالة الفقاعات الموجودة في الإبرة والأنابيب عن طريق طرد محلول الميثيلين الأزرق من طرف الإبرة عن طريق الضغط الهيدروستاتيكي. ارفع المحقنة التي تحتوي على محلول الصبغة فوق مستوى طرف الإبرة لبدء التدفق.

ثم اخفض المحقنة لوقف التدفق. بعد ذلك ، أدخل الإبرة في الحوض الكلوي بالقرب من الحالب القريب مع الحرص على عدم إزعاجها بمجرد وضعها. إجراء حقن الصبغة في الكلى لتحديد انسداد المسالك البولية.

بعد إدخال إبرة واحدة في الحوض الكلوي ، بعد نجاح هذا الاختبار ، يجب إدخال إبرة في الحوض الكلوي باتجاه الحالب ، لا تمر عبر الكلى ولا باتجاه الأوعية الدموية. ارفع المحقنة لأعلى حوالي 20 سم لتوفير الضغط الهيدروستاتيكي واترك 15 إلى 16 ميكرولترا من محلول الصبغة يتدفق. ثم راقب اللون الأزرق للصبغة بدءا من الحوض الكلوي أولا ثم بطول الحالب وأخيرا في تجويف المثانة.

ضع المحقنة لأسفل لإيقاف تدفق الصبغة وإزالة الإبرة من الكلى. قم بعمل سجل لاستسقاء الكلى والحالب المائية والموضع النهائي لمحلول الصبغة في دفتر ملاحظات المختبر. أخيرا قم بإجراء حقن الكلية المقابلة والسماح للصبغة بالتدفق لمدة 20 ثانية إجمالا.

التقط صورا للكلية والحالب والمثانة التي تم تتبعها بمحلول صبغي باستخدام الكاميرا وبرنامج التصوير المتصل بمجهر استريو. بعد الحقن في كلية واحدة ، تتدفق صبغة الميثيلين الزرقاء من الحوض الكلوي عبر الحالب إلى المثانة ، مما ينتج عنه لون أزرق مرئي في الحالب وتجويف المثانة. يظهر اللون الأزرق الأقوى في تجويف المثانة بسبب التدفق الأطول بعد حوالي 20 ثانية من حقن كلتا الكليتين بصبغة مما يشير إلى عدم وجود انسداد في تقاطع المسالك البولية في الجهاز البولي الثاني.

عند حقن الحالب المائي المتوسعة بشكل غير طبيعي ، يكون الموضع النهائي لمحلول الصبغة غير واضح. ولا يمكن التحقق من انسداد تقاطع الحالب أو UVJO على الرغم من عدم وجود صبغة في تجويف المثانة لأن الحالب المائي غير الطبيعي قد تضرر في المنتصف. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر حساب كيس الصبغة في أجنة الفترة المحيطة بالولادة للحصول على سلامة الجهاز البولي.

وإزالة الفقاعات حتى لا تمنع تدفق الصبغة.