ترانسيكتيون جزئي في العصب البصري في الفئران: نموذج المنشأة مع نهج منطوق جديد لتقييم ثانوي ضمور خلايا الشبكية العقدة

التنكس الثانوي للخلايا العقدية الشبكية في الغالب في الجلوكوما. توضح هذه الورقة نموذجا مبتكرا لنهج العمليات لقطع العصب البصري الجزئي. يعمل هذا النهج التشغيلي الموفر للمساحة على تحسين قدرة المحقق على إدارة الأدوية أو الناقلات أو المتتبعات الانتقائية ل RGCs على جذع العصب البصري المتقاطع جزئيا ويسمح للباحثين بدراسة آليات الإصابة الثانوية ل RGCs بطريقة جديدة.

الجلوكوما هو مرض تنكسي عصبي مزمن ، ويستمر علم الأمراض العصبية التدريجي لفترة طويلة. يعد ارتفاع ضغط الدم العيني أحد الأسباب الواضحة للجلوكوما، وقد ثبت أن انخفاض ارتفاع ضغط الدم في العين هو العلاج الفعال الوحيد المؤكد لعلاج الجلوكوما. لكن وضع بعض المرضى سيزداد تدهورا ، حتى بعد السيطرة على ارتفاع ضغط الدم في العين.

لذلك ، يعتقد أن التنكس الثانوي ل RGCs يحدث في الجلوكوما. ومع ذلك ، فإن الآلية المتعلقة تحديدا بالتنكس الأولي أو الثانوي لا تزال غير واضحة. سيوجه التنكس الثانوي لآلية RGCs علاج الصدمات العصبية وأمراض التنكس العصبي CES.

للمساعدة في القطع الكمي الجزئي للعصب البصري ، نقدم أداة جراحية مصممة حديثا ومنخفضة التكلفة. تتكون الأداة من جزأين ، عمود محمول باليد ورأس محزز. الرأس المحزز نصف دائري بعمق رأسي يبلغ 200 ميكرومتر ، ويمكن السطح المحزز العصب البصري البطني من الاستلقاء بداخله وتثبيته من أجل القطع.

ضع العصب البصري في أخدود الجهاز. يتيح السطح المحزز للأداة تثبيت العصب البصري للقطع. ثم قم بتمرير العصب البصري عموديا بطرف إبرة مناسب أو نقطة سكين.

يرجى ملاحظة أن الجزء الظهري فقط من العصب البصري مقطوع لأن الجزء البطني محمي بواسطة الأداة. افصل الجافية حول العصب البصري وفصلها ، مع ضمان عدم قطع الشريان العيني المرتبط بغمد السحايا. تم تحقيق الإصابة الأولية في RGCs المقابلة لمحاور العصب البصري المنقولة كميا ، الجانب الظهري ، بينما سيتم إجراء الإصابة الثانوية في RGCs المقابلة لمحاور العصب البصري غير المنقولة ، الجانب المركزي والبطني ، دون ضرر مباشر.

تم تخدير الفئران باستخدام نظام مبخر الأيزوفلوران البيطري. تمت مراقبة التخدير أثناء الجراحة ، وتم تعديل جرعة الأيزوفلوران وفقا لذلك. قم بتقييم عمق ومعدل التنفس باستمرار ، وقم بإجراء تقييم قرصة إصبع القدم كل خمس دقائق للتأكد من عدم وجود ألم عميق.

ضع الجانب الأيمن من الجرذ لأعلى على طاولة الجراحة بحيث يكون الرأس مواجها للجراحة. اضبط المدار الصحيح في وسط مجال الرؤية الجراحي. ثم قم بتنظيف منطقة الشق لعدة مرات على طول القناة الجانبية إلى الثقبة الصوتية الخارجية للجلد المداري الأيمن مع تطبيق 0.5٪ كلورهيكسيدين و 75٪ إيثانول.

قم بإزالة الفراء بين الكانثوس الجانبي إلى الثقبة الصوتية الخارجية باستخدام مقص القزحية. قم بعمل شق جلدي ، باستخدام مقص القزحية ، على طول الكانثوس الجانبي إلى الثقبة الصوتية الخارجية بطول 0.5 إلى سنتيمتر واحد. ثم اضغط على اللفافة واسحب لأعلى لإنشاء إسفين مثلث بملقط مسنن 0.12 ملم.

أدخل الشفرة السفلية لمقص زنبركي Vannas في منطقة الشق واقطع اللفافة بنفس اتجاه القص مثل جلد المقص. خاصة عند قطع اللفافة تحت الجلد في القنطر الجانبي الخارجي ، استخدم الملقط المسنن الحاد لسحب اللفافة تحت الجلد لأعلى على سطح اللفافة عموديا ، وقطع اللفافة بمقص زنبركي Vannas لتجنب تلف الوريد المداري في الكانثوس الخارجي لإحداث فشل النموذج عن طريق النزيف المفرط. قطع اللفافة بمقص القزحية ، وكشف الوريد المداري.

استخدم تشريحا حادا لفتح جانبي الشق. ميزة هذا الإجراء هي أنه يمكن أن يمنع النزيف عند قطع الأوعية الدموية مباشرة. ثم استخدم مقص القزحية لقطع القناة الجانبية اليمنى على طول خط الشق لفضح النهج الجراحي بالكامل وكشف مجال الرؤية بالكامل لمتابعة التشريح الحاد للعضلات المدارية.

استمر في تثبيت مجلد العضلة الحجاجية تحت اللفافة ، وقم بتخفيف الفصل عموديا إلى اتجاه شق الجلد واللفافة. ثم افصل على طول الجانبين تدريجيا للوصول إلى العمق المداري حتى ظهور الأنسجة الدهنية المدارية. سيفتح هذا الإجراء أجزاء أعمق من التجويف الحجاجي ، مما يوفر نافذة جراحية أكبر للعمل فيها ويسمح بالوصول دون عوائق إلى الأنسجة التي تغطي العصب البصري.

في الإجراءات المذكورة أعلاه ، في حالة حدوث نزيف ، قم بالضغط باستخدام مسحات جراحية معقمة أو مسحات قطنية. بعد التعرض للأنسجة الدهنية في المدار ، قم بتحويل اتجاه رأس الفئران من مواجهة الجراح عموديا إلى الجانب الأيمن من الجراح. قطع الأنسجة الدهنية المدارية المغطاة على مخروط العضلات الحجاجية حول العصب البصري.

يمكن أن يضمن هذا الإجراء ، فضح النهج الجراحي المناسب. يرجى ملاحظة الحفاظ على حجم الأنسجة الدهنية المقطوعة ضمن نطاق عقلاني لتجنب النزيف المستمر. بعد قطع الأنسجة الدهنية ، يتعرض المستقيم الجانبي.

قم بتثبيت المستقيم الجانبي للخارج ، ثم قم بقصه بواسطة مقص زنبركي Vannas. الغرض من هذا الإجراء هو تحقيق تعرض أفضل للعصب البصري ، حيث أن المستقيم الجانبي أوسع بكثير ومن الواضح أنه يحجب رؤية العصب البصري. إذا كان لا يزال هناك نسيج دهني تحت المستقيم الجانبي ، اسحب الدهون التي تغطي العصب البصري ، باستخدام ملقط مسنن 0.12 ملم ، واقطعها بمقص زنبركي Vannas.

ثم يظهر غمد الأنسجة حول العصب البصري. استمر في فصل غمد الأنسجة على طول اتجاه العصب البصري في عمق المدار حتى التعرض الكلي للعصب البصري. حافظ على نظافة المنطقة باستخدام المسحات الجراحية لتنظيف كميات صغيرة من الدم التي تنشأ عن إزالة الأنسجة.

الآن يجب أن يكون العصب البصري مرئيا. من أجل الوصول إلى العصب ، قم بإزالة غمد السحايا الذي يحيط بالعصب دون الإضرار بالشريان العيني. قم بتدوير الغمد برفق لفحص نمط الأوعية الدموية للجافية مع تكبير أعلى لمجهر التشغيل.

ابحث عن منطقة خالية من الأوعية الدموية وتسمح بقطع طولي على الجافية. قم بتمزيق الغمد بالتوازي مع اتجاه العصب البصري بطرف إبرة أو نقطة سكين بعناية لتجنب تلف الأوعية الدموية بالجروح الجانبية. كان الغشاء العنكبوتية الوحيد المتبقي لتغطية العصب

إنه رقيق جدا وشفاف. على غرار الخطوة السابقة ، قم بتمزيق الغشاء العنكبوتي برفق ، بطرف إبرة أو نقطة سكين ، بالتوازي مع اتجاه العصب البصري. ضع العصب البصري داخل أخدود الأداة بهدوء وحذر ، مما ينتج عنه العصب البصري الظهري أعلى قليلا من حافة رأس الأخدود.

ثم قم بتمرير العصب البصري الظهري فوق حافة المنصة لرأس الأخدود بطرف الإبرة أو نقطة السكين لإكمال القطع الجزئي للعصب البصري. حرك الأداة أعمق قليلا ، باتجاه الاتجاه الرأسي للعصب البصري ، لتحرير العصب البصري. ثم أخرج رأس أخدود الأداة برفق.

حاول ألا تخدش عضلات العين أو الأنسجة الأخرى لتجنب الضرر الإضافي. ثم يمكن ملاحظة جذع قطع العصب البصري الجزئي. استبدل المستقيم الجانبي واللفافة وغيرها من أنسجة العين إلى الموضع الأصلي.

ثم قم بخياطة طبقة العضلات وطبقة الجلد في الحجاج بالتسلسل. ضع مرهما مضاد حيوي على الجرح لمنع العدوى بعد الخياطة. في عملية إنعاش الفئران ، قم بإعداد العزل الحراري بواسطة حصيرة ساخنة ، أو قم بتغطيتها بحشوة جافة في القفص.

قم ببطانيتها للتدفئة. تأكد من سالكية مجرى الهواء للفئران أثناء عملية الاسترداد. تم إيواء بشكل مستقل ومراقبتها بعناية بعد الجراحة.

من أجل التحقق من النجاح فيما يتعلق بإنشاء نموذج إصابة ثانوية بنهج جراحي جديد باستخدام أداة مساعد جراحي مصممة ذاتيا ، تم تصنيف RGCs بأثر رجعي فور إنشاء النموذج. كان الغرض من هذا الإجراء هو تسمية RGCs بأثر رجعي عن طريق حقن صبغة تتبع عصبية في القولون العلوي. سيتم امتصاص الصبغة بشكل رجعي بواسطة RGCs في شبكية العين وتوفر علامة ل RGCs الحية مع المحاور غير المنقولة في العين اليمنى.

في حين أن RGCs المقابلة لمحاور العصب البصري التي تم نقلها جزئيا في العين اليمنى لم يكن من الممكن تصنيفها ب Fluoro-Gold ، كعين تحكم ، العين اليسرى دون أي عملية ، تم تمييز RGCs على طول العصب البصري على شبكية العين بصبغة ذهبية فلورية بطريقة رجعية من القولون العلوي. تم عرض نتائج RGCs المسماة بالفلورة مع أو بدون قطع العصب البصري الجزئي. تم تمييز RGCs فقط في شبكية العين اليمنى المقابلة للجزء غير المتقاطع من العصب البصري بالذهب الفلوري ، وتم تصور الحدود الواضحة ل RGCs غير المسماة والمسمى ، مما أظهر القطع الجزئي للعصب البصري.

بصفتها العين الضابطة ، تم تمييز جميع RGCs في شبكية العين اليسرى بالذهب الفلوري. تظهر هذه الصور أن تدفق الدم للعين اليمنى لوحظ قبل العملية وبعدها. بعد العملية ، كانت الشرايين لا تزال ممتلئة بالدم ، ولم يلاحظ أي انسداد في الأوردة.

يشير هذا إلى عدم وجود ضرر لنظام إمداد الدم أثناء العملية. تم إنشاء نموذج التنكس الثانوي ل RGCs بنجاح. نموذج قطع العصب البصري المحتمل هو نموذج حيواني قابل للاستخدام لدراسة آلية التنكس الثانوي وفحص الأدوية الواقية من الأعصاب في مكافحة التنكس الثانوي.

يتزاوج هذا النموذج في القدرة على فصل التنكس الأولي عن الثانوي بدقة في الموقع ، سواء في العصب البصري أو الشبكية. الميزة الرئيسية لأداتنا المصممة هي أكثر قابلية للتكرار وأكثر سهولة في التشغيل. من خلال الممارسة ، يمكن إنجاز جميع الخطوات في الإجراء الجراحي الكامل في غضون 10 إلى 15 دقيقة لكل عين بمجرد إجراء تخفيضات الدخول الأولية.