ستيريوتاكتيكالي تسترشد الاجتثاث الفئران القشرة السمعية، وتوطين الآفة في الدماغ

الهدف العام من هذا الإجراء هو وصف الاستئصال الموجه التجسيمي للقشرة السمعية واستخدام خريطة إحداثيات لتحديد موقع الآفة على صورة لسطح الدماغ. يمكن أن تساعد هذه الطريقة باحثي علم الأعصاب السمعي على معالجة دور القشرة في المسار في إدراك الصوت. وكذلك الآليات واللدونة الموضعية للخط.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بالتعرض الجراحي واستئصال القشرة السمعية باستخدام الأساليب الأساسية التي يمكن تكييفها من قبل أي محقق. لذلك يمكن أن تكون هذه الطريقة مفيدة في مجال علم الأعصاب السمعي ، كما يمكن تطبيقها في أنظمة أخرى مثل البصر والحسي الجسدي. يمكن أيضا استخدام هذه الطريقة لدراسة العيوب التي يمارسها استئصال القشرة السمعية أحادية الجانب في المناطق القشرية الأخرى.

العرض البصري لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية ، لأن التحديد الصحيح والإحداثيات التجسيمية وترجمتها إلى العظم الصدغي ضروريان لتحديد موقع القشرة السمعية بدقة. لبدء هذا الإجراء ، ضع الجرذ المخدر على وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة جسمه. ثم قم بتثبيت رأس في إطار تجسيمي باستخدام قضيبين للأذن وشريط لدغة.

حلق فروة الرأس وتطهير المنطقة الجراحية ببوفيدون اليود. باستخدام مشرط ، قم بعمل شق على طول خط الوسط لكشف الجمجمة وسحب السمحاق الذي يغطي سطح الجمجمة. بعد ذلك ، استخدم طرفا قطنيا معقما لإزالة أي دم يغطي سطح الجمجمة برفق.

من أجل تصور Bregma و Lambda والخط بين الأذنين ، قم بعمل شق في العضلة الصدغية بالقرب من إدخالها الظهري على الجمجمة بمشرط. بعد ذلك ، اسحب العضلات للخارج باستخدام إبرة ومادة خياطة وقم بتثبيت مادة الخياطة في الإطار التجسيمي من أجل فضح العظم الصدغي. اخفض إبرة مستقيمة معقمة ببطء حتى تصبح فوق سطح الجمجمة مباشرة ، بحيث يتم ضبط طرف الإبرة عند الصفر بين الأذنين.

اضبط هذه النقطة على أنها صفر. بعد ذلك ، استهدف AC باستخدام أربع نقاط. ثم اخفض الإبرة إلى أعلى العظم الصدغي مباشرة لتصور كل نقطة من هذه النقاط الأربع.

ضع علامة على النقاط بعلامة على العظم الصدغي وربطها لرسم مستطيل. سيكون المستطيل بمثابة دليل لفتح نافذة في العظم. في هذا الإجراء ، افتح النافذة باستخدام مثقاب كهربائي ومثقاب صغير.

حفر محيط المستطيل عند 8 ، 000 دورة في الدقيقة حتى ينفجر العظم. قم بتبريد سطح الحفر عن طريق شطفه بمحلول ملحي معقم بارد لمنع تلف الهياكل تحت القشرية. عندما يفسح العظم المجال ، احرص على عدم الحفر في الدماغ.

عندما تفقد الحدود ، اسحب عظم التغطية بالملقط الناعم وقم بتخزينه في محلول ملحي معقم بارد. باستخدام المجهر الجراحي ، قم بقطع السحايا برفق بسكين جراحي مجهري وقم بإزالتها باستخدام ملقطين مدببين دقيقين. في حالة حدوث نزيف ، اشطف موقع الجراحة بمحلول ملحي معقم بارد.

بعد ذلك ، قم بشفط التيار المتردد برفق باستخدام جهاز شفط جراحي مقترن بإبرة معقمة ذات طرف حاد قياس 20. استنشق فقط الطبقات القشرية الست ، وليس المادة البيضاء الأساسية. هذه النقطة حاسمة ويجب تنفيذها بعناية فائقة.

عند الانتهاء من الشفط ، قم بتغطية موقع الجراحة بالعظم المستخرج وقم بتطبيق شاش مرقئ قابل للامتصاص. دع العضلة الصدغية تستعيد وضعها الأصلي ثم قم بخياطة الجلد باستخدام مشابك الجرح. بعد ذلك ، ضع مرهم مضاد حيوي على الجرح.

بعد ذلك ، قم بحقن البوبرينورفين تحت الجلد في الجزء الخلفي من الفئران كمسكن ، بعد ساعة وثماني ساعات من نهاية الجراحة. احتفظ بالحيوان على وسادة التدفئة حتى يستيقظ وأعده إلى قفص السكن الخاص به للتعافي. عند اكتمال البحث الذي تم إجراؤه على الفئران المستعصصة بالتيار المتردد ، قم بتخديره بشكل نهائي عن طريق الحقن داخل الصفاق 0.1 مل من البنتوباربيتال الصوديوم.

بعد إجراء وفرة داخل القلب من محلول Ringer والفورمالديهايد ، قم بإزالة الجلد والعضلات من الرأس لكشف الجمجمة. باستخدام مقص سبنسر ، قم بعمل قطع عرضي في العظم المداري. بعد ذلك ، قم بإزالة الجزء الخلفي من الجمجمة واستخدم الأحجار الكريمة لقطع الحواف العلوية للجمجمة لفضح الدماغ.

احرص على عدم إتلاف الدماغ. بمجرد أن يتعرض الدماغ ، قم بإزالة الأم الجافية بعناية باستخدام ملقط مدبب ناعم. استخدم إصبعا لغرف الدماغ برفق ورفعه.

ثم ارفع الدماغ واقطع الأعصاب حتى يتحرر. بعد ذلك ، اغمر الدماغ في محلول الفورمالديهايد وقم بتخزينه عند أربع درجات مئوية لمدة 24 ساعة. بعد التثبيت اللاحق ، ضع الدماغ بعناية في مصفوفة دماغ الفئران السهمية ، مما يعرض السطح الجانبي للدماغ.

ضع الكاميرا على ارتفاع 21 سم فوق سطح القشرة باستخدام حامل الكاميرا. بعد ذلك ، حدد وضع التصوير الفائق الماكرو ، والتقط صورة لسطح الدماغ. بعد ذلك ، باستخدام برنامج محرر الصور ، افتح الصور وقم بتصغيرها بنسبة 50٪ حدد مراجع Bregma و Lambda والصفر بين الأذنين وحدد موضعها في الصور.

ارسم محيط الاستئصال فوق الصورة الجانبية للدماغ. قم باستيراد خريطة الإحداثيات حيث توجد المناطق الأولية والثانوية للقشرة السمعية إلى ملف برنامج المحرر. ثم انقر على الخريطة واسحبها لتثبيتها على الصورة الجانبية للدماغ المفصول.

اجعل مراجع Bregma و Lambda لخريطة الإحداثيات تتزامن مع مراجع Bregma و IA المحددة في صورة الدماغ الجانبي. بعد ذلك ، استخدم شق الأنف كمرجع لضبط صورة الدماغ على الخريطة وجعلها تتزامن. من المهم التأكد من أن المادة البيضاء سليمة.

يمكن القيام بذلك عن طريق التلوين المناعي في البداية للقسم التسلسلي من الدماغ. لإثبات فعالية بروتوكولنا ، أبقينا الفئران الثلاثة التي تم استئصالها بالتيار المتردد على قيد الحياة لمدة أسبوع واحد ثم جمعنا القوقعة لدراسة التغييرات في التعبير عن وحدات AMPA الفرعية الأكثر صلة الموجودة في القوقعة البالغة ، GluA2 و GluA3 بواسطة qPCR. أظهرت المقارنة بين النصوص من الفئران المفصولة بالتيار المتردد التحكم الزائفة انخفاضا في تنظيم GluA2 وتنظيما إضافيا ل GluA3 في كل من القوقعة ، وهو ما يتفق مع دراستنا السابقة.

أثناء محاولة الجراحة ، من المهم أن تتذكر ثلاثة أشياء: حفر العظم الصدغي بأقل سرعة بأقل ضغط ، وإزالة السحايا بعناية لتجنب كسر الأوعية الدموية ، وتقييد الشفط بالمادة الرمادية. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء التعرض الجراحي واستئصال القشرة السمعية لمدة 45 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء الطرق الفسيولوجية والسلوكية و / أو الكيميائية المناعية من أجل الإجابة على أسئلة إضافية ، مثل كيفية تأثير نقص القشرة السمعية على وظيفة المزيد من الأنظمة الحسية.