نهج بسيط للحث على العصب الذاتية التجريبية في الفئران C57BL/6 للتقييمات الفنية ولاثيل

يوجز هذا التقرير نهج بسيط للحث على نجاح العصب الذاتية التجريبية (EAN) استخدام البروتين المايلين صفر الببتيد_180-199 (P0) في تركيبة مع adjuvant فروند بالكامل والسمية السعال الديكي. نحن نقدم نموذجا متطورة قادرة على دقة تقدير مدى عجز وظيفي وأمراض الأعصاب التي تحدث في هذا EAN.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إحداث التهاب العصب المناعي الذاتي التجريبي أو EAN بنجاح في نموذج فأر للتحليل الوظيفي والمرضي لعملية المرض. يمكن استخدام نموذج EAN لمعالجة الأسئلة الرئيسية المتعلقة بالاعتلال العصبي المحيطي. إنه أيضا نموذج رائع للتحقيق في فعالية العوامل العلاجية الجديدة.

الميزة الرئيسية لهذا النهج هي أنه يوفر نموذج اختبار وظيفي بسيط وموضوعي يمكن تطبيقه عند استخدام نموذج EAN في الماوس. يوضح الإجراء معي اليوم سانغ وون يو ، وهو طالب جامعي في مختبر بيولوجيا التغذية العصبية والمايلين في جامعة ملبورن. قبل ثلاثة أيام من تحريض المرض ، قم بتشغيل جهاز تقييم الوظيفة الحركية وقم بتشغيل زر الضوء.

التقط الماوس وقم بخفضه في وعاء من صبغة الطعام الحمراء. ضع الماوس في حجرة المشي واضبط سرعة جهاز المشي على 15 سم في الثانية. قم بتشغيل جهاز المشي وانقر فوق "تسجيل" لاستخدام نظام تصوير وظيفة المشي لالتقاط حركة تشغيل الماوس لمدة 36 ثانية.

بعد 36 ثانية ، أوقف التسجيل وجهاز المشي واحفظ ملف فيديو تشغيل الممارسة لتشغيل الممارسة في المجلد المخصص. قبل يوم واحد من التحصين الأول ، استخدم حقنة 0.5 ملليلتر مزودة بإبرة قياس 30-1 / 2 لإدارة 1.6 ميكروغرام لكل ملليلتر من سم السعال الديكي في 250 ميكرولتر من PBS IP متساوي التوتر للفأر لتخدير الفئران الذكور C57BL / 6 البالغة من العمر ستة إلى ثمانية أسابيع. بعد ذلك ، قم بتسجيل الفئران بحثا عن العلامات السريرية ل EAN على مقياس من صفر إلى أربعة وفقا للجدول وقم بإجراء تقييم الوظيفة الحركية كما هو موضح للتو.

في اليوم التالي ، امزج كميات متساوية من محاليل الببتيد المحضرة حديثا في محلول ملحي 0.9٪ و 20 ملليغرام لكل ملليلتر من المتفطرة السلية في مساعد فرويند الكامل في حبة حبة واخلط المحاليل بأقصى سرعة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة. قم بتحميل حقنة مزودة بإبرة قياس 23 باللقاح وقم بقلب المحقنة ورجها قبل إخلاء أي هواء داخل عمود المحقنة. قبل إعطاء اللقاح ، قم بإزالة الشعر بشكل جانبي إلى خط الوسط بين لوح الكتف وقم بتطهير الجلد المكشوف بنسبة 70٪ من الإيثانول.

بعد ذلك ، استخدم زوجا من ملقط Adson للإمساك بالجلد وتوصيل 50 ميكرولترا من المحلول إلى الفأر المحقون بسم السعال الديكي عن طريق الحقن تحت الجلد. في صباح اليوم التالي ، قم بتسليم 1.2 ميكروغرام لكل ملليلتر من سم السعال الديكي في 250 ميكرولتر من PBS IP كما هو موضح للتو متبوعا ب 1.2 ميكروغرام آخر لكل حقنة لكل مليلتر من سموم السعال الديكي IP بعد 48 ساعة. بعد ثلاثة أيام من الحقن الثالث للسعال الديكي ، قم بإعطاء 50 ميكرولترا أخرى من اللقاح المحضر حديثا في نفس موقع الحقن كما كان من قبل وراقب النتيجة السريرية والوظيفة الحركية للحيوانات مرتين في الأسبوع حتى نهاية التجربة.

يؤدي P0 180-199 EAN الناجم عن الببتيد في الفئران C57BL / 6 إلى مرض أحادي الطور مع بداية النتيجة السريرية من ستة أيام بعد التحصين الأول وشدة الدرجة القصوى في 25 يوما بعد التحصين الأول ، يليه بعض التحسن في النتيجة السريرية بعد 40 يوما من التحصين الأول. تبدأ الفئران في الفشل في مهمة تشغيل بسيطة في وقت مبكر يصل إلى ستة أيام بعد التحصين الأول مع قدرة ضئيلة على إكمال مهمة تشغيل بسيطة على جهاز المشي بحلول 35 يوما بعد التحصين الذي لا يتحسن في القدرة على الجري بعد 55 يوما من التحصين الأول. يكشف فحص الأجزاء شبه الرقيقة من الأعصاب الوركي لفئران EAN التي يسببها الببتيد عن مناطق إزالة الميالين مقارنة بالأعصاب الوركي من الضوابط الصحية المطابقة للعمر.

تسمح صور المجهر الإلكتروني عالي الطاقة بتحديد سمات مرضية عصبية محددة مثل إزالة الميالين ، وتلف صفيحة المايلين ، وعلامات إجهاد المحور العصبي مثل تورم الميتوكوندريا. تظهر هذه أيضا أضرارا محورية حادة كما يتضح من تعبير بروتين سلائف بيتا أميلويد المرتفع بشكل مؤلم في الأعصاب الوركي الذي لم يتم ملاحظته في أنسجة التحكم الصحية المطابقة للعمر. كما لوحظ اتساع العقد وتعطيل جنون العظمة.

بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء الحقن تحت الجلد في غضون حوالي خمس إلى 10 دقائق لكل فأر مع الحد الأدنى من فرصة حدوث أي خطأ في الحقن. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم حقا أن تراقب موقع الحقن للتأكد من بقاء كل اللقاح داخل موقع الحقن وأنه لا يتسرب أي منها. يعد التقاط الفيديو لمشية جهاز المشي أمرا رائعا لأنه يتيح حساب المعلمات الأخرى مثل مرحلة التأرجح أو طول الخطوة وقد تصبح هذه المقاييس مهمة عند اختبار فعالية العلاجات الجديدة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد حقا لكيفية تحفيز EAN في ذكور الفئران C57BL / 6. بالإضافة إلى ذلك ، يجب أن يكون لديك فهم جيد حقا لكيفية وضع الحقن تحت الجلد بأمان ودقة حقيقية لضمان عدم وجود خطأ في الحقن. لا تنس أن العمل مع الإبر واللقاح ، هناك فرصة للإصابة خاصة عند استخدام الأدوات الحادة.

لذلك ، لتجنب أي فرصة للإصابة ، من الجيد حقا استخدام الملقط دائما وعدم الإمساك بالجلد أو الأنسجة يدويا وأيضا استخدام المحاقن ذات الاستخدام الواحد ، وعدم التغطيتها في هذه العملية.