September 4th, 2017
هذا البروتوكول يوضح التعريفي مرض دماغي تشوه الكهفي في نموذج ماوس وتعزيز استخدامات التباين الجزئي المقطعي لقياس عبء الآفة. ويعزز هذا الأسلوب قيمة نماذج الماوس المنشأة لدراسة الأساس الجزيئي والعلاجات المحتملة لتشوه الكهفي الدماغي وغيره من الأمراض المخية الوعائية.
الهدف العام من هذا الإجراء هو إحداث تشوهات كهفية دماغية في الفئران حديثي الولادة ، وقياس عبء المرض باستخدام التصوير المقطعي المحوسب الدقيق. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أمراض الأوعية الدموية الدماغية ، مثل التشوهات الكهفية الدماغية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن تحديد عبء مرض التشوه الكهفي الدماغي في نماذج الفئران حديثي الولادة بدقة وكفاءة مقارنة بالطرق الحالية.
يعدالعرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية ، حيث يصعب تعلم تحريض التشوه الكهفي الدماغي وخطوات تحليل التصوير المقطعي المحوسب الجزئي ، لأنه يتطلب خبرة واستخدام برامج متطورة. ابدأ بإذابة 4-HT في 100٪ الإيثانول بتركيز 10 ملليغرام لكل مليلتر. قم بإعداد 30 ميكرولتر من الأكواد ، ثم قم بتخزينها في درجة حرارة 80 درجة مئوية تحت الصفر.
في يوم الاستخدام ، قم بتخفيف alaquad في 4-HT في زيت الذرة إلى 0.5 ملليغرام لكل مليلتر. ثم استخدم حقنة الأنسولين لحقن 50 ميكرولترا من 4-HT في صغار الأطفال حديثي الولادة P1 للحث على آفات CCM التجريبية. ابدأ في تحضير العينة عن طريق ملء حقنة سعة 10 مليلتر مزودة بإبرة قياس 29 مع ثلاثة ملليلتر من 2٪ بارافورمالدهايد و PBS.
ثم قم بإجراء وفرة داخل القلب على الجرو P8 المأخوذ عن طريق إدخال الإبرة في بطين قلب الفأر ، وحقن الحجم الكامل للبارافورمالدهيد ببطء. بعد استخدام المقص لفصل الرأس ، قم بإزالة الجلد من الرأس وقشر الجمجمة باستخدام ملقط لتشريح الدماغ كله إلى 4٪ بارافورمالدهيد و PBS. بعد إصلاح الأدمغة بين عشية وضحاها عند 4-HT درجات مئوية.
في اليوم التالي ، افصل الدماغ الخلفي باستخدام الملقط ، واشطفه بمحلول PBS. ثم احتضان الأدمغة الخلفية في محلول اليود من Lugol لمدة 48 ساعة. بعد الحضانة ، جفف الدماغ الخلفي بالهواء لفترة وجيزة لإزالة محلول اليود الزائد من Lugol.
ثم قم بتعبئة الأدمغة الخلفية الملطخة باليود من Lugol في أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 0.65 ميكرولتر ، وأغلقها تماما بغشاء البارافين البلاستيكي لتجنب انكماش الأنسجة. ضع أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة في أنابيب بلاستيكية سعة خمسة ملليلتر مع إسفنج لمنعها من التحرك أثناء الفحص. قم بتركيب الأنبوب الذي يحتوي على دماغ خلفي رأسيا على حامل من الألومنيوم في نظام التصوير المقطعي المحوسب الصغير.
قم بتعيين معلمات المسح. استخدم 540 إسقاطا ووقت تعرض لمدة ثانيتين مع ظروف المصدر 50 كيلو فولت و 10 واط للحصول على مجموعات البيانات المقطعية. يتم إعادة بناء الرسوم البيانية الراديوية من المسح تلقائيا بواسطة برنامج إعادة بناء الإسقاط القائم على الأجهزة ، الذي يوفره نظام التصوير المقطعي المحوسب الصغير ، مما ينتج سلسلة صور من الشرائح المحورية 16 بت.
يتناقض يود لوغول بالتصوير المقطعي المحوسب الصغير الذي اكتشف آفات CCM بشكل كاف. تم إعادة بناء صور الأشعة السينية الممسوحة ضوئيا لإنتاج صور ثلاثية الأبعاد لدماغ الفأر ، مما سمح بتصور آفات كاملة في حمة الدماغ ، على أعماق واتجاهات مختلفة ، وتقييم الهيكل في موقع ثلاثي الأبعاد للآفات في الدماغ. يوضح هذا الجدول مثالا على المخرجات الكمية للآفات الفردية المصنفة.
بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال أمراض الأوعية الدموية لاستكشاف الآلية والخيارات العلاجية للتشوهات الكهفية الدماغية في نماذج الفئران. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إحداث آفة CCM في نماذج الفئران ، وكيفية اكتساب وتحليل عبء آفة CCM باستخدام تقنية التصوير المقطعي المحوسب الدقيقة.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
يُظهر هذا البروتوكول تحريض مرض التشوهات الكهفية الدماغية في الفئران حديثي الولادة ويستخدم التصوير المقطعي المصغر لقياس عبء الآفة. تعزز هذه الطريقة فهم الأساس الجزيئي والعلاجات المحتملة لتشوهات الدماغ الكهفية وأمراض الأوعية الدموية الدماغية الأخرى.
Quantitative micro-CT imaging of cerebral cavernous malformations (CCMs) in genetically engineered mouse models enables precise assessment of lesion burden, supporting mechanistic de-risking and target validation in cerebrovascular disease research. This approach enhances predictive confidence for early-stage therapeutic hypothesis testing and informs portfolio triage by providing robust, reproducible lesion quantification. Integration of high-resolution imaging with genetic disease models positions this workflow as a critical inflection point for translational continuity in vascular biology pipelines.
This method bridges early discovery and preclinical research by enabling hypothesis-driven genetic manipulation and quantitative phenotyping in mouse models, supporting lead identification and translational biomarker alignment.