مصل وبلازما نسخة الكشف رقم PCR الوقت الحقيقي باستخدام
ديسمبر 15, 2017
ويصف هذه المخطوطة نسخة رقم تحليل تباين أداؤها في الحمض النووي المصل أو البلازما باستخدام نهج PCR الوقت الحقيقي. هذا الأسلوب مناسبة للتنبؤ بمقاومة الأدوية في مرضى سرطان البروستاتا المقاوم الاخصاء، ولكن يمكن أن تكون مفيدة أيضا لأمراض أخرى.
الهدف العام من هذه الطريقة هو الكشف عن تباين عدد النسخ الجينية في عينات المصل أو البلازما. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان البروستاتا المتقدم مثل الكشف عن العلامات المفيدة للتنبؤ بتقليل الجراثيم أو مراقبتها. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها سهلة وسريعة القيام بها. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج سرطان البروستاتا المتقدم لأن اختلاف عدد نسخ جين مستقبلات الأندروجين هو حدث متكرر. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأن تركيز وجودة الحمض النووي الخالي من الخلايا غالبا ما يكون أقل من المتوقع. لجمع المصل ، اعمل من خمسة عينات مليلتر من الدم الكامل والمصل دون مضادات التخثر التي يتم الاحتفاظ بها عند أربع درجات مئوية.ابدأ بالطرد المركزي للعينات لمدة 15 دقيقة عند 1 ، 000 جم ، والطافي هو المصل. انقله إلى أنابيب سعة ملليلتر وتخلص من الحبيبات. ما لم تتم معالجة المصل على الفور ، قم بتجميد العينات عند 80
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
نظرة عامة
تصف هذه المخطوطة تحليل تباين عدد النسخ الذي يتم إجراؤه على الحمض النووي DNA في المصل أو البلازما باستخدام نهج تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي real-time PCR. وتعد هذه الطريقة مناسبة للتنبؤ بمقاومة الأدوية لدى مرضى سرطان البروستاتا المقاوم للإخصاء، ويمكن أن تكون مفيدة لأمراض أخرى.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- علم الأورام
- علم الجينوم
- الأبحاث السريرية
خلفية علمية
- يمكن أن يؤثر تباين عدد النسخ (CNV) على تطور المرض.
- يعد تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (Real-time PCR) طريقة حساسة للكشف عن تباينات عدد النسخ (CNVs).
- يطرح سرطان البروستاتا المقاوم للإخصاء تحديات فريدة في العلاج.
- يعد فهم آليات مقاومة الأدوية أمراً بالغ الأهمية لإدارة حالة المرضى.
الغرض من الدراسة
- لتحليل تباين عدد النسخ (CNV) في الحمض النووي (DNA) المستخلص من المصل أو البلازما.
- لتقييم إمكانية هذه الطريقة في التنبؤ بالمقاومة الدوائية.
- لاستكشاف مدى قابليتها للتطبيق على أمراض أخرى.
الطرق المستخدمة
- تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (Real-time PCR) لتحليل تغير عدد النسخ (CNV).
- جمع العينات من المصل أو البلازما.
- التحليل الإحصائي لبيانات تغير عدد النسخ (CNV).
- المقارنة مع النتائج السريرية لدى مرضى سرطان البروستاتا.
النتائج الرئيسية
- تحديد تغيرات عدد النسخ (CNVs) النوعية المرتبطة بمقاومة الأدوية.
- إيجاد الارتباط بين أنماط تغيرات عدد النسخ (CNV) والنتائج السريرية للمرضى.
- إثبات حساسية ونوعية هذه الطريقة.
- التداعيات المحتملة على استراتيجيات العلاج في سرطان البروستات.
الاستنتاجات
- تعد طريقة real-time PCR فعالة في تحليل CNV.
- قد تعزز النتائج من فهم مقاومة الأدوية في السرطان.
- هناك حاجة إلى مزيد من الأبحاث للتحقق من صحة النتائج في أمراض أخرى.
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
يتيح الكشف عن زيادة عدد نسخ مستقبلات الأندروجين في الحمض النووي الخالي من الخلايا في الدورة الدموية مراقبة غير جراحية لآليات المقاومة العلاجية في سرطان البروستاتا النقيلي المقاوم للإخصاء. ويدعم هذا النهج التحديد المبكر لفشل العلاج ويوجه اتخاذ القرارات السريرية من خلال أخذ عينات بأقل قدر من التدخل الجراحي. وتوفر هذه الطريقة سير عمل سريع وقابل للتوسع لتقييم المؤشرات الحيوية في تطبيقات الخزعة السائلة.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية
الاكتشاف المبكر والتحقق من صحة الهدف
- القيمة العلمية: يتيح استقصاء تضخيم جين AR كمحرك للمقاومة العلاجية في نماذج سرطان البروستاتا.
- القيمة التشغيلية: يستخدم cfDNA من المصل/البلازما لتجنب أخذ عينات الأنسجة الغازية في الدراسات الطولية.
الفحص وتطوير المقايسة
- القيمة العلمية: يوفر قياسات كمية لعدد النسخ (CN) باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي المزدوج (duplex real-time PCR) مع الجينات المرجعية RNaseP و AGO1.
- القيمة التشغيلية: يضمن استخدام كمية قياسية قدرها 60 ng من الـ DNA لكل اختبار إمكانية تكرار النتائج عبر مجموعات العينات المختلفة.
الأبحاث الانتقالية وما قبل السريرية
- القيمة العلمية: يرتبط اكتساب عدد نسخ (CN gain) جين AR في الحمض النووي الريبوزي الحر (cfDNA) بالتقدم المرضي في سرطان البروستاتا المقاوم للإخصاء النقيلي (mCRPC)، مما يدعم جهود تأهيل المؤشرات الحيوية.
- القيمة التشغيلية: تتيح عملية جمع العينات غير البضعية المراقبة المستمرة في المجموعات قبل السريرية والسريرية.
تكامل مسارات العمل والتدفقات الإجرائية
تندرج هذه الطريقة ضمن سلسلة اكتشاف المؤشرات الحيوية، حيث تدعم التحقق من الأهداف من خلال الخزعة السائلة، وتتيح الفحص اللاحق لآليات المقاومة في نماذج سرطان البروستاتا.
- بيولوجيا الاكتشاف: اختبار الفرضية القائلة بأن زيادة عدد النسخ لـ AR في cfDNA تتنبأ بمقاومة العلاج في حالات سرطان البروستاتا المتقدم.
- الفحص: توليد بيانات كمية لعدد النسخ مناسبة لتوحيد المقايسة وتقييم تأثير المركبات.
- التحليلات: توفير نسب CNV بالنسبة للجينات المرجعية لإجراء مقارنة إحصائية عبر الظروف المختلفة.
- الأبحاث الانتقالية: ربط المؤشرات الحيوية لـ cfDNA بالنتائج السريرية في سرطان البروستاتا المقاوم للإخصاء.
- إعادة الاستخدام المؤسسي: يتكيف سير العمل مع أهداف جينية أخرى وسياقات مرضية مختلفة تتجاوز سرطان البروستاتا.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: تقليل المخاطر الميكانيكية المتعلقة بتضخم مستقبلات الأندروجين (AR) كعلامة بيولوجية للمقاومة في سرطان البروستاتا.
- القيمة التشغيلية: بروتوكول سريع ومنخفض المدخلات باستخدام معدات PCR في الوقت الحقيقي القياسية.
- القيمة الاستراتيجية: تمكين اتخاذ قرارات المضي قدماً أو التوقف بناءً على مراقبة المقاومة غير الجراحية.
- تأثير المحفظة: دعم تحديد الأولويات المعدلة حسب المخاطر للعلاجات التي تستهدف تغيرات مسار AR.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة في استخلاص cfDNA وتقديره كمياً من العينات ذات الإنتاجية المنخفضة.
- يعتمد على أجهزة PCR في الوقت الحقيقي (real-time PCR) ذات القدرة على التضاعف (multiplexing).
- يحتاج إلى توحيد المعايير بين المختبرات فيما يتعلق باختيار الجين المرجعي وتحليل البيانات.
- محدود بكمية cfDNA وجودته، مما يستلزم تحسين المدخلات.
- يوصى بالتحقق باستخدام طرق متعامدة مثل digital PCR لتأكيد زيادة عدد النسخ (CN gain).
الأسئلة الشائعة حول الأدوية الحيوية
Chapters in this video
0:05
Title
0:55
Collection of Serum or Plasma
2:20
Isolating Cell-free (cfDNA) from Serum or Plasma
5:15
Real-time PCR and Analysis of cfDNA
7:36
Results: Detection of Androgen Receptor (AR) Copy Number Variations in cfDNA of Metastatic Castration-resistant Prostate Cancer (CRPC) Patients
8:25
Conclusion
