يونيو 12, 2018
توضح هذه المقالة طريقة لإشعال المواد الكيميائية مع بينتيلينيتيترازولي هذا البروتوكول ويقدم نموذجا ماوس من الصرع. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول للتحقيق في التعرض للاستيلاء على الاستقراء والمرضية بعد نوبات الصرع في الفئران.
يمكن أن تساعد هذه الطريقة في التحليل العميق للصرع. ستؤدي النوبة إلى حدوث تغيرات نسيجية في الدماغ والتي قد تشارك في اضطرابات النمو العصبية والنفسية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن جرعة الانعكاس الذاتي من PTZ يمكن أن تحفز نوبات يمكن السيطرة عليها بشكل أفضل من الطرق الحالية الأخرى.
ابدأ في تحضير الحقن عن طريق إذابة 2 ملليغرام لكل مليلتر PTZ في معقم 0.9 في المائة كلوريد الصوديوم. قم بوزن ، ثم ضعه في غرفة المراقبة لمدة 3 دقائق. بعد ذلك ، قم بحقن PTZ بين الصفاق مع حقنة سعة 1 مليلتر متصلة بإبرة قياس 27 في الربع الأيسر أو الأيمن من بطن.
أخيرا ، راقب بعد حقن PTZ بحثا عن سلوك غير طبيعي. احصل على ما لا يقل عن فأرين 129 SV تتراوح أعمارهم بين شهرين وستة أشهر من نفس جنس الفئران الموضوعة لتكون الفأر الغريب. يجب الاحتفاظ بكل فأر غريب على حدة.
لكل جلسة تدريبية ، اترك الماوس في القفص للتعود لمدة 15 دقيقة. نظف الجهاز بالكامل في كلا القفصين عن طريق مسح السطح بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد ذلك ، ضع الأقفاص الفارغة في الغرفتين الجانبيتين للجهاز المكون من ثلاث غرف وافتح الأبواب بين الغرف.
لتعود على الماوس الموضوع ، ضع الماوس الموضوعي في الغرفة المركزية واسمح للماوس بالتحرك بحرية في جميع أنحاء الجهاز حتى يفحص الماوس كلا القفصين ، بالإضافة إلى خمس دقائق إضافية. بعد أن ينتقل إلى الغرفة المركزية ، أغلق الأبواب واترك الماوس يتحرك بحرية في الغرفة المركزية لمدة خمس دقائق. خلال هذه الفترة ، ضع أحد الفئران ال 129 SV في قفص لتعتاد على القفص.
مباشرة بعد فترة التعود على الماوس الموضوع ، ضع القفص الذي يحتوي على الماوس 129 SV ، الذي يطلق عليه قفص Stranger One ، في إحدى الغرف الجانبية وضع القفص الفارغ ، الذي يطلق عليه قفص الكائن ، في الغرفة الجانبية الأخرى. افتح الباب وراقب سلوك الماوس الموضوع. اسمح لماوس الهدف بالتحرك بحرية لمدة 10 دقائق وتسجيل أربع معلمات سلوكية.
رقم واحد ، الوقت الذي يقضيه في كل غرفة ، غرفة Stranger One ، غرفة الكائن والغرفة المركزية. ثانيا ، الوقت الذي يقضيه في التحقيق في كل قفص ، قفص Stranger One وقفص الكائن. رقم ثلاثة ، عدد المداخل إلى كل غرفة ورقم أربعة ، المسافة الإجمالية المقطوعة.
بعد أن ينتقل الماوس إلى الغرفة المركزية ، أغلق الأبواب. بعد مسح الأقفاص ، ابدأ تحليل الحداثة الاجتماعية بوضع 129 فأر SV آخر في أحد الأقفاص ، يطلق عليه قفص Stranger Two ، وضع قفص Stranger Two في إحدى الغرف. ضع الفأر الغريب في القفص الآخر ، الذي يطلق عليه قفص Stranger One وضع قفص Stranger One في الغرفة الأخرى.
أخيرا ، افتح الباب وراقب سلوك الماوس الموضوع. اسمح للفأر الموضوع بالتحرك بحرية لمدة 10 دقائق وقياس نفس المعلمات السلوكية الموضحة لتحليل الاجتماعية. ابدأ بوضع الماوس في جهاز تكييف بشروط محددة.
على سبيل المثال ، جهاز مربع بجدران زجاجية شفافة ، وأرضية شبكية معدنية ، ورائحة إيثانول ، وسطوع 100 لوكس ، وضوضاء بيضاء خلفية 65 ديسيبل. قم بتكييف الماوس بالصدمة بالقدم بتوقيت عشوائي زائف لصدمات كهربائية 0.1 مللي أمبير لمدة ثانيتين ثلاث مرات على مدار خمس دقائق. ثم أعد الماوس إلى قفص المنزل بعد التكييف.
في اليوم التالي للتكييف ، قم بإجراء تقييم للذاكرة عن طريق وضع الماوس في نفس الجهاز مثل حالة الصدمة وقياس وقت التجميد على مدار خمس دقائق. في وقت لاحق من نفس اليوم ، ضع الفأر في جهاز جديد وقم بقياس وقت التجميد خلال تقييم مدته خمس دقائق. أخيرا ، قارن وقت التجميد بين نفس الحالة والحالة الجديدة.
أشارت النتائج إلى أن درجة النوبة زادت تدريجيا مع حقن PTZ ، بينما لم يتم استحضار أي نوبات أو سلوكيات غير طبيعية عن طريق الحقن المالحة. علاوة على ذلك ، عززت النوبات المتكررة تكوين الفروع المحورية الشاذة أو إنبات الألياف الطحلبية والهجرة غير الطبيعية للخلايا الحبيبية في الحصين. أظهرت الفئران المعالجة ب PTZ اجتماعية طبيعية.
أمضت الفئران وقتا أطول في غرفة Stranger One أكثر من غرفة الكائن وحققت في قفص Stranger One أكثر مما حققوا في قفص الكائن. أظهرت الفئران المعالجة ب PTZ حداثة اجتماعية غير طبيعية ، مما يدل على ضعف الذاكرة الاجتماعية. أظهرت الفئران المعالجة ب PTZ أيضا ضعفا في الذاكرة في اختبار الخوف السياقي.
باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل متاهة موريس المائية أو اختبارات الذاكرة الأخرى للإجابة على الأسئلة الإضافية حول ضعف قدرة الذاكرة المتأثرة بنوبة الصرع. بعد تطويرها ، تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الصرع لاستكشافها كآلية لاضطرابات النمو العصبية والنفسية التي تسببها النوبات باستخدام نموذجية.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تقدم هذه الدراسة طريقة للتحفيز الكيميائي باستخدام البنتيلين تيترازول (PTZ) لإنشاء نموذج فأر مصاب بالصرع. وهي تبحث في آثار النوبات المتكررة على النتائج السلوكية والتغيرات العصبية الكامنة. تمكن هذه الطريقة الباحثين من استكشاف الاضطرابات النمائية النفسية العصبية الناجمة عن النوبات باستخدام فئران 129 SV.
يوفر نموذج الفئران المحفز بـ pentylenetetrazole (PTZ) منصة قوية وقابلة للتوسع لاستقصاء الآليات الكامنة وراء الصرع والخلل النفسي العصبي الناجم عن النوبات. يتيح هذا النموذج التقييم الكمي للميل للإصابة بالنوبات، والضعف السلوكي، والاعتلال العصبي، مما يدعم الثقة التنبؤية في التحقق من الأهداف في المراحل المبكرة وفحص المركبات. إن قابليته للتكرار وأهميته الانتقالية تجعل منه أصلاً قيماً لتصنيف ملفات المشاريع وتقليل المخاطر الميكانيكية في اكتشاف أدوية الجهاز العصبي المركزي (CNS).
يتكامل هذا النموذج ضمن تسلسل عمليات الاكتشاف، بدءاً من الدراسات الميكانيكية المبكرة وصولاً إلى تحديد المركبات الواعدة والتحقق قبل السريري، مما يدعم كلاً من تقليل المخاطر المرتبطة بالهدف وفرز المركبات.