Name: نموذج الماوس إشعال الناجمة عن بينتيلينيتيترازولي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: اكتشف طريقة إشعال النوبات بالبنتيلينيتيترازول لإنشاء نموذج فأر للصرع، ودراسة التغيرات السلوكية والعصبية الناتجة عن النوبات المتكررة باستخدام فئران 129 SV.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيده هذا العمل جزئيا أرقام المنح JSPS كاكينهي 24700349، 24659093، 25293239، JP18H02536، و 17 ك 07086، أرقام المنح يأمرون كاكينهي 25110737 و 23110525، JP18ek0109311 عدد المنح أوسطي، ومؤسسة البحوث الطبية سينشين واليابان مؤسسة أبحاث الصرع.

وافق جميع الإجراءات التجريبية بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة لطوكيو متروبوليتان معهد العلوم الطبية. بعد الولادة 8-ينصح الفئران عمرها 16 أسبوع. أي سلالة فطري مقبول للتجربة. الفئران C57BL/6 أكثر قدرة على مقاومة بتز، بينما الفئران ألبينو بالب/ج والسويسرية أكثر حساسية بتز. واستخدمت في هذه الدراسة C57BL/6. مشكلة عدم الحصانة بتز يعتمد أيضا على سن الماوس. بالمقارنة مع الفئران الأصغر سنا، الفئران الأكبر سنا أكثر مقاومة للحرارة إلى بتز35. يمكن أن يختلف عدد الحيوانات المستخدمة لهذا الأسلوب، ولكن مالا يقل عن 6-10 الحيوانات المطلوبة لكل حالة.
1-إعداد بتز
<ol><li>حل 2 مغ/مل بتز العقيمة 0.9% (w/v) كلوريد الصوديوم. إعداد بتز اليوم من الاستخدام.</li>
</ol>2-حقن بتز
<ol><li>القيام بتجارب جميع بين 09:00 ص و 12:00 م (ظهرا).</li>
	<li>قياس وزن الجسم للحيوان.</li>
	<li>وضع الحيوان في دائرة مراقبة التعود.</li>
	<li>وخلال فترة التعود (3 دقائق)، حساب حجم الحل بتز لحقن استناداً إلى وزن جسم الحيوان وجرعة حقن سبق تحديدها. ملاحظة: على سبيل المثال، عند استخدام 35 مغ/كغ بتز، مغ 0.875 من بتز مطلوب لماوس يزن 25 جرام (35 مغ/كغ × 0.025 كغ = 0.875 mg). ولذلك ينبغي أن يكون حقن ميكروليتر 437.5 حل بتز 2 مغ/مل (0.875 مغ/2 مغ/مل = 0.4375 مل). حقن جرعة بتز يعتمد على الماوس النمط الوراثي والسلالة. للفئران البرية من نوع C57BL/6، يوصي بجرعة 30-35 ملغ بتز/كغ من وزن الجسم في المحاكمة الأولى. حساسية بتز يعتمد على الماوس الضغط المستخدمة36،37. أن حقن جرعة يختلف باختلاف غرض التجربة.</li>
	<li>حقن بتز إينترابيريتونيلي بحقنه 1 مل المرفقة بإبرة قياس 27 في الربع الأيمن أو الأيسر من البطن للحيوان. تجنب الحقن في خط الوسط.<ol>
<li>تجنب تكرار الحقن في نفس الموضع.</li>
	</ol>
</li>
	<li>مراقبة سلوك الحيوانات لمدة 30 دقيقة بعد الإدارة بتز (الشكل 1A)، وتصنيف ونقاط السلوك الشاذ كما هو موضح أدناه. إذا كان ذلك ممكناً، الاحتفاظ بالحيوانات تحت الملاحظة 24 ساعة، أو على الأقل إضافية 6-10 ح بعد حقنه، خاصة عندما يصل إلى درجة خطورة مصادرة 3 أو أعلى.<ol>
<li>ملاحظة أي مضبوطات معتدل أو التغيرات السلوكية في الحيوانات بعد فترة 30 دقيقة الملاحظة. وهذا لفترة طويلة المراقبة قد تناول الفترة تأثير أهمية خاصة وكاملة من جرعة سوبكونفولسيفي من بتز الجيل من المضبوطات دون سابق استفزاز المزمن في الصرع.</li>
		<li>وباﻹضافة إلى ذلك، قياس مدة الاستيلاء على كل مصادرة الملاحظة كالتغييرات في مدة الاستيلاء تتصل بشدة الاستيلاء. وعلاوة على ذلك، زمن الوصول إلى مصادرة الأولى بعد حقن بتز تدبيرا هاما آخر لجمع. رصد تواتر الاستيلاء، والمدة، والكمون أمر حاسم لأي دراسات ما بعد الاستيلاء الجزيئية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>حقن بتز كل يوم (الشكل 1A). عدد الحقن يعتمد على هدف التجربة. فيما يلي الأمثلة التمثيلية.<ol>
<li>لتوليد الحيوانات اوقدت تماما، وبمجرد تجارب حيوان من الاستيلاء على النقطة 5 (منشط رمعي الاستيلاء)، الانتهاء من الحقن داخل الإدارات الثلاث الإضافية. وفي هذه الحالة، زيادة جرعة الحقن إذا لم زيادة درجة الاستيلاء لثلاث حكومات متتالية. يمكن أن يتلقى كل الحيوانات رقم مختلف وجرعة من حقن بتز.</li>
		<li>تحديد عدد وجرعة من حقن بتز في كل حالة لتقييم تعرض بتز، بما في ذلك تقييمات للأدوية المضادة الصرع ودراسات للنمط الظاهري للفئران المعدلة وراثيا. تعطي جميع الحيوانات بنفس عدد الحقن بتز؛ ويوصي بمجموعة من 8 إلى 12 الحقن. إذا مات حيوان، ينبغي الإشارة إلى نقاط الاستيلاء ك 6.</li>
		<li>تحديد جرعة الحقن اللازمة للحفاظ على ضبط ارتفاع نقاط (4 أو 5) لحقن 10 أو أكثر دراسة التغيرات التشريحية المرضية التي تحدث نوبات الصرع. في هذه الحالة، عدد الحقن الإجمالي يجب أن تتراوح من 25 إلى 30. إنقاص جرعة الحقن إذا كان الاستيلاء على نقاط يصل إلى 5. إذا انخفضت درجة الاستيلاء على 3 أو أقل، زيادة جرعة الحقن.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3-الاستيلاء على نقاط
<ol><li>مراقبة في سلوك الحيوانات وتسجيل النقاط.<ol>
<li>تصنيف وتسجيل السلوكيات الصرع كالتالي38،39 (الشكل 1B): 0: السلوك العادي، لا شذوذ. 1: التثبيت، الكذب في البطن. 2: رأس التقلصات الإيماء أو الوجه أو فوريليمب أو اللكتات. 3: الهزات المستمرة التقلصات كامل الجسم، رمعيه، عقد ذيل تصنع. 4: الضبط تربية، منشط، تسقط على جانبها. 5: منشط رمعي الاستيلاء، تسقط على ظهرها، البرية التسرع والقفز. 6: الموت.</li>
	</ol>
</li>
	<li>قم بتغيير المعايير السلوكية استناداً إلى رأسين نقاط40، تبعاً لظروف تجريبية.</li>
</ol>4-الاستيلاء على ما بعد التحليل
<ol><li>تحليل إيمونوهيستوباثولوجيكال<ol>
<li>تثبيت التروية<ol>
<li>إعداد<ol>
<li>حل 4% (w/v) بارافورمالدهيد (PFA) في المخزن المؤقت للفوسفات 0.1 M (درجة الحموضة 7.4). الحرارة الحل إلى ما يقارب 70 درجة مئوية بالإضافة إلى قطره من هيدروكسيد الصوديوم 1 متر (حوالي 1 ميليلتر من هيدروكسيد الصوديوم م 1 لحل منهاج العمل 50 مل).</li>
				<li>إعداد المثلج 4% منهاج عمل بيجين والفوسفات مخزنة المالحة (PBS).</li>
				<li>إقامة مضخة تمعجية، مع الأنبوب والإبرة. قم بتشغيل حوالي 20 مل مياه من خلال أنبوب لمسح بقايا. ثم، ضع نهاية الأنبوب مفتوح في برنامج تلفزيوني المثلج.</li>
			</ol>
</li>
			<li>نضح ترانسكارديال وإعداد للدماغ ثابت<ol>
<li>تخدير عميق الماوس مع الإيثانول isoflurane/50% 50% في جرة صغيرة.</li>
				<li>تبقى الماوس في وضع ضعيف بتعلق نصائح الأمامية وهيندليمبس.</li>
				<li>قطع خط الوسط البطني من البطن وكشف الحجاب الحاجز.</li>
				<li>قطع الحجاب الحاجز على طول الهامش الساحلي. ثم قطع الجانبين الأفقي من أضلاعه والجسم. قرصه عملية الرهابه بالملقط تأمين وايفرت القفص الصدري. متمسكة بموقفها عملية الرهابه التي تعلق عليه بإبرة أو معسر فإنه مع الملقط. كشف القلب.</li>
				<li>أدخل الإبرة في البطين الأيسر وقطع في الاذين الأيمن باستخدام مقص. كن على علم لا لدفع الإبرة بعيداً جداً في القلب، كما أنه يمكن بيرس الجدران داخلية.</li>
				<li>بدء تدفق مستمر لبرنامج تلفزيوني المثلج من خلال الإبرة لتغسل الدم (حوالي 15-20 مل/دقيقة).</li>
				<li>عندما تم مسح الدم من الجسم، تحريك الأنبوبة إلى حل بارافورمالدهيد 4% (حوالي 60 مل) دون إضافة فقاعات. ثم قم بإيقاف في التروية.</li>
				<li>قص الرقبة الخلفي والعمود الفقري وتقشر الجلد الرأس والجزء الظهرية الجمجمة مع تشريح المقص.</li>
				<li>قطع عظم بريماكسيلاري بين مدارات العين وإزالة الجزء الظهرية للجمجمة.</li>
				<li>خلق فجوة بين الدماغ والعظام جوجال من الجانب الخلفي وقطع الأعصاب تريجيمينال و chiasm البصرية تحت الدماغ. بعناية إزالة الدماغ ووضعه في قنينة تحتوي على 4% منهاج عمل بيجين. بعد إصلاح الدماغ في 4 درجات مئوية عن ح 12-16.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>إعداد شريحة الدماغ<ol>
<li>نقل الدماغ ثابت إلى 20% السكروز/برنامج تلفزيوني حتى الدماغ المصارف في حل للسماح كريوبروتيكتيون.</li>
			<li>قص الدماغ الثابتة استناداً إلى اتجاه الشريحة المطلوبة والجزء المطلوب من الدماغ.</li>
			<li>تعيين كريوميكروتومي. تعيين بليد في الموقف والحفاظ على مرحلة مبضع عند درجة حرارة تقل عن-20 درجة مئوية.</li>
			<li>مكان في الدماغ قبل قطع على المسرح ومعطف الدماغ مع السكروز 20%/برنامج تلفزيوني. حل السكروز/برنامج تلفزيوني ستجمد تدريجيا، تغطي الدماغ في المرحلة، حتى الدماغ تماما مضمن في السكروز 20% مجمدة/برنامج تلفزيوني.</li>
			<li>شريحة الدماغ (30 ميكرون سمك) من انزلاق شفرة عن طريق الأنسجة. نقل الشرائح في برنامج تلفزيوني والاحتفاظ بها في 4 درجات مئوية.</li>
		</ol>
</li>
		<li>إيمونوهيستوتشيميستري نيون<ol>
<li>تغسل شرائح اللازمة في 0.1% تريتون العاشر-100/برنامج تلفزيوني (ببست) لمدة 10 دقائق، 3 مرات في درجة حرارة الغرفة (RT).</li>
			<li>كتلة الشرائح التي تفرخ لهم في ببست مع 2% الماعز المصل أو 5% البقري ألبومين المصل (BSA) ح 1-2 في الرايت</li>
			<li>احتضان الشرائح في حلاً جسم مع تركيز مناسب من جسم الأولية في ببست مع 2% الماعز المصل أو 5% جيش صرب البوسنة أوفيرنايتس 1 إلى 7 في 4 درجات مئوية.</li>
			<li>تغسل الشرائح في ببست لمدة 10 دقائق، 3 مرات في الرايت</li>
			<li>احتضان الشرائح في حل جسم ثانوي مع تركيز مناسب لجسم الثانوية في ببست ح 1-2 في الرايت، محمية بالضوء.</li>
			<li>تحميل الشرائح على الشرائح الزجاجية وتغطية مع تصاعد المتوسطة وتغطية الزجاج.</li>
			<li>مراقبة الشرائح مع الفحص المجهري الأسفار.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>3-دائرة الاختبار<ol>
<li>إعداد<ol>
<li>إعداد على الأقل 2 2--الفئران 129/Sv عمره 6 أشهر من نفس الجنس كالفئران هذا الموضوع أن يكون الماوس "غريب". روض جميع الفئران في القفص قبل التحليل. لكل دورة تدريبية، ضع الماوس في القفص واترك الماوس لمدة 15 دقيقة.</li>
			<li>قبل كل مرحلة التعود مع الماوس هذا الموضوع، بتنظيف الجهاز برمته وكل الأقفاص بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>وضع الأقفاص الفارغة في الدوائر الجانبية على الجهاز 3-الدائرة وفتح الأبواب بين الدوائر.</li>
			<li>روض الماوس الموضوع، ضع ماوس موضوع في قاعة مركز والسماح للماوس للتنقل بحرية في جميع أنحاء الجهاز حتى الماوس وحقق كلا أقفاص، بالإضافة إلى القيام حيوانات موضوع الحد أدنى 5 إضافية قد تكون خوفاً من القفص لا التحقيق في القفص لمدة 20 دقيقة، ولا ينبغي أن تستخدم لهذا التحليل. تجنب القفص مثل هذه الحيوانات ونادراً ما تقترب من القفص.</li>
			<li>بعد انتقال الحيوان في قاعة المركز، إغلاق الأبواب وترك الماوس تتحرك بحرية في قاعة مركز لمدة 5 دقائق. وخلال هذه الفترة، وضع واحد من الفئران 129/Sv في قفص روض إلى القفص.</li>
		</ol>
</li>
		<li>تحليل بالمجتمع<ol>
<li>القيام بهذا التحليل مباشرة بعد فترة التعود الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>ضع القفص الذي يحتوي على ماوس 129/Sv، يطلق عليه "القفص غريب 1"، في واحدة من جانب الدوائر ومكان القفص فارغاً، يطلق عليه "القفص الكائن"، في قاعة جانبية أخرى.</li>
			<li>فتح الباب، ورصد سلوك الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>السماح لهذا الموضوع الماوس للتحرك بحرية لمدة 10 دقائق، وسجل المعلمات السلوكية التالية. إذا كان الماوس الموضوع يخاف من الماوس في القفص 1 غريب، كما هو مبين بالماوس تجنب القفص 1 غريب والمتبقية في الزاوية لإحدى الدوائر، ينبغي عدم استخدام الحيوان للتحليل. أ) الوقت المستغرق في كل دائرة، والدائرة 1 غريب، الدائرة الكائن، ومركز الدائرة. ب) الوقت المستغرق التحقيق في كل قفص والقفص 1 غريب والقفص الكائن. (الماوس تصنف على أنها للالتجلد بالماوس أو قفص أو التحقيق في القفص إذا هو استنشاق الماوس) ج) عدد المداخل في كل دائرة (اختياري) د) سافر مسافة المجموع (اختياري)</li>
			<li>بعد تحريك الماوس في قاعة مركز، قم بإغلاق الأبواب.</li>
		</ol>
</li>
		<li>التحليل الاجتماعي والجدة<ol>
<li>القيام بهذا التحليل بعد التحليل بالمجتمع مباشرة.</li>
			<li>مسح كلا أقفاص مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>مكان آخر 129/Sv الماوس في أحد الأقفاص، يطلق عليه "قفص غريب 2" والقفص مكان 2 غريب في إحدى الدوائر. ضع الماوس 1 غريب في قفص آخر، يسمى "القفص غريب 1"، ووضع القفص 1 شخص غريب في غرفة أخرى.</li>
			<li>فتح الباب، ورصد سلوك الماوس هذا الموضوع.</li>
			<li>السماح لهذا الموضوع الماوس للتحرك بحرية لمدة 10 دقائق، وقياس نفس المعلمات السلوكية ووصف للتحليل بالمجتمع. ملاحظة: ينبغي اختيار الماوس غريب 1 و 2 غريب عشوائياً. وينبغي تحديد الدائرة 1 غريب والدائرة الكائن، فضلا عن الدائرة 1 غريب والدائرة 2 غريب عشوائياً.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>التمييز الخوف السياقية<ol>
<li>تكييف<ol>
<li>قبل كل محاكمة تكييف، تنظيف الجهاز التجريبي بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>ضع ماوس في جهاز تكييف مع الظروف المحددة (شكل الجهاز لون الجدار، الكلمة، ورائحة، والإضاءة ومواد حجم الضوضاء الخلفية ينبغي أن تحدد مسبقاً). على سبيل المثال، جهاز تكييف، استخدمت هنا كان جهاز مربعة مع الجدران شبكي واضحة وطابق شبكة معدنية، رائحة الإيثانول، وسطوع لوكس 100 والضوضاء البيضاء خلفية 65-dB.</li>
			<li>شرط الماوس بصدمة سيرا على الأقدام مع توقيت شبه عشوائي للصدمات الكهربائية 0.1-اماه 2 s x 3 مرات على مدى 5 دقائق.</li>
			<li>العودة الماوس إلى القفص المنزل بعد تكييف.</li>
		</ol>
</li>
		<li>تقييم الذاكرة<ol>
<li>قبل كل تقييم، بتنظيف الجهاز التجريبي بمسح السطح مع الإيثانول 70%.</li>
			<li>وفي اليوم التالي تكييف التالي، ضع الماوس في الجهاز نفسه كحالة الصدمة وقياس الوقت بالتجميد على مدى 5 دقائق.</li>
			<li>في وقت لاحق في نفس اليوم، ضع الماوس في جهاز رواية وقياس الوقت تجميد أثناء إجراء تقييم 5-دقيقة. تم استخدام جهاز ثلاثي مع الجدران البيضاء شبكي، والكلمة لوحة، لا رائحة، السطوع لوكس 30 والضوضاء البيضاء 70-dB هنا.</li>
			<li>مقارنة وقت التجميد بين نفس الشرط وشرط الرواية. سوف تجمد الفئران مع قدرة ذاكرة عادي أكثر في نفس الحالة مما في حالة الرواية. التجميد جمود المعرفة من الحيوان لأكثر من 2 ثانية.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

نقدم هنا، بروتوكول متاحة على نطاق واسع لإنشاء نموذج الحيوان الدوائي للصرع. بوساطة بتز إشعال الكيميائية لها تاريخ طويل وهو نموذج مقبولة عموما لدراسة باثولوجيا التشريح المرضى والخلوي للصرع41. نموذج إشعال الكيميائية من الصرع وقد استعرضت سابقا سوزداك ويانسن، 199542. التعريفي مصادرة الدوائية، لا سيما مع بتز، طريقة سهلة وبسيطة تستحضر مضبوطات الحادة. التغييرات في حقن جرعة ترتبط بشدة الاستيلاء. وبالتالي، تحديد الجرعة المناسبة عبر عدة محاكمات بتغيير الجرعة بتز ودراسة السلوك الناتج م...

الصرع هو اضطراب عصبي مزمنة التي تتسم بالنوبات المتكررة، ويؤثر على ما يقرب من 1 في المائة شعب. لا يمكن توضيح الآليات الكامنة من جيل ابيليبتوجينيسيس وضبطها في مرضى الصرع تماما في الدراسات السريرية. ولذلك، مطلوب نموذج حيوان مناسب لدراسة الصرع1.
وقد استخدمت مجموعة متنوعة من نماذج حيوانية للصرع للتحقيق في علم وظائف الأعضاء الصرع وتحديد العقاقير المضادة للصرع2،3. بين هذه النماذج، تحريض الاستيلاء الدوائي طريقة شائعة تستخدم لتوليد نموذج حيوان للتحقيق في علم الأمراض الصرع4. هذا الأسلوب غير مكلفة وبسيطة. قطب كهربائي بوساطة إشعال أيضا طريقة شائعة استخدام، ولكن تكاليف هذا الإجراء أعلى، والأسلوب يتطلب المهارات الكهربائية والعمليات الجراحية للحث على مضبوطات المتكررة5.
التعريفي الدوائية مفيد أيضا لأنه يتم التحكم في توقيت وعدد المضبوطات بسهولة. كما تستخدم نماذج الماوس الوراثية التي يحمل مضبوطات عفوية في الدراسة للصرع. ومع ذلك، قد يكون التنبؤ متى وكيف في كثير من الأحيان المضبوطات تنشأ في هذه النماذج الوراثية المستحيل6. مطلوب نظام رصد مراقبة سلوك الفئران المعدلة وراثيا6الصرع.
حمض كينك وبيلوكاربيني وبينتيلينيتيترازولي (بتز) تستخدم على نطاق واسع كالمخدرات الذي يحفز الاستيلاء على7. حمض كينك مؤثر على مستقبلات الغلوتامات، و pilocarpine ينشط مستقبلات اتروبين. بتز حمض غاما أمينوبوتيريك (GABA)-خصم مستقبلات8. يمنع بتز وظيفة الاشتباكات العصبية المثبطة، مما يؤدي إلى زيادة نشاط الخلايا العصبية. هذه اللائحة يسبب النوبات المعممة في الحيوانات9. حقنه واحدة من حمض كينك وبيلوكاربيني يمكن أن يستحث مضبوطات الحادة، لا سيما مركز epilepticus (جنوب شرق)10،11 وكينك حمض-أو بيلوكاربيني-بوساطة سراج الدين يعزز مضبوطات عفوية والمتكررة المزمنة12 , 13-بينت تسجيلات اليكترونسيفالوجرافيك (EEG) وتحليل السلوك الالتزام بعفوية النوبات المتكررة بعد12،حقنه واحدة13شهر. حقنه واحدة لجرعة التشنجية من بتز يستحث أيضا الاستيلاء على حدة. ومع ذلك، المضبوطات عفوية المزمنة بعد حقنه واحدة من بتز صعبة لتعزيز. الإدارة المزمن من بتز مطلوب للحث على مضبوطات المتكررة14. في أي من الطريقتين، يتم توليد النوبات المتكررة قادرة على حمل علم أمراض أكثر مشابهة للصرع البشرية من جيل مضبوطات الحادة. في حالة بتز، يستحضر كل حقن من الاستيلاء، ويصبح أشد شدة الاستيلاء بطريقة تدريجية مع كل حقن. وأخيراً، يدفع حقنه بتز جرعة منخفضة وحيدة الاستيلاء منشط بهلوانية شديدة. في هذه المرحلة، يستحضر كل حقن مضبوطات الحادة. وباﻹضافة إلى ذلك، الكمون الاستيلاء والمدة أيضا تغيير على مدى الحقن. زمن الوصول للاستيلاء على منشط غالباً ما يصبح أقصر في المرحلة الأخيرة من إشعال15. وعلاوة على ذلك، تفاقم الاستيلاء يرافقه مدة حجز مطول16. التحقيق الآلية الجزيئية تنظيم شدة الاستيلاء، الكمون، ومدة مفيد لفحص العقاقير المضادة للصرع17،،من1819.
المضبوطات هي عادة الناجمة عن إدارة منهجية واحدة من بتز، والانتعاش سريع جداً، في غضون 30 دقيقة4،5. وهكذا، عدد المضبوطات يمكن التحكم أكثر في نموذج إشعال بتز. بيد أن رصد EEG أوضحت أن المسامير المعمم قد يعتبر ما يصل إلى 12 ساعة بعد وساطة بتز مصادرة20. ولذلك، ينبغي أن تظل الحيوانات يفضل أن يكون ذلك تحت المراقبة 24 ساعة بعد الاستيلاء على رمعيه أو منشط21 لتحليل أكثر دقة آليات إشعال.
إدارة العقاقير المضادة للصرع، مثل اثوسوكسيميدي، فالبرويت، الفينوباربيتال، فيجاباترين وريتيجابيني3، قبل أو بعد حقن بتز يخفف من تفاقم الاستيلاء على شدة3،22، 23. وبالمثل، أظهرت الفئران خروج المغلوب أن نقص الجينات متورطة في تفاقم مصادرة، مثل مصفوفة أية-924، 22 صندوق الأجيال القادمة25 ونيوريتين26، يحمل الاستيلاء على انخفاض حدة عقب حقنات متعددة بتز. وباﻹضافة إلى ذلك، مراقبة تغييرات نسيجية بعد نوبات الصرع ممكن مع هذا الأسلوب. في المرضى الذين يعانون من الصرع الفص الصدغي، هناك نموذجي تغييرات نسيجية في الدماغ، مثل الألياف المطحلب تنتشر الخلايا العصبية، أستروجليوسيس3027،28، الحبيبية الشاذ العصبية الهجرة29 الوفاة في قرن آمون31،32والتصلب هيبوكامبال33. ولوحظت تغييرات مماثلة في الحيوانات النموذجية الصرع. بين الأساليب المتاحة، تأجيج الكيميائية بتز بوساطة طريقة جيدة واستنساخه وغير مكلفة لإنتاج نموذج حيوان من الصرع. في طراز SE بيلوكاربيني بوساطة، الاستيلاء على التحكم صعب ويموت العديد من الفئران أو تفشل في وضع سراج الدين34. وفي المقابل، الوفيات وشدة الاستيلاء أكثر السيطرة عليها في نموذج بتز. بالإضافة إلى ذلك، بتز أقل تكلفة من حمض كينك، والمهارات في مجال جراحة الدماغ الماوس غير مطلوبة لإدارة المخدرات.

<table><tbody><tr><td>Pentylenetetrazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6500</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم</td><td>MANAC</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>ماوس</td><td>CLEA Japan</td><td></td><td>C57Bl / 6NJcl ، بعد الولادة 8 أسابيع ،</td></tr><tr><td>حقنة ذكور (1 مل)</td> إبرة <td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>(27 جم × 3/4 بوصة) (0.40 × 19 مم)</td> مقياس <td>وزن</td><td></td> Terumo NN-2719S <td></td></tr><tr><td></td><td>Mettler</td><td>PE2000</td><td>هذا المنتج هو منتج متوقف. يعادل تقريبا FX-2000i مع FXi-12-JA من A& شركة د.</td></tr><tr><td>بارافورمالديهايد</td><td>سيجما-ألدريتش</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>هيدروكسيد الصوديوم</td><td>ناكالاي تيسك</td><td>31511-05</td><td></td></tr><tr><td>مضخة بريستاتيكي</td><td>ATTO</td><td>SJ1211</td><td></td></tr><tr><td>السكروز</td><td>ناكالاي تيسك</td><td>30404-45</td><td></td></tr><tr><td>ميكروتوم</td><td>ياماتو</td><td>REM-700</td><td>هذا العنصر هو منتج متوقف. يعادل تقريبا REM-710</td></tr><tr><td>Microtome blade</td><td>Feather</td><td>S35</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>أنظمة الأجسام المضادة المضادة للسينابتوبورين</td><td></td><td>102 002</td><td></td></tr> أنظمة <tr><td>متشابك</td><td>مضادة للأجسام المضادة ل ZnT3</td><td>197 002</td><td></td></tr><tr><td>مضاد للكورتين</td><td>المزدوج سانتا</td><td>كروز sc-8066</td><td>هذا العنصر هو منتج متوقف. لم نختبر منتجا مكافئا (SC-271390).</td></tr><tr><td>جهاز اختبار تمييز الخوف السياقي</td><td>أوهارا</td><td></td><td></td></tr><tr><td>جهاز اختبار ثلاثي الغرف</td><td>موروماتشي</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

نموذج الماوس إشعال الناجمة عن بينتيلينيتيترازولي

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

بينتيلينيتيترازولي (بتز) خصم مستقبلات GABA A. حقن داخل من بتز في حيوان يدفع مصادرة حادة، شديدة بجرعة عالية، بينما استخدمت حقن متسلسلة من جرعة سوبكونفولسيفي لتطوير مادة كيميائية إشعال، نموذج لصرع. يدفع حقن جرعة منخفضة وحيدة من بتز نوبة خفيفة دون تشنج. بيد المتكررة حقن جرعة منخفضة من بتز انخفاض عتبة تثير نوبة التشنجية. أخيرا، الحث المستمر الإدارة جرعة منخفضة من بتز الاستيلاء منشط بهلوانية شديدة. هذا الأسلوب بسيطة وقابلة للتطبيق على نطاق واسع للتحقيق في الفسيولوجيا المرضية للصرع، الذي يعرف بأنه أمراض مزمنة التي تتضمن نوبات متكررة. هذه المادة الكيميائية إشعال البروتوكول تسبب النوبات المتكررة في الحيوانات. مع هذا الأسلوب، قدرت التأثر بوساطة بتز المضبوطات أو درجة تفاقم نوبات الصرع. وأدت هذه المزايا لاستخدام هذا الأسلوب لفحص العقاقير المضادة للصرع والجينات المتعلقة بالصرع. وبالإضافة إلى ذلك، استخدمت هذا الأسلوب للتحقيق في الأضرار العصبية بعد نوبات الصرع لأن تظهر أيضا التغييرات النسيجي لوحظت في أدمغة مرضى الصرع في أدمغة الحيوانات اوقدت الكيميائية. وهكذا، هذا البروتوكول مفيد لسهولة إنتاج نماذج حيوانية للصرع.

حقن متكررة من بتز الحث على زيادة في شدة الاستيلاء. ستة C57BL/6 الفئران تعامل مع بتز، والفئران 6 آخر تعامل مع المالحة كمجموعة مراقبة. الجرعة بتز 35 مغ/كغ، وكانت تدار من حقن 10. زادت درجة الاستيلاء تدريجيا مع حقن بتز، بينما كانت أثارت لا مضبوطات أو سلوكيات غير طبيعية قبل الحقن المالحة (الشكل 2). وأظهرت ANOVA متبوعاً باختبار بونفيروني فرق كبير بين المجموعة تعامل بتز وفريق المعالجة بالمياه المالحة.
المص...

توضح هذه المقالة طريقة لإشعال المواد الكيميائية مع بينتيلينيتيترازولي هذا البروتوكول ويقدم نموذجا ماوس من الصرع. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول للتحقيق في التعرض للاستيلاء على الاستقراء والمرضية بعد نوبات الصرع في الفئران.

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في التحليل العميق للصرع. ستؤدي النوبة إلى حدوث تغيرات نسيجية في الدماغ والتي قد تشارك في اضطرابات النمو العصبية والنفسية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن جرعة الانعكاس الذاتي من PTZ يمكن أن تحفز نوبات يمكن السيطرة عليها بشكل أفضل من الطرق الحالية الأخرى.ابدأ في تحضير الحقن عن طريق إذابة 2 ملليغرام لكل مليلتر PTZ في معقم 0.9 في المائة كلوريد الصوديوم. قم بوزن ، ثم ضعه في غرفة المراقبة لمدة 3 دقائق. بعد ذلك ، قم بحقن PTZ بين الصفاق مع حقنة سعة 1 مليلتر متصلة بإبرة قياس 27 في الربع الأيسر أو الأيمن من بطن.أخيرا ، راقب بعد حقن PTZ بحثا عن سلوك غير طبيعي. احصل على ما لا يقل عن فأرين 129 SV تتراوح أعمارهم بين شهرين وستة أشهر من نفس جنس الفئران الموضوعة لتكون الفأر الغريب. يجب الاحتفاظ بكل فأر غريب على حدة.لكل جلسة تدريبية ، اترك الماوس في القفص للتعود لمدة 15 دقيقة. نظف الجهاز بالكامل في كلا القفصين عن طريق مسح السطح بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد ذلك ، ضع الأقفاص الفارغة في الغرفتين الجانبيتين للجهاز المكون من ثلاث غرف وافتح الأبواب بين الغرف.لتعود على الماوس الموضوع ، ضع الماوس الموضوعي في الغرفة المركزية واسمح للماوس بالتحرك بحرية في جميع أنحاء الجهاز حتى يفحص الماوس كلا القفصين ، بالإضافة إلى خمس دقائق إضافية. بعد أن ينتقل إلى الغرفة المركزية ، أغلق الأبواب واترك الماوس يتحرك بحرية في الغرفة المركزية لمدة خمس دقائق. خلال هذه الفترة ، ضع أحد الفئران ال 129 SV في قفص لتعتاد على القفص.مباشرة بعد فترة التعود على الماوس الموضوع ، ضع القفص الذي يحتوي على الماوس 129 SV ، الذي يطلق عليه قفص Stranger One ، في إحدى الغرف الجانبية وضع القفص الفارغ ، الذي يطلق عليه قفص الكائن ، في الغرفة الجانبية الأخرى. افتح الباب وراقب سلوك الماوس الموضوع. اسمح لماوس الهدف بالتحرك بحرية لمدة 10 دقائق وتسجيل أربع معلمات سلوكية.رقم واحد ، الوقت الذي يقضيه في كل غرفة ، غرفة Stranger One ، غرفة الكائن والغرفة المركزية. ثانيا ، الوقت الذي يقضيه في التحقيق في كل قفص ، قفص Stranger One وقفص الكائن. رقم ثلاثة ، عدد المداخل إلى كل غرفة ورقم أربعة ، المسافة الإجمالية المقطوعة.بعد أن ينتقل الماوس إلى الغرفة المركزية ، أغلق الأبواب. بعد مسح الأقفاص ، ابدأ تحليل الحداثة الاجتماعية بوضع 129 فأر SV آخر في أحد الأقفاص ، يطلق عليه قفص Stranger Two ، وضع قفص Stranger Two في إحدى الغرف. ضع الفأر الغريب في القفص الآخر ، الذي يطلق عليه قفص Stranger One وضع قفص Stranger One في الغرفة الأخرى.أخيرا ، افتح الباب وراقب سلوك الماوس الموضوع. اسمح للفأر الموضوع بالتحرك بحرية لمدة 10 دقائق وقياس نفس المعلمات السلوكية الموضحة لتحليل الاجتماعية. ابدأ بوضع الماوس في جهاز تكييف بشروط محددة.على سبيل المثال ، جهاز مربع بجدران زجاجية شفافة ، وأرضية شبكية معدنية ، ورائحة إيثانول ، وسطوع 100 لوكس ، وضوضاء بيضاء خلفية 65 ديسيبل. قم بتكييف الماوس بالصدمة بالقدم بتوقيت عشوائي زائف لصدمات كهربائية 0.1 مللي أمبير لمدة ثانيتين ثلاث مرات على مدار خمس دقائق. ثم أعد الماوس إلى قفص المنزل بعد التكييف.في اليوم التالي للتكييف ، قم بإجراء تقييم للذاكرة عن طريق وضع الماوس في نفس الجهاز مثل حالة الصدمة وقياس وقت التجميد على مدار خمس دقائق. في وقت لاحق من نفس اليوم ، ضع الفأر في جهاز جديد وقم بقياس وقت التجميد خلال تقييم مدته خمس دقائق. أخيرا ، قارن وقت التجميد بين نفس الحالة والحالة الجديدة.أشارت النتائج إلى أن درجة النوبة زادت تدريجيا مع حقن PTZ ، بينما لم يتم استحضار أي نوبات أو سلوكيات غير طبيعية عن طريق الحقن المالحة. علاوة على ذلك ، عززت النوبات المتكررة تكوين الفروع المحورية الشاذة أو إنبات الألياف الطحلبية والهجرة غير الطبيعية للخلايا الحبيبية في الحصين. أظهرت الفئران المعالجة ب PTZ اجتماعية طبيعية.أمضت الفئران وقتا أطول في غرفة Stranger One أكثر من غرفة الكائن وحققت في قفص Stranger One أكثر مما حققوا في قفص الكائن. أظهرت الفئران المعالجة ب PTZ حداثة اجتماعية غير طبيعية ، مما يدل على ضعف الذاكرة الاجتماعية. أظهرت الفئران المعالجة ب PTZ أيضا ضعفا في الذاكرة في اختبار الخوف السياقي.باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل متاهة موريس المائية أو اختبارات الذاكرة الأخرى للإجابة على الأسئلة الإضافية حول ضعف قدرة الذاكرة المتأثرة بنوبة الصرع. بعد تطويرها ، تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الصرع لاستكشافها كآلية لاضطرابات النمو العصبية والنفسية التي تسببها النوبات باستخدام نموذجية.

pentylenetetrazole-induced-kindling-mouse-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

يعرض هذا الفيديو إجراء إحداث حالة الصرع (SE) في الفئران عن طريق الإعطاء الجهازي للبيلوكاربين لنمذجة صرع الفص الصدغي.

علاج بيلوكاربين الجهازي: نموذج الفأر لصرع الفص الصدغي

يوضح هذا الفيديو إجراء إحداث نوبات ناتجة عن الحرارة في فأر معدل وراثيا مصاب بطفرات جينية مرتبطة بالصرع عن طريق زيادة درجة حرارة الجسم تدريجيا في غرفة خاضعة للرقابة. يستخدم هذا البروتوكول لدراسة آليات النوبات والعلاجات المحتملة للصرع.

تحفيز ومراقبة النوبات الناجمة عن الحرارة في نموذج فأر معدل وراثيا

يوضح هذا الفيديو عملية إحداث الصرع في الفئران باستخدام حقن البنتيلين تترازول (PTZ) ، وهو مضاد لمستقبلات GABA-A. يؤدي الإعطاء المتكرر داخل الصفاق ل PTZ إلى تقليل عتبة النوبات تدريجيا عن طريق تثبيط تدفق أيونات الكلوريد ، وتعطيل النقل العصبي المثبط ، ويؤدي إلى فرط الاستثارة في الخلايا العصبية التي تؤدي إلى النوبات. تؤدي هذه العملية إلى إشعال وتطور النوبات التلقائية ، التي تحاكي الصرع المزمن.

إنشاء نموذج نوبات الصرع الناجم عن البنتيلينتيترازول في الفئران

المصدر: Shandra، O.  et al.,  إحداث صرع ما بعد الصدمة في نموذج فأر لإصابات الدماغ الرضحية المنتشرة المتكررة.  J. Vis. Exp.

تقنية للحث على نوبات ما بعد الصدمة في نموذج فأر عن طريق إصابة رضحية بانخفاض الوزن

المعدلة وراثيا وخروج المغلوب نماذج الماوس من الأمراض العصبية هي مفيدة لدراسة دور الجينات في الفسيولوجيا العصبية العادية وغير العادية. يصف هذا المقال المنهجيات التي يمكن استخدامها لدراسة التقوية طويلة الأمد، وهي آلية الخلوية التي قد تكمن وراء التعلم والذاكرة، وبالضربة القاضية في المعدلة وراثيا بحرية التصرف نماذج الماوس من أمراض الأعصاب.

التقوية طويلة الأمد من المسار الثاقب-التلفيف المسنن سنبس في يتصرفون بحرية الفئران

توضح هذه الورقة أداء الوخز بالإبر ونماذج الصرع وتحليل النوم في القوارض. يتم وصف إجراء الوخز بالإبر وتحديد نقاط الوخز بالإبر. يستخدم بيلوكاربين أو بنتيلينيتيترازول (PTZ) للحث على الصرع. يتم استخدام مخطط كهربية الكورتيكومتر (ECoG) ، ومخطط كهربية العضل (EMG) ، ودرجة حرارة الدماغ ، وتسجيلات النشاط الحركي لتحليل النوم.

التلاعب صرعي Electrocorticograms (ECoGs) والنوم في الجرذان والفئران التي الوخز بالإبر

يصف هذا البروتوكول المنهجي نموذجًا جديدًا للصرع ما بعد الصدمة بعد إصابات الدماغ الخفيفة المتكررة. الجزء الأول تفاصيل خطوات لتحريض إصابات الدماغ الرضية باستخدام نموذج انخفاض الوزن المعدلة. ويقدم الجزء الثاني تعليمات بشأن النهج الجراحي لنظم الحصول على البيانات الكهروالدماغة أحادية ومتعددة القنوات.

تحريض الصرع ما بعد الصدمة في نموذج الماوس من إصابات الدماغ المتكررة منتشر الصدمة

يصف هذا التقرير طرق توليد نموذج لصرع الفص الصدغي بناء على الإشعال الكهربائي للفئران المعدلة وراثيا VGAT-Cre. قد تكون فئران VGAT-Cre المشابهة مفيدة في تحديد أسباب الصرع وفحص العلاجات الجديدة.

تحضير وزرع أقطاب كهربائية لفئران VGAT-cre المشتعلة كهربائيا لتوليد نموذج لصرع الفص الصدغي

تلعب اللوزة دورا رئيسيا في صرع الفص الصدغي ، الذي ينشأ في هذا الهيكل وينتشر منه. تقدم هذه المقالة وصفا مفصلا لتصنيع أقطاب الدماغ العميقة مع كل من وظائف التسجيل والتحفيز. يقدم نموذجا لصرع الفص الصدغي الإنسي الناشئ من اللوزة.

استخدام قطب كهربائي ثنائي القطب لإنشاء نموذج فأر صرع الفص الصدغي عن طريق إشعال اللوزة كهربائيا

يقدم البروتوكول طريقة مبتكرة لتحليل وتصور السلوكيات المرتبطة بنتيلين إيترازول بالنوبات التي يسببها البنتيلينيترازول في الفئران. يمتد هذا النهج إلى ما هو أبعد من درجات راسين التقليدية ، مما يوفر تقييما أكثر شمولا للتنوع والديناميكيات الزمنية لسلوكيات ictal.

التوصيف السلوكي للنوبات الناجمة عن البنتيلينتيترازول: تجاوز مقياس راسين

اكتشف طريقة إشعال النوبات بالبنتيلينيتيترازول لإنشاء نموذج فأر للصرع، ودراسة التغيرات السلوكية والعصبية الناتجة عن النوبات المتكررة باستخدام فئران 129 SV.

نموذج الماوس إشعال الناجمة عن بينتيلينيتيترازولي

استكشف المزيد من الفيديوهات