قبل التكييف الهوائية للفئران مع بليوميسين يزيد من كفاءة Engraftment خلية سرطان الرئة أورثوتوبيك

الهدف العام من هذا الإجراء هو زيادة كفاءة زرع خلايا سرطان الرئة التي تبدأ الورم في الشعب الهوائية للفئران. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في إنشاء نماذج ما قبل السريرية الجديدة من أجل الإجابة على الأسئلة الرئيسية في بيولوجيا السرطان ، بما في ذلك أسباب مقاومة الأدوية والعلاقة بين التليف وسرطان الرئة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تزيد من كفاءة زرع الخلايا التي تبدأ الورم في رئتي مجموعة متنوعة من سلالات الفئران.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى العلاج ، لأنها تمكننا من نمذجة مجموعة أكبر من الأنواع الفرعية لسرطان الرئة البشري ، المعروف أن لها استجابات سريرية مختلفة للعلاج. بالنسبة لهذا البروتوكول ، يجب أولا حقن الفئران بالبليومايسين. ثم ، بعد 14 يوما ، يتم حقن الخلايا السرطانية.

الإجراء الخاص بكلتا الحقنتين متشابه جدا ويوصف هنا. قبل ساعتين من الحقن ، قم بإذابة مخزون البليومايسين على الثلج وتخفيفه إلى تركيز العمل. احتفظ بها على الجليد.

بالنسبة للبلعة الخلوية، أعد معلق الخلية كما هو موضح في بروتوكول النص. مدة الإجراء لكل فأرة حوالي 10 دقائق معا. تأكد من تأكيد التخدير المناسب باستخدام قرصة إصبع القدم ، ووضع مرهم بيطري على العينين.

في هذا الوقت ، إذا كان الفأر لديه شعر داكن ، فقم بحلق منطقة الضلع بأكملها من الناحية البطنية والظهرية حتى يمكن تصويرها بشكل صحيح. بعد ذلك ، ضع الماوس على منصة التنبيب عن طريق تثبيته من أسنانه الأمامية مع ظهره على المنصة. إذا كان سيتم حقن بلعة خلوية ، فقم بتعليقها الآن مع التجربة اللطيفة.

الآن قم بإضاءة منطقة الجزء العلوي من الصدر ، وافتح الفم ، واسحب اللسان برفق باستخدام ملقط مسطح. قم بإعداد قسطرة وريدية للقصبة الهوائية عن طريق إزالة الإبرة ، ثم ضعها فوق فتحة القصبة الهوائية. بعد ذلك ، أدخل القسطرة في القصبة الهوائية حتى يكون الجزء العلوي من القسطرة بالقرب من الأسنان الأمامية ويضيء الجزء الداخلي من القسطرة لتأكيد موضعها.

بعد ذلك ، قم بتوزيع 50 ميكرولترا من البليومايسين الطازج ، أو تعليق الخلية ، مباشرة في القسطرة. انتظر بضع ثوان حتى ينتقل مستوى الصوت بأكمله إلى أسفل القسطرة. ثم قم بإزالة القسطرة وتخلص منها في مبيض بنسبة 10٪.

إذا كان الفأر لا يستنشق السائل ، فاراقب تنفسه بعناية واضبط موضع القسطرة. إذا توقف الفأر عن التنفس، فقم بإزالة القسطرة على الفور واسمح للفأر بالتنفس قبل إعادة إدخال القسطرة. بعد إزالة القسطرة ، استمر في إجراء العملية للحصول على خمسة فئران عالقة ، لا تزال مخدرة وجاهزة للتصوير.

للتعافي ، ضع الفأر على وسادة تسخين معتمدة من IACUC في قفص استرداد وراقبها حتى يتعافى تماما. بعد دقيقتين أو ثلاث دقائق من حقن الخلايا ، قم بحقن 100 ميكرولتر من اللوسيفيرين بشكل رجعي ، باستخدام إبرة الأنسولين. قم بتبديل العين المستخدمة للحقن في كل جلسة تصوير.

بعد الانتظار لمدة أقل دقيقتين ، ضع ما يصل إلى خمسة فئران في جهاز تصوير التلألؤ البيولوجي للحيوانات ، في وضع الاستلقاء القصي واحصل على صورة ظهرية باستخدام إعدادات اللمعان. تحت لوحة التحكم ، اضبط إعدادات الدقة والحساسية لقياس تلألؤ الخلايا. بالنسبة لمعظم التطبيقات، ابدأ بثلاث دقائق، واضبط التجميع على متوسط، واضبط f/stop على واحد، واضبط مجال الرؤية على d، واضبط ارتفاع الموضوع على 1.5.

إذا كان الحقن ناجحا ، يتم الكشف عن إشارة في منطقة الصدر العلوية في رئة واحدة أو كلتا الرئتين. إذا تم تجميع الخلايا عند مدخل القصبة الهوائية ، فإن الحقن لم ينجح. بعد التقاط الصورة الظهرية ، اقلب الفئران واحصل على صورة بطنية واضبط الإعداد حسب الحاجة.

بعد التصوير ، تابع رعاية ما بعد الجراحة كما هو موضح في بروتوكول النص. ثم كرر بروتوكول التصوير هذا بعد ثلاثة أيام من النقش وأسبوعيا بعد ذلك. لتحليل الصور ، استخدم برنامج تحليل التلألؤ البيولوجي.

أولا ، قم بتحميل جميع الصور المناسبة في السلسلة. هذا القسم مفصل في حزمة برامج واحدة. بعد ذلك ، لكل فأر ، في الصورة الأولى من السلسلة ، قم بإنشاء منطقة مربعة محل اهتمام وضعها فوق منطقة الصدر العلوية التي تغطي منطقة الرئة بأكملها.

بعد ذلك ، باستخدام النقر بزر الماوس الأيمن ، قم بالوصول إلى وظيفة نسخ جميع مناطق الاهتمام ، واستخدم هذه الأداة لتطبيق نفس مناطق الاهتمام على كل صورة في المجموعة. بعد ذلك ، داخل كل صورة ، قم بتعديل مواضع المربعات لتغطية الجزء العلوي من الصدر لكل ماوس. افعل ذلك لكل من المناظر البطنية والظهرية.

الآن ، في الزاوية اليسرى العليا من نافذة الصورة ، حدد وظيفة الفوتونات. ثم حدد خيار القياس. ثم يتم عرض البيانات من مناطق الاهتمام في جدول الإخراج كتدفق كلي.

قم بتحليل هذه البيانات حسب الحاجة. عندما تعرضت المناعة للخطر ، عولجت الفئران الرياضية بالبلومايسين. قبل نقش البلعة الخلوية ، لوحظ التليف العابر بحلول اليوم 14 في الفئران المعالجة بالبليومايسين ، ولكن ليس الفئران المعالجة بالمركبات.

بعد ذلك ، تم تسليم خلايا من خط خلايا سرطان الرئة البشرية ، H2030 ، عن طريق القصبة الهوائية إلى رئتي هذه الفئران. بعد 35 يوما ، كان لدى الفئران المعالجة بالبليومايسين عبء مرتفع من أورام الرئة. ومع ذلك ، في المعالجة بالمركبات ، لم يتم الكشف عن أورام.

تم تأكيد عبء ورم الرئة باستخدام الأنسجة. لم يكن لدى الرئتين المعالجة مسبقا بالمركبة أي دليل على وجود عقيدات الورم ، في حين أن الرئتين المعالجة مسبقا من البليومايسين تحتوي على عقيدات ورمية كبيرة. بعد زرع خط خلية نقيلي H2030 BrM 3 ، بمقدار 39 إلى 57 يوما ، كان التلألؤ البيولوجي شديدا جدا للتصوير ، لذلك تم تحليل ورم خبيث في الأعضاء البعيدة خارج الجسم الحي.

يمكن الكشف عن آفات صغيرة في أنسجة مختلفة ، مما يشير إلى أن هذه الطريقة واعدة ، لدراسة الأمراض المنتشرة تلقائيا. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في 10 دقائق لكل قفص من خمسة فئران بدون تصوير و 20 دقيقة لكل قفص عند تصوير الفئران أيضا. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التأكد من إدخال القسطرة بشكل صحيح ومراقبة تنفس.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الدراسات الدوائية أو الكيمياء الأمينية للأنسجة المحصودة من أجل الإجابة على أسئلة إضافية ، مثل كيفية استجابة الأورام المطعمة للأدوية أو توصيف التفاعلات اللحمية للورم الخاصة بالرئتين. بعد تطويرها ، يمكن تطبيق هذه التقنية على سلالات الفئران المختلفة ونماذج الأورام ، بما في ذلك الطعوم الغريبة المشتقة من المريض في بيئة ذات صلة من الناحية الفسيولوجية. لا تنس أن العمل مع البليومايسين يمكن أن يكون خطيرا للغاية ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل التلاعب في غطاء الخطر البيولوجي والتخلص السليم أثناء تنفيذ هذا الإجراء.