تقييم الحيوانات المنوية الأسماك باستخدام برامج وأجهزة التبريد

الهدف الرئيسي من هذا الإجراء هو تحليل جودة المنوية للأسماك بناء على حركة المنوية من أجل المساهمة في الإخصاب الاصطناعي الناجح. أنا الدكتور كارليس سولير ، أستاذ في جامعة فالنسيا ، والمدير العلمي ل PROiSER R + D. أنا كارينا كالديرا ، زمالة من Impress Project.

تم تطوير تقنية CASA منذ بضعة عقود لتحليل السائل المنوي لأنواع الثدييات باستخدام تحليل السائل المنوي بمساعدة الكمبيوتر. في حالة الأسماك ، من الضروري مراعاة شيئين. الأول ، هو حقيقة أن هذه الحيوانات عادة ما يتم تسميدها في درجات حرارة منخفضة ، حوالي أربع درجات ، ولهذا السبب ، لا يمكن تحليل السائل المنوي في درجة حرارة المنزل ، ولكن هناك حاجة لتطوير أدوات محددة لتبريد العينات.

المشكلة الأخرى ، هي أن الحركة تنخفض بسرعة كبيرة بعد التنشيط ، وهناك حاجة لتحليل هذه الحقيقة ، لتحديد ما هي اللحظة الجيدة لتحليل الجودة ، أو جودة السائل المنوي. لذلك ، سنعرض تحليل المنوية للأسماك ، وسيكون هذا البروتوكول تعديلا لبروتوكول الثدييات ، وسيتضمن تحليل الحركة باستخدام لذا ، فلنبدأ. يتم تخدير الأسماك لحقن الهرمونات ، ويتم جمع عينات المنوية بعد 24 ساعة.

يتم تنظيف المنطقة التناسلية لتجنب التلوث. يتم جمع المنوية عن طريق الضغط اللطيف. يتم الاحتفاظ بعينات المنوية عند أربع درجات ، حتى يتم إجراء تحليلات الحركة.

يتم تحضير المخفف والمنشط مسبقا. اضبط كتلة التبريد على أربع درجات للحفاظ على العينات عند درجة حرارة ثابتة. انتظر حتى يستقر.

خفف عينات المنوية باستخدام المخفف الخاص بكل نوع. بالنسبة لثعبان البحر الأوروبي ، يتم تخفيف المنوية في وسط P1 ، بنسبة 1:50. قم بإعداد 500 ميكرولتر من المنوية المخففة ، مع إضافة 450 ميكرولتر من P1 ، و 50 ميكرولترا من عينة المنوية الطازجة.

اخلط جيدا. خذ ربع من محلول المنشط ، وضعه في كتلة التبريد. اضبط مرحلة التبريد على أربع درجات.

انتظر حتى يستقر. حدد وحدة الحركة، وإذا لزم الأمر، استخدم اسما وكلمة مرور. اختر الخصائص.

انقر فوق الأنواع ، وحدد السمكة. حدد الإطارات في الثانية وعدد الصور التي ترغب في استخدامها. من الضروري استخدام التباين السلبي.

حدد غرفة العد والمقياس المقابلين. لكل نوع ، قم بتكييف منطقة الجسيمات والاتصال. بالنسبة لثعبان البحر الأوروبي ، يجب أن تكون مساحة الجسيمات الدنيا اثنتين ، والاتصال سبعة.

احفظ التكوين. افتح الالتقاط. خذ أربعة ميكرولترات من محلول المنشط ، وضعها في الغرفة.

المنوية المخففة جيدا. خذ 5 ميكرولتر من المنوية ، واخلطها مع المنشط. ضع الغطاء.

ركز العينة وابحث عن أفضل منطقة بصرية. حدد التقاط الفيديو للحصول على مسارات المنوية ، والتي يتم فصلها حسب السرعة. يمكن التقاط المزيد من الحقول.

حدد الالتقاط والمتابعة كما كان من قبل. انقر فوق الخروج للحصول على عرض عام لجميع الحقول. تم التقاط المنوية على فترات زمنية محددة بعد التنشيط.

ومع ذلك ، تم إجراء تحليل المنوية لكل تكرار فاصل زمني. يمكن الحصول على التقرير الجزئي لكل فاصل زمني عن طريق تحديد الحقول والنقر على جزئي. توفر ورقة Excel القيم المتوسطة للبيانات الجزئية والمخططات وصور مسارات المنوية.

كرر نفس الإجراء للحقول الأخرى. الخيار الآخر هو البيانات العامة. توفر هذه البيانات قيما حركية للحيوانات المنوية الفردية في جميع المجالات.

باستخدام التقرير الجزئي ، يمكن مقارنة النسبة المئوية للحركة والتصاعدية للأوقات المختلفة على الفور ، باستخدام المخططات الدائرية. تعطي البيانات العامة خيار الحصول على العديد من التحليلات الإحصائية باستخدام المعلمات الحركية. تعطي مسارات المنوية ثلاث معلمات.

VCL ، السرعة المنحنية ، VSL ، السرعة التدريجية ، و VAP ، سرعة المسار. VCL هي المعلمة الأكثر أهمية ، وتتغير مع عدد الإطارات في الثانية. من خلال زيادة عدد الإطارات ، تزداد VCL أيضا ، مما يسمح بتحليل مسار شبه مثالي.

يمكن أن يختلف أفضل معدل إطارات حسب الأنواع. الهدف هو العثور على أعلى قيمة ل VCL ، وبعد ذلك يمكن ملاحظة أي اختلافات محتملة مع الأدوات الأخرى ، مثل غرف العد. تعد المجموعات السكانية الفرعية حاليا تحليلا إحصائيا مهما يعطي مزيدا من المعلومات المتعلقة بعينة المنوية.

هذا مثال على عينات المنوية من سمك السلمون الأطلسي. يمكن ملاحظة مجموعات سكانية فرعية مختلفة للحيوانات المنوية في أجيال مختلفة يتم إنتاجها في الأسر. لقد أوضحنا كيفية استخدام نظام الكمبيوتر لتحليل المنوية للأسماك ، وكذلك كيفية تحسين الجوانب الفنية والمنهجية مثل غرفة العد ودرجة الحرارة ومعدلات الإطارات.

لذلك ، باستخدام هذه البيانات ، يمكننا إجراء الكثير من التحليل في مجالات مختلفة ، مثل تربية الأسماك ، ليس فقط لتربية الأحياء المائية ، ولكن أيضا لبرامج الحفظ ، أو دراسات النشوء والتطور ، أو لزيادة المعرفة حول مجموعة المنوية. لذا ، آمل أن يساعدك هذا البروتوكول في دراستك.