روتين فحص الطريقة المجهرية الدقيقة في عمليات نقل الدم الصفيحات

الهدف العام من هذه الطريقة هو توصيف عمليات نقل الصفائح الدموية من خلال الاختبارات الروتينية التي يمكن إجراؤها في مراكز المانحين أو بنوك الدم في المستشفيات لتحسين استخدام منتجات الدم هذه لمرضى النزيف أو سرطان الدم. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في طب نقل الدم، مثل ما إذا كان نقل الصفائح الدموية يحتوي على صفائح دموية منشطة أو غير منشطة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر شاشة سريعة ودقيقة لمحتوى الجسيمات الدقيقة كمؤشر مثبت لتنشيط الصفائح الدموية.

الأفراد الجدد على هذه الطريقة ، سيحتاجون إلى تعلم كيفية أخذ عينات من أجزاء أنابيب الأكياس ، لأن هذا لا يتم بشكل روتيني في الوقت الحالي. خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما رأينا أن الصفائح الدموية من متبرعين مختلفين لها تباين كبير في حالة التنشيط ويبدو أن هذا له تأثير على المريض. هناك ثلاث طرق للحصول على عينة من مركز الصفائح الدموية.

لأخذ عينات من الكيس ، امزج محتوى كيس الصفائح الدموية جيدا بحركة أفقية لطيفة لمدة خمس ثوان ، مع الانقلاب من طرف إلى آخر ، خمس مرات. افتح المشبك على الحقيبة ، ويتم إخلاء الحقيبة وستملأ من تلقاء نفسها. ليس من الضروري ملء الحقيبة بالكامل ، حيث ستكون هناك حاجة إلى عينة 100 ميكرولتر فقط لاختبار تشتت الضوء الديناميكي أو DLS.

افصل الحقيبة عن الكيس عن طريق الإغلاق الحراري لأنبوب التوصيل باستخدام مادة مانعة للتسرب أنبوبية. عند أخذ العينات من الأنابيب الفارغة ، تحقق من تخزين أنبوب كيس الصفائح الدموية فارغا وأن كتلة الأنبوب لا تزال في مكانها. افحص الأنبوب بصريا للتحقق من عدم وجود تركيز الصفائح الدموية في الأنبوب.

أغلق أداة تجرد الأنبوب على الأنبوب ، بالقرب من كتلة الأنبوب قدر الإمكان ، عن طريق ضغط المقابض للضغط على الأنبوب بين البكرات مع إبقاء المتجرد مغلقا ، وحرر كتلة الأنبوب. اسحب المتجرد ببطء لأسفل الأنبوب الفارغ ، مما يسمح للأنبوب بالملء ببطء خلف المتجرد. استمر حتى ينتفخ القسم الموجود أسفل المتجرد بالكامل أو حتى يصبح المتجرد في غضون بوصة واحدة من نهاية الأنبوب.

من الأهمية بمكان ضغط مقابض متجرد الأنبوب بقوة وببطء سحب المتجرد لأسفل الأنبوب. بمجرد الوصول إلى نقطة التوقف مع المتجرد ، استخدم مانع التسرب الأنبوبي لإغلاق الأنبوب بحرارة بوصة واحدة فوق المتجرد. الآن ، حرر مقابض متجرد الأنبوب اليدوي.

ختم الحرارة مرة أخرى ، بوصتين إلى بوصتين فوق الختم السابق لإنشاء جزء الاختبار. ثم قم بقطع جزء الاختبار عن وحدة الصفائح الدموية. سيتم استخدام هذا الجزء لاختبار DLS.

عند أخذ العينات من الأنابيب غير الفارغة ، قم بتعليق الكيس عموديا وحرر كتلة الأنبوب ، إذا كانت في مكانها. افحص الأنبوب بصريا لتحديد ما إذا كان هناك أي كتل صلبة كبيرة. في حالة وجود كتل صلبة ، أغلقها فوقها ، بحيث لا يمكن تجريدها من الكيس.

بعد ذلك ، أغلق أداة تجرد الأنبوب على الأنبوب ، بالقرب من الطرف المغلق للأنبوب قدر الإمكان. قم بتجريد محتويات الأنبوب في الكيس عن طريق ضغط المقابض للضغط على الأنبوب بين البكرات. مع الحفاظ على قوة التثبيت ، حرك أداة تجرد الأنبوب على طول الأنبوب باتجاه الكيس.

قم بإزالة كيس الصفائح الدموية من الخطاف المعلق واخلط الكيس برفق لمدة خمس ثوان ، عن طريق قلبه من طرف إلى آخر خمس مرات ، مع إبقاء المتجرد مغلقا. الكيس عموديا مع إبقاء المتجرد مغلقا. اسحب المتجرد ببطء لأسفل الأنبوب الفارغ ، مما يسمح للأنبوب بالملء ببطء خلف المتجرد.

استمر حتى يتم تضخيم القسم الموجود أسفل المتجرد بالكامل ، أو حتى يصبح المتجرد في غضون بوصة واحدة من نهاية الأنبوب. بمجرد الوصول إلى نقطة التوقف مع المتجرد ، استخدم مانع التسرب الأنبوبي لإغلاق الأنبوب بالحرارة ، بوصة واحدة فوق المتجرد. بعد تحرير المتجرد ، قم بإغلاق الحرارة مرة أخرى بمقدار بوصة إلى بوصتين فوق الختم السابق لإنشاء جزء الاختبار.

اقطع وتخلص من الجزء الأخير من الأنبوب. ثم قم بقطع جزء الاختبار عن وحدة الصفائح الدموية. سيتم استخدام هذا الجزء لاختبار DLS.

باستخدام درع رذاذ ومقص نظيف وجاف ، قم بقص أحد طرفي أنبوب الحقيبة أو جزء الاختبار. املأ الشعيرات الدموية على الفور باستخدام أداة أخذ العينات لسحب العينة مباشرة من الحقيبة المفتوحة ، أو جزء الأنبوب إلى الشعيرات الدموية. أغلق الجزء السفلي من الشعيرات الدموية المملوءة بدفعها برفق إلى مانع التسرب الأنبوبي الشعري ، مع تطبيق لف لطيف وبعض الضغط على الدرج.

بعد ذلك، افصل الماصة ذات الحجم الثابت سعة 100 ميكرولتر وطرفها عن الشعيرات الدموية، مع ضمان بقاء الشعيرات الدموية مدمجة بإحكام في مانع تسرب الأنبوب الشعري. قم بإزالة الشعيرات الدموية من صينية مانع التسرب الأنبوبي الشعري وامسحه بقطعة كحول الأيزوبروبيل. تأكد من عدم احتجاز فقاعات الهواء عن طريق النقر برفق على الجزء السفلي من الشعيرات الدموية.

أخيرا ، ضع الشعيرات الدموية في نظام DLS. للبدء ، قم ببدء تشغيل وحدة التحكم ، واتبع التعليمات التي تظهر على شاشة اللمس لتسجيل الدخول وحدد خيار اختبار الجسيمات الدقيقة أو MP لبدء اختبار DLS جديد لقياس محتوى الجسيمات الدقيقة لعينة الصفائح الدموية. أدخل معلومات العينة باستخدام ماسح ضوئي للرمز الشريطي، أو أدخلها يدويا.

ضع الشعيرات الدموية في نظام DLS عند التعليمات وابدأ الاختبار. عند اكتمال الاختبار ، قم بإزالة العينة من حامل الشعيرات الدموية وتخلص من المواد الاستهلاكية بشكل مناسب وفقا لإرشادات المنشأة. ضع علامة على كيس الصفائح الدموية باللون المقابل للنتيجة.

على سبيل المثال ، البرتقالي لغير المنشط والوردي للمنشط. يقيس تشتت الضوء الديناميكي سرعة الجسيمات التي تتحرك في التعليق بالحركة البراونية. بناء على السرعات المختلفة ، تتحرك الجسيمات الصغيرة بسرعة وتتحرك الجسيمات الكبيرة ببطء.

تحدد هذه التقنية توزيع حجم العينة. يحدد DLS أن نقل الدم هذا يحتوي على صفائح ضفائحية غير نشطة بناء على محتوى أقل من 15٪ من الجسيمات الدقيقة. في الحقيقة. كانت الصفائح الدموية القرصية في الغالب مع عدد قليل جدا من الجسيمات الدقيقة مرئية عن طريق الفحص المجهري.

ومع ذلك ، فإن نقل الصفائح الدموية المختلف ، والذي يبدو بالعين المجردة ، تماما مثل الكيس الأول ، يحتوي على صفائح دموية منشطة ، بناء على أكثر من 15٪ من محتوى الجسيمات الدقيقة. في هذه العينة ، كانت أشكال الصفائح الدموية المختلفة والركام الصغير والعديد من الجسيمات الدقيقة مرئية عن طريق الفحص المجهري. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية أخذ عينة من كيس الصفائح الدموية بشكل غير جراحي ، وملء الشعيرات الدموية ، واختبار العينة لمحتوى الجسيمات الدقيقة ، للسماح بالاستخدام الأمثل لمخزون الصفائح الدموية.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم خلط الكيس جيدا للحصول على عينة تمثيلية جيدة. وباتباع هذا الإجراء ، يمكنك القيام بطرق أخرى ، مثل قياس التدفق الخلوي ، للإجابة على أسئلة حول الأصل الخلوي للجسيمات الدقيقة. بمجرد إتقانها ، يمكن تنفيذ هذه التقنية في حوالي دقيقتين ونصف.

جنبا إلى جنب مع اختبار الخمس دقائق ، يمكن تمييز عمليات نقل الصفائح الدموية في أقل من ثماني دقائق. بعد تطويرها ، سمحت هذه التقنية لبنوك الدم في المستشفيات بفحص مخزون الصفائح الدموية الخاصة بهم ، وعلاج مرضى أمراض الدم / الأورام فقط بالصفائح الدموية غير المنشطة وملاحظة انخفاض في عمليات نقل الصفائح الدموية المستخدمة. كما نقول ، فإن نقل الدم الأكثر أمانا هو الذي لم يتم تقديمه.

على الرغم من أن هذه الطريقة توفر نظرة ثاقبة لتوصيف الصفائح الدموية قبل نقل الدم ، إلا أنه يمكن استخدامها أيضا لاختبار البلازما الغنية بالصفائح الدموية مباشرة من المتبرعين. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج مرضى سرطان الدم لأنهم يستفيدون من عمليات نقل الصفائح الدموية غير المنشطة ، مما يقلل من خطر أن تصبح مقاومة للحرارة.