أساليب لفترات الخوادر التدريج والقياس للجناح تصبغ المورفولوجية جوتيفيرا

الهدف العام من هذه التجربة هو تنظيم فترات العذراء وقياس تصبغ الجناح ذبابة الفاكهة guttifera. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأحياء التنموي التطوري ، مثل كيفية تطوير أنماط التصبغ في ذبابة الفاكهة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكننا الحصول على معلومات مفصلة حول التطور المورفولوجي وعملية التصبغ.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة للتطور المورفولوجي وعملية التصبغ ذبابة الفاكهة guttifera ، إلا أنه يمكن تطبيقها على أنواع ذبابة الفاكهة الأخرى. لبدء إزالة الشرانق ، قم بلصق قطعة من الشريط على الوجهين على قطعة من المناديل الورقية. ضع خادرة على الشريط على الوجهين ، بحيث يكون الجانب البطني لأعلى.

حدد المسافة بين الجانب الأمامي من الشرانق والخادرة الداخلية. أمسك وقم بإزالة المعدرة حول هذه الفجوة باستخدام الملقط. وفضح الجانب الأمامي من رأس الخادرة.

أدخل طرف الملقط عن طريق تحريكه بالتوازي مع المحور الأمامي الخلفي. ارفع طرف الملقط لكسر الشرانق محليا. كرر هذا الإجراء حتى يصل الكسر إلى الجزء الخلفي من الشرانق.

تأكد من تكوين فجوة بين الساقرة وأرجل العذراء. وكسر الجانب البطني من الشرانق مع تقليل الضرر الذي يلحق بالخادرة الداخلية. بعد كسر المعدرة قدر الإمكان ، أخرج الخادرة باستخدام فرشاة طلاء دقيقة.

ضع الخادرة على قطعة من المناديل الورقية المبللة ب ddH2O وتوضع في طبق بتري بلاستيكي. التقط صورا على الفور ، لأن الخادرة المكشوفة ضعيفة وتجف بسهولة. استمر في إعداد الصورة وقم بإزالة الجزء الأمامي من الشرانق بالملقط.

أخرجي الخادرة وضعيها في محلول ملحي مخزن بالفوسفات ، أو PBS ، في طبق بتري بلاستيكي. بعد ذلك ، قطع المفصل القاعدي للجناح. عندما يتم طي الجناح ، ضعه في طبق بتري بلاستيكي مملوء ب ddH2O لتمديده بالضغط الاسموزي.

اجمع البالغين المغلقين حديثا مرة كل 10 دقائق من ملف المخزون. تخدير ذبابة باستخدام وسادة تخدير CO2. تأكد من التخدير عن طريق الجمود وقطع المفصل القاعدي للجناح.

قم بإسقاط 10 ميكرولترات من PBS على شريحة زجاجية. ضع الجناح في القطرة. وقم بتغطية القطرة مع زلة غطاء.

بعد ذلك ، قم بتشغيل ضوء المجهر الاستريو واضبطه على الحد الأقصى. اضبط العدسة الموضوعية على 11.5x واضبط الحجاب الحاجز على الحالة الأكثر انفتاحا. ثم قم بتشغيل الكاميرا واضبط الكاميرا.

ركز على العينة عن طريق تحريك مقبض التركيز البؤري في المجهر. اضغط على زر الغالق الخاص بوحدة التحكم عن بعد لالتقاط صورة. التقط صورة للجناح ، في توسيطه على شكل حرس ، مع وضع الجزء البعيد من الجناح على الجانب الأيسر والجزء الداخلي من الجناح على الجانب العلوي.

افتح صورة مع بقعة حسية كامبانيفورم في المنتصف. انقر فوق صورة، اكتب 1، 8 بت، لتحويل الصورة إلى صورة 8 بت. انقر فوق المستطيل في أدوات تحديد المنطقة وارسم مستطيلا.

اضبط الجانب الأيمن من المستطيل بحيث يكون على يمين بقعة الجريس. انقر على تحرير، تحديد، إضافة إلى المدير، ثم حدد عمود إظهار الكل. بعد ذلك ، انقر فوق أداة الزاوية في أدوات تحديد الخط.

ارسم الخط الأول على الخط الخلفي للوريد الطولي الثالث. قم بتعيين نقاط النهاية اليسرى للخط على رأس المستطيل المرسوم مسبقا. ارسم الخط الثاني على الجانب العلوي من المستطيل.

اضغط على المفتاح M لقياس الزاوية بين الخطين المرسومين في هذه الخطوة. انقر فوق نافذة الصورة على شاشة الكمبيوتر. انقر فوق تحرير، تحديد، إضافة إلى المدير.

انقر فوق المستطيل في أدوات تحديد المنطقة وارسم مستطيلا بحجم 1/9 من حجم نافذة الصورة. انقر فوق تحرير، تحديد، تدوير. اكتب درجات الطرح للزاوية المقاسة مسبقا في عمود الزاوية وانقر فوق موافق لتدوير المستطيل المرسوم في هذه الخطوة.

حرك المستطيل المرسوم باستخدام مفاتيح الأسهم وقم بتعيين نقطة نهاية الخط الخلفي للوريد الطولي الثاني على الجانب الأيسر من المستطيل. والجانب السفلي من المستطيل ، يعلق على الخط الخلفي للوريد الطولي الثالث. تأكد من رسم خط عمودي من نقطة نهاية الوريد الطولي الثاني إلى الخط الخلفي للوريد الطولي الثالث.

حدد سفح الخط العمودي كنقطة A.سجل إحداثيات X وإحداثيات Y للنقطة A ، المشار إليها أدناه أدوات تحديد المنطقة عند وضع المؤشر على النقطة A.افتح الصورة مع النقطة A في المنتصف. انقر فوق صورة، نوع، 8 بت، لتحويل الصورة إلى صورة 8 بت. انقر فوق المستطيل في أدوات تحديد المنطقة وارسم مستطيلا بحجم 1/9 من حجم نافذة الصورة تقريبا.

انقر فوق تحرير، تحديد، تحديد. تحقق من العمود البيضاوي والمركزي. اكتب 100 بكسل في عمودي العرض والارتفاع.

اكتب إحداثيات X للنقطة A في عمود الإحداثيات X ، واكتب إحداثيات Y للنقطة A في عمود الإحداثيات Y ، ثم انقر فوق موافق. بعد ذلك ، انقر فوق تحليل وقياس. إذا كانت المعايرة قد انتهت بالفعل ، يشار إلى النماذج التشغيلية في العمود المتوسط. كشفت مقارنة بيانات المراحل المتعددة أن المرحلة P12 هي توقيت ظهور التصبغ وأن التصبغ يكتمل بعد 12 ساعة من الإغلاق.

بعد تطويرها ، تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال البيولوجيا التنموية التطورية لاستكشاف الاختلافات في تطور العذراء وعملية التصبغ بين أنواع ذبابة الفاكهة.