الفحص المجهري للتماسك البصري كامل المجال للتحليل الشبيه بالأنسجة لخصائص اللحمة في ترقيع القرنية

هذه الطريقة يمكن أن تحسن فحص واختيار أنسجة المتبرعين بالقرنية في بنوك العيون ، وتعزيز نتائج زراعة القرنية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي قدرتها على التقييم عالي الدقة وأن القرنية تظل مغمورة في غرفة مغلقة مليئة بوسط تخزين طوال فترة الحصول على الصور ، مما يقلل من أي خطر محتمل للتلوث. سيوضح الإجراء مايل فيلبرت ، خريج الدكتوراه من مختبرنا.

للبدء ، ضع القرنية مغمورة في وسط التخزين في حامل العينة مع توجيه الظهارة لأعلى. ضع قسيمة غطاء السيليكا النظيفة المرفقة مع حامل العينة أعلى القرنية. بعد ذلك ، أغلق الحامل عن طريق تدوير قاعدته برفق حتى يتم تسطيح العينة قليلا وتثبيتها أسفل انزلاق الغطاء ، مما يوفر سطح تصوير متساويا نسبيا.

اتخذ الاحتياطات اللازمة لتجنب أي فقاعات هواء. ضع طبقة سميكة من الجل العيني أو البصري على انزلاق الغطاء كوسيط غمر. قم بتهيئة الجهاز عن طريق تشغيل مفتاح الطاقة في الجزء الخلفي من الجهاز.

تشير إضاءة مؤشر LED الأخضر في مقدمة الجهاز إلى أن الطاقة قيد التشغيل. تأكد من أن مرحلة التصوير واضحة ، باستثناء الدرج المتحرك. ثم انقر فوق "موافق" في برنامج الاستحواذ لتهيئة المحركات عند المطالبة.

لإعداد الجهاز، أدخل نموذج معرف في الحقل المعين والإلزامي. واختياريا أدخل وصف عينة ووصف الدراسة. بعد ذلك، انقر فوق الحصول على صورة ماكرو لإنشاء لقطة من العينة التي يمكن استخدامها لاحقا لأغراض تحديد الموضع الجانبي والتنقل.

بمجرد الرضا ، تحقق من صحة الصورة عند المطالبة بالنقر فوق نعم. بعد ذلك سيقوم الجهاز بتحريك درج العينة أسفل الهدف وإجراء ضبط تلقائي. تأكد من أن هدف المجهر مغمور جيدا في الجل البصري قبل المضي قدما.

قم بإعداد عملية الاستحواذ بالانتقال إلى علامة التبويب استكشاف. قبل الحصول على كومة من الصور ، انتقل إلى مركز القرنية عبر عصا التحكم أو التحديد اليدوي على الشاشة. قم بتغيير عمق التصوير عن طريق تدوير عصا التحكم أو ضبط شريط التمرير أو إدخال لوحة المفاتيح اليدوي في واجهة المستخدم الرسومية.

ثم اضبط متوسط القيمة إلى 40 للحصول على تصوير مثالي للقرنية. أدخل قيمة سطح القرنية أو موقع الصورة الأولى في حقل العمق. ثم حدد علامة التبويب اكتساب للحصول على الصور.

حدد واضبط تباعد الشرائح المطابق للدقة المحورية للجهاز. أدخل قيمة سمك القرنية ضمن عدد الشرائح. مراجعة المعلمات ووقت الاستحواذ.

وعندما تشعر بالرضا ، اضغط على موافق لبدء عملية الاستحواذ. أثناء الاستحواذ ، تجنب ملامسة الجدول الذي يتم وضع المجهر عليه. لتقييم سمك طبقة اللحمة وبومان ، قم بقياس مسافات المقاطع العرضية للقرنية.

على سبيل المثال ، أضف خمس نقاط متباعدة بشكل متساو عبر المقطع العرضي كما هو موضح في مخطوطة النص. ارسم خطا بين نقطتين من المسافة المعروفة وفقا لحقل الرؤية الافتراضي. ثم انتقل إلى علامة التبويب تحليل وحدد تعيين المقياس.

أدخل المسافة المعروفة ووحدة الطول في الحقول المناسبة. اضبط على 1024 بكسل أو 780 ميكرومتر وانقر فوق موافق. ارسم خطا بين نقطتين مجهولتي المسافة واقرأ الطول أو المسافة المقاسة مباشرة من شريط الحالة. سجل متوسط ومعامل التباين.

انقر فوق علامة التبويب صورة وحدد Reslice Z ضمن Stacks لتحديد كثافة الخلايا الكيراتينية. سيؤدي ذلك إلى جمع صور اللحمية في مجموعات من سبعة لإنتاج شرائح ذات سمك مماثل. لمزيد من التحليل ، قم بتضمين جميع شرائح الوجه المتاحة للسدى الأمامي ، و 15 صورة للسدى الأمامي ، وخمس صور للسدى الأوسط ، وخمس صور للسدى الخلفي.

في كل صورة ذات وجه ، حدد منطقة اهتمام 300 × 300 ميكرومتر. لتحسين مرئيات النواة، قم بعكس الصورة باستخدام عكس تحت علامة التبويب تحرير. اضبط التباين والسطوع بالنقر فوق علامة التبويب صورة والانتقال إلى تباين السطوع.

لحساب عدد نوى الخلايا يدويا ، انتقل إلى المكونات الإضافية وانتقل إلى عداد الخلية ضمن علامة التبويب تحليل. اضغط على تهيئة ثم حدد نوع عداد. ثم عد نوى الخلية من خلال النقر على الميزات البيضاوية الداكنة في الصورة المقلوبة ، مع الأخذ في الاعتبار تلك التي تهبط على حدود الصورة فقط لاثنين من الجوانب الأربعة للصورة.

تم تورم القرنية البشرية المختارة بعد تخزينها في وسط زراعة الأعضاء ، مما أعطى نموذجا فسيولوجيا مرضيا للقرنية الوذمية ومنع الحصول على الصورة من خلال سمك القرنية بالكامل بسبب عمق الاختراق المحدود. نقل إلى الدكسترين تكملة وسط زراعة الأعضاء ، والحد من التورم وأدى إلى قرنية المانحة من سمك طبيعي. تم التعرف على القرنيات المريضة من خلال التغيرات المورفولوجية والسمات اللحمية النموذجية ، بما في ذلك انخفاض سمك اللحمية المتغير أو طبقة بومان.

ساعد تقييم كثافة الخلايا الكيراتينية والانعكاسية اللحمية بشكل أكبر في التحليل الشبيه بالأنسجة والتمييز بين أنسجة القرنية الطبيعية والمرضية باستخدام الفحص المجهري للتماسك البصري كامل المجال ، وهو ما يتجاوز قدرات أنظمة التصوير المقطعي للتماسك البصري السريري. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء تحليل نوعي وكمي يشبه الأنسجة لسدى القرنية مما يسمح بتمييز المرض عن أنسجة القرنية البشرية الطبيعية.