تشريح الهيمي الجانبي الحبل الشوكي والتقييمات السلوكية غير المتماثلة في الفئران البالغة

يوفر هذا البروتوكول نموذجًا حيوانيًا موثوقًا به لحبب العمود الفقري الجانبي الذي يحاكي متلازمة براون-سياركارد في البشر، ونطاق سلوكي مشترك جديد لتقييم العجز السلوكي غير المتماثل. يمكن لهذا النموذج الماوس hemisection زيادة فهمنا للإعاقات العصبية التي تحدث في متلازمة براون Sequard في البشر. على عكس تقييماتك المذكورة، يمكن تطبيق مقياس السلوك الجديد المشترك على أي قالب يتطلب تقييمًا غير متماثل وعجز قاطرات وفي المختبر.

باستخدام هذا، يمكن أن يسهل نموذج القسم الهيمي الطبيعي المتسق مقارنة النتيجة التجريبية بين البحوث الأساسية والبحث في الترجمة. يمكن أن يكون استخدام نتيجة متسقة مع هذا النموذج من الصعب للمبتدئين. الخطوة الحاسمة هي وضع الإبرة عموديا في خط الوسط، وذلك لتوجيهات لحفز الإصابة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء كل من العمليات الجراحية والسلوكية. في يوم الإجراء، تنظيف الجدول الجراحي مع 70٪ الإيثانول، ووضع وسادة التدفئة قبل تدفئة على الطاولة. بعد تغطية المنطقة الجراحية مع ستائر الجراحية العقيمة، تأكيد عدم وجود استجابة ل toe-pinch في الفئران المُخَذَّن.

ضع مرهم على عيون الحيوان لمنع تجفيف القرنية، وحلق الشعر فوق الفقرات الصدرية. ثم، تنظيف الجلد المكشوف مع ثلاثة بالتناوب على أساس اليود والأيثانول الدعك. عندما يكون الحيوان جاهزاً، حدد موقع الضلع الثالث عشر واتبع الضلع dorsally لتحديد صلته مع فقرة T-13.

عد لتحديد الفقرات T-9، واستخدام شفرة مشرط رقم خمسة عشر لجعل شق الجلد في منتصف الخط من ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات على العمليات الثمانية الدوارة الثامنة إلى الحادية عشرة. تحريك الفئران تحت مجهر جراحي، وتشريح بصراحة وفصل العضلات الطفيلية جانبية من العمليات العرضية نحو جوانب T-9 و T-10 فقرات على كلا الجانبين. تعطيل العمود الفقري مع حامل استقرار معدلة، وجعل شق على جانبي عظم العمود الفقري الجانبي، والانزلاق الأسلحة الفولاذ المقاوم للصدأ من حامل تحت جوانب عملية عرضية المكشوفة.

شد البراغي لتأمين حامل، واستخدام المنقلة لفضح T-8 إلى 11 الصفيحة الفقرية والعمليات العرضية. باستخدام rongeur، قص بعيدا عملية T-9 ثاتوري، وإزالة جزء صغير من الصفيحة، اليسار إلى خط الوسط والجزء الأيمن بأكمله من الصفيحة، كما في الجانب الجانبي ممكن. ثم أدخل رونغير بلطف تحت lamina ، وقص قطعة صغيرة واحدة من العظام في وقت واحد ، حتى يتم الانتهاء من المنطقة المطلوبة من استئصال لامينك.

بعد ذلك، تحديد خط الوسط الظهري من وتر العمود الفقري، وإدراج إبرة 30 قياس عموديا من خلال خط الوسط، في وتر العمود الفقري، على طول الطريق إلى الجدار البطني للقناة الفقرية، مع شطبة تواجه إلى اليمين. وقف أي نزيف مع قطعة صغيرة من رغوة هلام العقيمة، وإدراج طرف واحد من زوج من مقص الجراحة الدقيقة استئصال iriddecty من خلال خط الوسط من المسار إبرة، والتلميح الآخر على طول السطح الجانبي للhemichord اليمنى، لجعل قطع كاملة على hemichord الحق. استخدام الحافة الجانبيّة من ال نفسه إبرة كسكين, أن يقطع من خلال الآفة فجوة أن يؤكّد كاملة يصحّ قذف.

وتصور الجزء السفلي من القناة الفقري، للتحقق من اكتمال ال hemisection الحق. استخدم خليط الأسمنت لبناء الجسر الضيق فوق الإسفنج، وعمليات T-8 و T-10 العرضية. ثم، خياطة العضلات والجلد طبقات منفصلة مع 4/0 خيط الحرير، وحقن 0.9٪ العقيمة تحت الجلد المالحة للحفاظ على الترطيب.

الضغط على المثانة البولية مرتين إلى ثلاث مرات يوميا للأسبوع الأول، ومرات واحدة إلى مرتين في الأسابيع التالية، حتى عودة تبطل المثانة العفوية. عند نقطة الوقت التجريبية المناسبة بعد الإجراء ، ضع الجرذ البالغ في تجربة حقل مفتوح ، وتفحص الحركة الحيوانية لمدة أربع دقائق. باستخدام الجدول، قم بتعيين قيمة 1 لـ yes'و0 لـ no'لكل فئة سلوك، و جمع القيمة الإجمالية لإعطاء درجة انطلاق هتكيونية أحادية الجانب نهائية من 0-8.

لتحليل اقتران البوابة، تسجيل المشي الحيوان التجريبي على جهاز مدرج ضيق، وتعيين درجة 0 لـ no'1 لـ regular'و/أو clumsy'و2 لـ normal'for كل فئة اقتران. للحصول على تقييم وضع الاتصال، عقد الحيوان في وضع عمودي، بحيث كلا من الأطراف الخلفية المتاحة للاستجابة وضع، وفرشاة السطح الظهري من طرف واحد خلفي إلى الأمام طفيفة نحو حافة سطح. مراقبة موضع القدم على السطح، وتعيين اتصال طرف خلفي وضع درجة 0 لعدم وضع'و 1 لتقييم التنسيب'للشبكة المشي، وضع الفئران على ارتفاع ستة وثلاثين في ثمانية وثلاثين شبكة الأسلاك المغلفة بالبلاستيك مع فتحات مربعة 3 سم، وتسجيل الفيديو الفئران المشي بحرية عبر المنصة لمدة 30 خطوة للسماح quantification من عدد الأخطاء القدم لكل طرف لتحديد شدة محرك العجز.

يظهر تلطيخ الفلورسنت الأمينية من المقطع العرضي في مركز الزلزال إصابة خسارة كاملة من hemichord الحق. والحفاظ على اليسار hemichord contralateral إلى الإصابة. يمكن تحليل عشرات من تدابير تقييم البوابة الفردية بشكل منفصل ، أو يمكن دمجها في سلوك مركب مركب بعد درجة hemisection.

في الأيام الثلاثة الأولى بعد الإصابة، تفقد الفئران القدرة على الخطوة، مع حركات تشبه خطوة بداية للظهور مرة أخرى على الجانب ipsilesional في 7 10 أيام بعد الإصابة. ومع معظم الخطوات يجري الخطوات الظهرية. بعد 28 يوما من التهوي T-9، يمكن للفئران اتخاذ خطوات ألواحية مع التنسيق الطبيعي تقريبا.

وعلى سبيل المقارنة، فإن الطرف الخلفي contralesional أقل توقف مع درجة ال hemisection من جانب واحد إسقاط خلال الأيام الخمسة الأولى بعد الإصابة، والعودة إلى خط الأساس بحلول اليوم 10، بعد الإصابة. بالنسبة لاختبار اقتران البوابة الكلي ، يتم تقليل استقرار التنسيق وقدرته على التكيف بعد hemisection بشكل ملحوظ خلال الأيام الخمسة الأولى بعد الإصابة. كما يتأثر وضع الاتصال والمشي الشبكي للأطراف الخلفية إيبسجيرال، وعادة ما يتعافى عندما يبدأ الحيوان في اتخاذ خطوات ألواحية.

قد يكون من الصعب إنتاج إصابة نظيفة. وضع إبرة في الوسط يمكن أن يكون المبدأ التوجيهي مفيدة لضمان الفصل الكامل للأنسجة.