تقييم في فيفو لتعطيل حاجز الدم في الدماغ في نموذج الفئران من السكتة الدماغية

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقديم طريقة قابلة للتكرار بدرجة كبيرة لتقييم في الجسم الحي لاضطراب الحاجز الدموي الدماغي في نموذج تفاعلي للسكتة الدماغية الإقفارية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحريض السكتة الدماغية الإقفارية باستخدام خيوط داخل اللمعة لانسداد الشريان الدماغي الأوسط في الجانب الأيسر من الدماغ. الخطوة التالية من الإجراء هي قنية الوريد الوداجي الفرع الخارجي وحقن صبغة إيفانز الزرقاء في نهاية انسداد الشريان الدماغي الأوسط وبداية فترة إعادة التروية.

بعد أربع وعشرين ساعة تحت التخدير العميق ، يتم غسل نظام الدورة الدموية للحيوان من إيفانز بلو وإزالة الدماغ. ثم يتم فصل نصفي الكرة الدماغية وتجانسهما وطردهما بالطرد المركزي ، وفي النهاية يتم استخدام المواد الطافية للأنسجة لقياس تركيز إيفانز بلو باستخدام مقياس الطيف الضوئي. التخدير وقياس التدفق.

تحفيز التخدير باستخدام 4٪ إيزوفلوران والحفاظ عليه مع الأيزوفلوران 1-1.5٪ في خليط من 70٪ أكسيد النيتروز و 13٪ أكسجين طوال مدة الجراحة. ضع مخدرا في وضعية الانبطاح على بطانية التدفئة للتحكم في التغذية الراجعة وحافظ على درجة حرارة الجسم في النطاق الفسيولوجي الطبيعي عن طريق مسبار مستقيمي متصل بوحدة التسخين هذه. منطقة جراحة الحلاقة في الجانب الأيسر من الجمجمة وتطبيق محلول البيتادين باستخدام وسادة شاش لتطهير الجلد.

استبدلها بوسادة معقمة تحتوي على 70٪ من الإيثانول وكرر الخطوتين بثلاث دورات. قم بعمل شق جلدي بطول سنتيمتر واحد على الجمجمة يمتد من القناة الجانبية للعين اليسرى إلى قاعدة الأذن اليسرى وقم بتشريح العضلة الصدغية اليسرى لكشف الجمجمة. ثم قم بقطع ثقب صغير عند خمسة ملليمترات جانبية ومليمتر واحد خلف بريجما لتسهيل وضع طرف مسبار قلم رصاص مقياس الجريان دوبلر.

اقلب الجرذ من وضع الانبطاح إلى وضع الاستلقاء ثم ضع مسبار قلم رصاص الليزر في ثقب الجمجمة المحفور مسبقا لمراقبة تدفق الدم الدماغي الإقليمي. سجل تدفق الدم الدماغي الإقليمي الأساسي لكل واعتبره 100٪ تحريض لنقص التروية الدماغية البؤرية. حلق منطقة الرقبة وتطهير البشرة بمحلول البيتادين و 70٪ الإيثانول.

حقن 0.2 ملليلتر من 0.5٪ بوبيفاكائين تحت الجلد في موقع الجراحة للتسكين الألم. قم بعمل شق جراحي بطول سنتيمترين في السطح البطني للرقبة للوصول إلى الشريان السباتي المشترك الأيسر. عزل الشريان السباتي المشترك عن اللفافة المجاورة والعصب المبهم للوصول إلى تشعب الشريان السباتي الخارجي والشريان السباتي الداخلي.

اربط بشكل دائم إما الشريان السباتي المشترك الأيسر أو الشريان السباتي الخارجي باستخدام خياطة 5-0 كيس وتشريح الشريان السباتي الداخلي إلى مستوى الشريان الجفري الحائقي. ضع خياطة 5-0 كيسا حول الشريان السباتي المشترك ثم قم بتثبيت الشريان السباتي الداخلي مؤقتا بمشبك صغير للأوعائ. قم بعمل شق صغير على الشريان السباتي المشترك قبل ربطة عنق فضفاضة مسبقا ثم أدخل خياطة نايلون مطلية بالسيليكون 4-0 في المساحة اللمعوية للشريان السباتي الداخلي وشد الخيط حول الشريان السباتي المشترك لتأمين خياطة النايلون ومنع تسرب الدم.

قم بإزالة المشبك الدقيق الوعائي من الشريان السباتي الداخلي. ثم تقدم خيوط داخل اللمعة المغلفة بالسيليكون حتى ملاحظة انخفاض ملحوظ في تدفق الدم الدماغي الإقليمي الذي يشير إلى انسداد أصل الشريان الدماغي الأوسط. والجدير بالذكر أن انسداد الشريان الدماغي الإنسي يبدأ حيث يتم الكشف عن انخفاض في تدفق الدم الدماغي الإقليمي بأكثر من 80٪.

في هذا النموذج ، نقوم مؤقتا بمنع الشريان الظفرية باستخدام مشبك دقيق لتوجيه الفتيل بشكل صحيح إلى المسار الأذيني. لاحظ أن هذه الخطوة مهمة جدا لنجاح انسداد الشريان الدماغي الإنسي. قنية الوريد الوداجي وحقن إيفانز بلو.

قم بعمل شق طولي بطول سنتيمتر واحد في الرقبة إلى الجانب الأيسر من خط الوسط ثم قم بتشريح اللفافة السطحية بصراحة للوصول إلى الفرع الخارجي للوريد الوداجي الأيسر. ثم قم بربط الطرف القرني للوريد الوداجي بشكل دائم بخياطة 5-0 كيس. ضع ربطتين حول الوريد بشكل فضفاض ثم قم بتثبيت الطرف القلبي للوريد الوداجي مؤقتا باستخدام مشبك الأوعية الدموية الدقيق.

قم بعمل شق صغير على الوريد الوداجي باستخدام خيوط ثم أدخل قسطرة مملوءة بالمصل الهيباريني في المساحة اللمعوية للوريد وقم بدفعها حوالي 10 ملليمترات. بعد ذلك ، شد الأربطة حول الوريد لتأمين القسطرة ومنع النزيف. حقن كمية صغيرة من السيروم لتجنب انهيار الوريد.

في نهاية الفترة الإقفارية ، أي 90 دقيقة ، ابدأ في إعادة التروية عن طريق سحب الخيط داخل اللمع. في بداية فترة إعادة التروية ، قم بحقن صبغة إيفانز الزرقاء ببطء ملليلتر واحد لكل كيلوغرام من محلول 2٪ في محلول ملحي على مدى خمس دقائق. بعد ذلك ، اغسل القنية عن طريق حقن 0.5 مل من محلول ملحي عادي واسحب قنية الحقن من الوريد.

لاحظ تغير لون الأنسجة بعد حقن إيفانز بلو. أخيرا ، قم بخياطة شقوق الرقبة والرأس وضع في قفص الاسترداد. تقييم نفاذية الحاجز الدموي الدماغي.

بعد 24 ساعة من إعادة التروية ، قم بتخدير بعمق باستخدام ثيوبنتال الصوديوم. ثم افتح التجويف الصدري عن طريق عمل ثقب صغير أسفل القص. قم بعمل فتحة صغيرة في الأذين الأيمن وحقن 250 مل من المحلول الملحي المسخن مسبقا من خلال البطين الأيسر لمدة 15 دقيقة لغسل إيفانز بلو بعيدا عن الدورة الدموية حتى يصبح المحلول الملحي الطبيعي الذي يترك من الأذين عديم اللون.

قم بإزالة الدماغ على الفور من الجمجمة ووضعه في مصفوفة الدماغ. قم بتشريح البصلة الشمية والمخيخ ثم باستخدام شفرة حلاقة نظيفة ، افصل نصف الكرة الأيمن من الدماغ عن اليسار على طول خط الوسط. قم بوزن كل نصف كرة وقم بتجانسها بشكل منفصل في محلول ملحي مخزن بالفوسفات سعة 2.5 مل ثم امزجه مع 2.5 مل من حمض ثلاثي كلورو أسيتيك 16٪ لمدة دقيقتين باستخدام آلة دوامة.

عينات دماغ أجهزة الطرد المركزي لمدة 30 دقيقة واتركها تبرد في الثلاجة لمدة 10 دقائق. استخدم المواد الطافية لتقدير امتصاص إيفانز الأزرق بواسطة مقياس الطيف الضوئي عند 610 نانومتر. النتائج التمثيلية.

في التي يتم تشغيلها بشكل زائف ، يكون تركيز إيفانز الأزرق للأنسجة المحضرة لنصفي الكرة الأرضية من الدماغ صغيرا جدا ولا يوجد فرق كبير مقارنة ببعضها البعض. تسبب تحريض نقص التروية على مدى 90 دقيقة متبوعا ب 24 إعادة تروية في زيادة كبيرة في مستويات إيفانز بلو في نصف الكرة المخية المصابة بالدماغ في الفئران الإقفارية. بشكل جماعي ، تشير هذه النتائج إلى أنه في ظل الظروف العادية ، لا يمكن لإيفانز بلو عبور الحاجز الدموي الدماغي بسهولة إلى الحمة الدماغية والإهانات الإقفارية الدماغية التي تسببت في تسرب إيفانز بلو من خلال نفاذية داخلية للحاجز الدموي الدماغي.

تظهر الصورة الدماغ في التي يتم تشغيلها بشكل زائف والإقفارية. لاحظ أن شدة تسرب إيفانز الأزرق في أنسجة المخ ذات اللون الأزرق تنشأ من مدى اضطراب الحاجز الدموي الدماغي في نصف الكرة الأرضية المصاب. استنتاج. يسمح التقييم في الجسم الحي للحاجز الدموي الدماغي للباحث بدراسة الآليات الفيزيولوجية المرضية المحتملة لوذمة الدماغ الوعائية الناجمة عن نقص التروية وإيجاد تدخلات علاجية جديدة.

هذه التقنية بسيطة وموثوقة. يحتاج الباحث إلى مراعاة بعض النقاط الفنية لزيادة تحسين أداء التقنية والتأكد من دقتها. يمكن أن يؤدي التسجيل المستمر لتدفق الدم الدماغي الإقليمي باستخدام مقياس تدفق دوبلر بالليزر واستخدام خيوط مغلفة بالسيليكون إلى زيادة معدل نجاح MCAO وتقليل معدل الوفيات.

الجرعة والنقطة الزمنية للحقن هما معلمان أساسيان للحصول على نتائج موثوقة بسبب الطبيعة الديناميكية للحاجز الدموي الدماغي بعد الإهانات الإقفارية.