عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من السمحاق السنخية البشرية وآثار فيتامين د على نشاط الخلايا المستمدة من السمحاق أوستيوجينيك

الهدف العام من هذه الدراسة هو التحقيق في التأثيرات التحريضية للعظم لفيتامين (د) على الخلايا الجذعية الوسيطة المستنبتة التي تم حصادها من السمحاق السنخي السنخي. يعد استخدام الخلايا الجذعية الوسيطة تقدما كبيرا في طب الأسنان على مدار العقد الماضي. لقد تم عزلها وزراعتها بنجاح من أجزاء كثيرة من أنسجة الأسنان.

ومع ذلك ، فإن الهدف هو عزل الخلايا الجذعية الوسيطة واستزراعها من السمحاق السنخي والتحقيق في الإمكانات الحثية العظمية لمركب فيتامين د. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذا الأمر بسبب الفكرة الجديدة لتكوين العظام في الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من السمحاق السنخي. سيكون عرض موظفي المختبر للإجراء هو الآنسة هسين وين تشي ،

وهي مساعدة باحثة من مختبري. للبدء ، حصاد الأنسجة السمحاقية من المرضى أثناء جراحة الأسنان باستخدام فاصل السمحاق. اجمع الشرائح التي يبلغ حجمها حوالي اثنين في خمسة ملليمترات.

قم بتخزين شرائح الأنسجة في DPBS مع المضادات الحيوية. في المختبر ، استخدم مشرطا لفرم شظايا الأنسجة السمحاقية السنخية جيدا في غضون 24 ساعة من الحصاد. بعد ذلك ، قم بزراعة الأنسجة على أطباق بتري 35 ملم في وسط الاستزراع المناسب.

استخدم حاضنة رطبة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مع غاز ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪. بعد ثلاثة أيام ، تخلص من الأنسجة السمحاقية المجمعة وقم بتغيير الوسط. عندما تتكاثر الخلايا إلى حوالي 80٪ من التقاء ، افصل الخلايا المزروعة عن طريق إضافة التربسين.

واحتضان الثقافة لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك ، أضف 0.8 مل من الوسط لإنهاء الانفصال. بعد الجمع والعد ، قم بتوزيع 5 ، 000 خلية في مليلتر واحد لكل لوحة.

ضع علامة على الخلايا المطلية كممر واحد في هذه المرحلة. استزراع هذه الخلايا وفصلها مرة أخرى بعد أن تتكاثر إلى 80٪ من التقاء. الوسط مع ممر واحد هو في البداية برتقالي/لون أحمر.

عندما يبدأ الوسط في التحول إلى اللون البرتقالي بعد ثلاثة أيام ، قم بتغييره. عندما يصل مرور خلية واحدة إلى 80٪ من التقاء ، قم بإنشاء خلايا الجيل الثاني إلى الخامس عن طريق تكرار نفس الإجراءات المستخدمة لإعداد الجيل الصفري للجيل الأول. قم بتغيير الوسيط مرتين في الأسبوع.

بعد أربعة أسابيع ، قم بتقييم إمكانات الخلايا للتمايز إلى سلالة عظمية من خلال مراقبة مورفولوجيا الخلايا تحت المجهر. قم بجذع الخلايا باستخدام اختبار فون كوسا. يميز هذا الاختبار وجود رواسب متكلسة في ثقافتك.

اغسل الخلايا باستخدام PBS وقم بإصلاحها لمدة 30 دقيقة في مليلتر واحد من 10٪ فورمالين. بعد ذلك ، قم بإزالة الفورمالين ثم اغسل الخلايا ومعالجتها بنترات الفضة بنسبة 5٪. تعريض الخلايا للأشعة فوق البنفسجية لمدة ساعة واحدة.

بعد ذلك ، قم بإزالة نترات الفضة وعالج الخلايا بملليلترين من كبريتات الصوديوم 5٪ أربع مرات لمدة ثلاث دقائق في كل مرة. استبدل المحلول بين العلاجات. أخيرا ، اغسل الخلايا مرتين باستخدام الماء المقطر.

نجحت 20 من 34 عينة من الأنسجة السمحاقية في إنتاج مستعمرات الخلايا الجذعية المشتقة من النخاع. لم يتم العثور على أي عوامل تتعلق بالمتبرعين تؤثر بشكل كبير على نجاح الزراعة. في البداية ، شكلت PDCs مستعمرات ومجموعات كروية بمزيج من الخلايا المستديرة والمغزل.

بعد المقطع الأول ، كانت الخلايا متجانسة تشبه الخلايا الليفية مع شكل المغزل. في نهاية التمايز العظمي ، أشار اختبار فون كوسا إلى احتمال وجود رواسب الكالسيوم والتمايز العظمي. تشير هذه النتائج بقوة إلى أنه من بين مجموعات الخلايا السمحاقية ، تمتلك الخلايا السلفية القدرة على التمايز إلى خلايا عظمية.

كما تمت معالجة الخلايا السلائف العظمية بالكالسيتريول وفحصها باستخدام RTPCR لتقييم مستوى التعبير عن الفوسفاتيز القلوي وهو مؤشر قوي للتمايز العظمي المبكر للخلايا. كل من علاج فيتامين C والكالسيتريول ، وهو مستقلب نشط لفيتامين د ، يزيد من التعبير عن الفوسفاتيز القلوي. أيضا ، زاد التعبير عن مستويات الرنا المرسال للكولاجين استجابة لنفس العلاجات.

تم العثور على زيادة التعبير عن البروتين السيالوبروتين mRNA للخلايا المعالجة بتركيز أعلى من الكالسيتريول. ومع ذلك ، لم يستجب تعبير CBFA one و ostocalcium mRNA للعلاجات. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لدى الجمهور فهم جيد لبروتوكول التمعدن والثقافة للسمحاق السنخي البشري.

بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذا السعي في غضون أربعة إلى خمسة أسابيع إذا تم إجراؤه بشكل صحيح. عند محاولة هذه التجربة ، من المهم استخدام تقنية دقيقة ومعقمة لتجنب تلوث الخلية.