Name: الكيميائية البتر والتجديد البلعوم في البلاناريا mediterranea شميدتيا (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-26T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: تعلم طريقة إزالة البلعوم انتقائيًا في الديدان المسطحة باستخدام أزيد الصوديوم. تساعد هذه التقنية الباحثين على دراسة تجديد الأعضاء وسلوك الخلايا الجذعية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ونود أن نشكر أليخاندرو سانشيز ألفارادو، الذين أيدوا في التحسين الأولية وتطوير هذه التقنية. العمل في مختبر كارولين أدلر معتمد من قبل جامعة كورنيل أموال بدء التشغيل.

1-إعداد
<ol><li>
إعداد المياه المستورقات 17<ol>
<li>الحفاظ على بلاناريانس في محلول ملح X Montjuïc 1. لإعداد البلاناريا المياه، جعل الحلول الأسهم الفردية كاكل 1 م2، 1 م MgSO4، 1 "مجكل م"2، 1 م بوكل وكلوريد الصوديوم م 5 في الماء عالي النقاوة. عامل التصفية-تعقيم مع تخزين طويل الأجل فيلتيرفور أعلى زجاجة 0.2 ميكرون. ملاحظة: استخدم فقط عالي النقاوة المياه (مع أومه MΩ 18.2 عند 25 درجة مئوية) لإعداد مونتجويك الأملاح.</li>
		<li>إعداد مخزون 1 لتر من 5 س الحل الملح، الجمع بين 5 مل م 1 كاكل2, 5 مل من 1 م MgSO4، 0.5 مل من مجكل2، 0.5 مل من بوكل و 1.6 مل م 5 حلول كلوريد الصوديوم في الماء عالي النقاوة 900 مل. لهذا الحل، إضافة ز 0.504 ناكو3 وآثاره للخلط. قم بضبط درجة الحموضة 7.0 مع حمض الهيدروكلوريك.</li>
		<li>تمييع هذا 5 × الحل الأسهم 1 × تركيز العمل في الماء عالي النقاوة في حاوية معقمة مثل كاربوي قدرة كبيرة (انظر الجدول للمواد). استخدام هذا الحل X 1 للحفاظ على بلاناريانس مخصي. ملاحظة: كبديل للحل الملح مونتجويك، استخدام مياه الينابيع التي تم شراؤها محلياً أو عالي النقاوة المياه التي تحتوي على ملح حوض السمك متاحة تجارياً مزيج (انظر الجدول للمواد) في غرام/لتر of0.5 تركيز18.</li>
		<li>لمنع العدوى البكتيرية في ثقافة ثابتة19، الحفاظ على بلاناريانس في المياه التي تحتوي على المضادات الحيوية. إعداد 50 ملغم/مل الحل الأسهم من كبريتات الجنتاميسين في الماء عالي النقاوة وتعقيم عامل التصفية. للحاويات حيث يتم الاحتفاظ بالحيوانات، إضافة كبريتات الجنتاميسين لتركيز نهائي من 50 ميكروغرام/مل (تخفيف 1: 1000).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
إعداد معجون الكبد
	<ol>
<li>كما تزدهر بلاناريانس على نظام غذائي من العضوية، شراء اللحوم بنك الاحتياطي الفيدرالي العشب الكبد، الكبد الطازج وعملية ضمن 24 h. إزالة الكبسولة الغشائي تغليف الكبد التي يسقط بلطف. قطع الكبد إلى مكعبات ~ 1 سم، واستخدام شفرة كشط قبالة وتجاهل جميع عروق الكبد والشرايين.</li>
		<li>مسرات استخدام مطحنة المواد غذائية أو الطعام معالج قطعة الكبد وثم نقله من خلال مصفاة سلك شبكة غذاء. الجمع بين أكياس الحلويات، والاستغناء عن الحقن أو أطباق بتري 35 ملم. قبل اﻹطعام، الطرد المركزي برفق لإزالة فقاعات الهواء.</li>
		<li>تخزين مختبرين للكبد في-80 درجة مئوية لتصل إلى السنة، وذوبان الجليد قبل استخدام. بعد ذوبان الجليد، إعادة تجميد أي بقايا الكبد مرة واحدة، أو تخزين عند 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 24 ساعة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
الحفاظ على الحيوانات
	<ol>
<li>بلاناريانس سوف تنمو ويتقلص بأحجام مختلفة تبعاً لتواتر التغذية. آر بلاناريانس كل أسبوع (مرة واحدة كل 14 يوما). للمدى الطويل معظم الثقافات، استخدام حاويات بلاستيكية بأحجام مختلفة (انظر الجدول للمواد).</li>
		<li>لعلف الحيوانات واستخدام ملعقة معدنية أو بيبيت نقل البلاستيك لتضع قطره الحجم البازلاء من الكبد في مربع. السماح للحيوانات للأكل حاء – 1-2 إزالة المواد الغذائية المتبقية قبل تنظيف المربع.</li>
		<li>تنظيف الديدان مرتين في أسبوع إذا كان بنك الاحتياطي الفيدرالي (مرة واحدة مباشرة بعد الرضاعة ومرة بعد ذلك بيومين)، أو مرة واحدة في أسبوع إذا لم تغذي. لتنظيف، تصب المياه في كوب بلاستيك بصب الماء بعناية مع الاحتفاظ بلاناريانس في المربع. مسح سطح مربع مع منشفة ورقية، ثم كرر على جميع الجوانب حتى يصبح المربع نظيفة.</li>
		<li>استبدال الماء (إلى حوالي ¾ حجم مربع) وإضافة الجنتاميسين لتركيز نهائي من 50 ميكروغرام/مل. تخزن الحيوانات في خزانة مظلمة أو في حاضنة 20 درجة مئوية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تحديد ديدان
	<ol>
<li>حدد الديدان غذيت 5-7 أيام السابقة. ملاحظة: أنها أكثر صعوبة إلى حد كبير إلى بتر فارينجيس من الديدان التي قد تم تغذية مؤخرا (1-2 أيام قبل البتر). تغذية الحيوانات أيضا أكثر حساسية لأزيد الصوديوم.</li>
		<li>حدد الديدان التي تقريبا 6 مم في الطول. ولتقدير حجم الدودة، أنه نقل إلى طبق بتري ماصة نقل بلاستيك باستخدام. ضع المسطرة في شقة 6-أو ورق الرسم البياني 5 مم × 5 مم تحت طبق بيتري وقياس طول الدودة بينما كان يزحف. ملاحظة: الديدان أصغر من 6 مم في الطول أكثر صعوبة بتر.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
إعداد أزيد الصوديوم
	<ol>
<li>تحضير حلاً 100 ملم بتذويب مسحوق أزيد الصوديوم في المياه المستورقات. تنبيه: أزيد الصوديوم السامة وينبغي التعامل معها بعناية. عدم تجاهل أزيد الصوديوم هباء. وبعد الاستخدام، أنه جمع كل على حدة للتخلص منها كنفايات خطرة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2-البلعوم البتر
<ol><li>مكان الديدان في قطرها 35 ملم طبق بيتري. بعناية إزالة جميع البلاناريا المياه من الطبق باستخدام بيبيت نقل بلاستيك. ملاحظة: كحد أقصى من 20 ملم 6 الديدان يمكن استيعابها بشكل مريح في طبق بهذا الحجم.</li>
	<li>ضع الصحن تحت المجهر وضبط التكبير بحيث يمكن مشاهدة الديدان متعددة في وقت واحد (مثلاً 10 X التكبير). استبدال المياه البلاناريا بمحلول أزيد الصوديوم 100 مم. ملاحظة: لطبق بتري 35 ملم، حوالي 5 مل أزيد الصوديوم غير كافية. وينبغي أن تغرق الحل الكامل بلاناريانس. ضبط حجم الحل للاطباق أكبر عند الضرورة.</li>
	<li>مراقبة الحيوانات تحت المجهر وتمتنع عن تحريك الطبق لأول 3-4 دقيقة.</li>
	<li>مراقبة البثق البلعوم عن طريق المجهر؛ وسوف تبرز من الحقيبة البلعوم البلعوم وتمتد بالكامل (حوالي 1 مم في الطول) كما هو مبين في الشكل 1 باء. ملاحظة: من المهم الانتظار لحين انتهاء البلعوم تمديد تماما قبل المضي قدما. وبمجرد البلعوم يخرج من الحيوان، يأخذ التمديد الكامل تقريبا 1 دقيقة.</li>
	<li>استخدام بيبيت نقل بلاستيك لبخ الحيوانات حول الطبق. امتصاص الحيوانات إلى بيبيت وقسرا الإفراج عنهم إلى الطبق بضع مرات. إذا مددت البلعوم هو تماما، هذا بيبيتينج قوية سوف يؤدي إلى فصل.</li>
	<li>وبدلاً من ذلك، فهم البلعوم أما عمودياً على طوله، أو أفقياً على طول محيط استخدام زوج من غرامة الملقط (انظر الجدول للمواد) كما هو مبين في الشكل 1. مع البلعوم مقروص في الملقط، رفع الحيوان صعودا نحو غضروف. كما أثير الحيوان، سوف يسبب التوتر السطحي البلعوم لفصل من الحيوان. ملاحظة: يمكن استخدام هذا الأسلوب لإزالة فارينجيس الحيوانات الصغيرة (1-3 ملم في الطول) حيث يحوم قوية ليست كافية. تجنب دس أو خلاف ذلك مما أسفر عن إصابة جسم الحيوان.</li>
	<li>استخدام بيبيت نقل، نقل الحيوانات المبتورة إلى طبق جديد يحتوي على المياه العذبة المستورقات.</li>
	<li>بمجرد نقل، بترت شطف الحيوانات جيدا في المياه المستورقات، تماما تبادل المياه ثلاث مرات. نقل إلى طبق جديد يحتوي على الماء المستورقات مع 50µg/مل جنتاميسين. ملاحظة: تبادل المخزن المؤقت كاملة خلال هذه يغسل ثلاث ضروري لضمان التخلص أزيد الصوديوم.</li>
	<li>في اليوم التالي، استبدال الماء في الطبق مع المياه العذبة المستورقات التي تحتوي على 50 ميكروغرام/مل من الجنتاميسين. كرر كل يوم بعد ذلك.</li>
</ol>3-تقييم لإزالة البلعوم بعد بتر
<ol><li>دراسة الحيوانات تحت مجهر (مع 10-20 X التكبير) لتحديد ما إذا كانت بقعة مظلمة قد ظهرت بعد نجاح إزالة البلعوم، كما هو مبين في الشكل 2 ألف.</li>
	<li>وبدلاً من ذلك، إصلاح والتبييض الحيوانات وفقا لبروتوكول وصف بيرسون et al. 20-الحيوانات نقع بين عشية وضحاها في 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) أو ستريبتافيدين فلوريسسينتلي مترافق (1: 500 1 مغ/مل مخففة في 1 × الفوسفات خفف المحلول الملحي الذي يحتوي على 0.3% تريتون العاشر). جبل الحيوانات على الشرائح في glycerol/20% 80% 1 × الفوسفات خفف المحلول الملحي والصورة تحت ستيريوميكروسكوبي نيون (الشكل 2). ملاحظة: تم القبض على جميع الصور في هذه المخطوطة في ستيريوميكروسكوبي فلورية ذات هدف X 1.0.</li>
</ol>4-تقييم التجدد البلعوم بقياس تغذية السلوك
<ol><li>
إعداد الكبد
	<ol>
<li>نقل الكمية المطلوبة من معجون الكبد إلى ميكروسينتريفوجي أو أنبوب مخروطي. تدور بإيجاز لإزالة فقاعات الهواء. تقدير حجم الكبد، ثم قم بإضافة المياه المستورقات إلى 1/5 حجمها، و 2 في المائة من الحجم الإجمالي في تلوين الطعام حمراء. على سبيل المثال، إلى 1000 ميليلتر للكبد لصق، إضافة 200 ميليلتر من الماء المستورقات و 24 ميليلتر لتلوين الطعام.</li>
		<li>باستخدام مدقة بلاستيكية أو ماصة تلميح أو ملعقة معدنية، مزيج دقيق حتى تلوين الطعام موزعة بالتساوي في لصق الكبد. تدور مرة أخرى بإيجاز. يمكن تخزينها في 4 درجات مئوية عن ح 24 لصق الكبد أو المجمدة في مختبرين في-80 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل.</li>
		<li>إذا كان اختبار الحيوانات تصل إلى 25، إعداد 25 ميليلتر من معجون الكبد كل طبق (حوالي 1 ميليلتر من معجون الكبد للحيوان الواحد).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تغذية الحيوانات
	<ol>
<li>سبعة أيام بعد البتر الكيميائية ونقل الحيوانات إلى طبق بتري جديدة. إذا كان اختبار الحيوانات 10-15، استخدم طبق 35 مم؛ وينبغي اختبار الحيوانات أكثر من 15 في طبق بتري 60 ملم. إبقاء الحيوانات في الظلام، دون عائق، لقرابة 1 ح قبل التغذية.</li>
		<li>باستخدام مقص، زيادة عرض تلميح ماصة P200 بالتشذيب تقريبا ½ سم قبالة نهاية الضيقة. بيبيت 25 ميليلتر لصق الكبد الأحمر إلى الطبق. ملاحظة: تقليم النهاية يجعل بيبيتينج لصق الكبد لزج أسهل. لمنع الكبد من تطفو على السطح، تلمس في تلميح إلى الجزء السفلي من الطبق أثناء الاستغناء.</li>
		<li>السماح للحيوانات لإطعام لمدة 30 دقيقة.</li>
		<li>نقاط عدد الحيوانات التي قد أكلت بوضع الحيوانات على خلفية بيضاء أو فحصها تحت مجهر مع 10-20 X التكبير.</li>
		<li>بعد الرضاعة، إزالة الكبد من الطبق ونظيفة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Tanaka, E. M., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+basis+for+animal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The cellular basis for animal regeneration.</a> Dev. Cell. 21, 172-185 (2011).</li>
<li>Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Molecular+and+Cellular+Choreography+of+Appendage+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Molecular and Cellular Choreography of Appendage Regeneration.</a> Cell. 165, 1598-1608 (2016).</li>
<li>Curado, S., Stainier, D. Y. R., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitroreductase-mediated+cell%2Ftissue+ablation+in+zebrafish%3A+a+spatially+and+temporally+controlled+ablation+method+with+applications+in+developmental+and+regeneration+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies.</a> Nat. Protoc. 3, 948-954 (2008).</li>
<li>White, D. T., Mumm, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nitroreductase+system+of+inducible+targeted+ablation+facilitates+cell-specific+regenerative+studies+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">The nitroreductase system of inducible targeted ablation facilitates cell-specific regenerative studies in zebrafish.</a> Methods. 62, 232-240 (2013).</li>
<li>Smith-Bolton, R. K., Worley, M. I., Kanda, H., Hariharan, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+growth+in+Drosophila+imaginal+discs+is+regulated+by+Wingless+and+Myc%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Regenerative growth in Drosophila imaginal discs is regulated by Wingless and Myc.</a> Dev. Cell. 16, 797-809 (2009).</li>
<li>Smith-Bolton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Imaginal+Discs+as+a+Model+of+Epithelial+Wound+Repair+and+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Wound+Care%22%5BJournal%5D)">Drosophila Imaginal Discs as a Model of Epithelial Wound Repair and Regeneration.</a> Adv. Wound Care. 5, 251-261 (2016).</li>
<li>Newmark, P. A., Sánchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Not+your+father%27s+planarian%3A+a+classic+model+enters+the+era+of+functional+genomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Not your father's planarian: a classic model enters the era of functional genomics.</a> Nat. Rev. Genet. 3, 210-219 (2002).</li>
<li>Reddien, P. W., Sánchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+of+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Fundamentals of planarian regeneration.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 20, 725-757 (2004).</li>
<li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332, 811-816 (2011).</li>
<li>Scimone, M. L., Kravarik, K. M., Lapan, S. W., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neoblast+specialization+in+regeneration+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Neoblast specialization in regeneration of the planarian Schmidtea mediterranea.</a> Stem Cell Reports. 3, 339-352 (2014).</li>
<li>van Wolfswinkel, J. C., Wagner, D. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+reveals+functionally+distinct+classes+within+the+planarian+stem+cell+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis reveals functionally distinct classes within the planarian stem cell compartment.</a> Cell Stem Cell. 15, 326-339 (2014).</li>
<li>Adler, C. E., Seidel, C. W., McKinney, S. A., Sánchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+amputation+of+the+pharynx+identifies+a+FoxA-dependent+regeneration+program+in+planaria%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Selective amputation of the pharynx identifies a FoxA-dependent regeneration program in planaria.</a> Elife. 3, e02238(2014).</li>
<li>Adler, C. E., Sánchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PHRED-1+is+a+divergent+neurexin-1+homolog+that+organizes+muscle+fibers+and+patterns+organs+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">PHRED-1 is a divergent neurexin-1 homolog that organizes muscle fibers and patterns organs during regeneration.</a> Dev. Biol. 427, 165-175 (2017).</li>
<li>Wong, M. C., Martynovsky, M., Schwarzbauer, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cell+migration+using+Caenorhabditis+elegans+as+a+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of cell migration using Caenorhabditis elegans as a model system.</a> Methods Mol. Biol. 769, 233-247 (2011).</li>
<li>Margie, O., Palmer, C., Chin-Sang, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C+elegans+chemotaxis+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">C elegans chemotaxis assay.</a> J. Vis. Exp. , e50069(2013).</li>
<li>Fang-Yen, C., Gabel, C. V., Samuel, A. D. T., Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+microsurgery+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser microsurgery in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 107, 177(2012).</li>
<li>Tasaki, J., Uchiyama-Tasaki, C., Rouhana, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Stem+Cell+Motility+In+Vivo+Based+on+Immunodetection+of+Planarian+Neoblasts+and+Tracing+of+BrdU-Labeled+Cells+After+Partial+Irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of Stem Cell Motility In Vivo Based on Immunodetection of Planarian Neoblasts and Tracing of BrdU-Labeled Cells After Partial Irradiation.</a> Methods Mol. Biol. 1365, 323-338 (2016).</li>
<li>Roberts-Galbraith, R. H., Brubacher, J. L., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+genomics+screen+in+planarians+reveals+regulators+of+whole-brain+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">A functional genomics screen in planarians reveals regulators of whole-brain regeneration.</a> Elife. 5, (2016).</li>
<li>Arnold, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+shifts+in+endogenous+microbiota+impede+tissue+regeneration+via+distinct+activation+of+TAK1%2FMKK%2Fp38%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Pathogenic shifts in endogenous microbiota impede tissue regeneration via distinct activation of TAK1/MKK/p38.</a> Elife. 5, (2016).</li>
<li>Pearson, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde-based+whole-mount+in+situ+hybridization+method+for+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde-based whole-mount in situ hybridization method for planarians.</a> Dev. Dyn. 238, 443-450 (2009).</li>
<li>LoCascio, S. A., Lapan, S. W., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eye+Absence+Does+Not+Regulate+Planarian+Stem+Cells+during+Eye+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Eye Absence Does Not Regulate Planarian Stem Cells during Eye Regeneration.</a> Dev. Cell. 40, 381-391 (2017).</li>
<li>Nishimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+dopaminergic+neurons+after+6-hydroxydopamine-induced+lesion+in+planarian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Regeneration of dopaminergic neurons after 6-hydroxydopamine-induced lesion in planarian brain.</a> J. Neurochem. 119, 1217-1231 (2011).</li>
<li>Wilson, D. F., Chance, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Azide+inhibition+of+mitochondrial+electron+transport.+I.+The+aerobic+steady+state+of+succinate+oxidation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim.+Biophys.+Acta%22%5BJournal%5D)">Azide inhibition of mitochondrial electron transport. I. The aerobic steady state of succinate oxidation.</a> Biochim. Biophys. Acta. 131, 421-430 (1967).</li>
<li>Duncan, H. M., Mackler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+Transport+Systems+of+Yeast%3A+III.+Preparation+and+properties+of+cytochrome+oxidase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Electron Transport Systems of Yeast: III. Preparation and properties of cytochrome oxidase.</a> J. Biol. Chem. 241, 1694-1697 (1966).</li>
<li>Buchan, J. R., Yoon, J. H., Parker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-specific+composition%2C+assembly+and+kinetics+of+stress+granules+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress-specific composition, assembly and kinetics of stress granules in Saccharomyces cerevisiae.</a> J. Cell Sci. 124, 228-239 (2011).</li>
<li>Cebrià, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+nervous+system+in+the+model+planarian+Schmidtea+mediterranea%3A+An+immunocytochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Organization of the nervous system in the model planarian Schmidtea mediterranea: An immunocytochemical study.</a> Neurosci. Res. 61, 375-384 (2008).</li>
<li>Shimoyama, S., Inoue, T., Kashima, M., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Neuropeptide-Coding+Genes+Involved+in+Planarian+Pharynx+Extension%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog.+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple Neuropeptide-Coding Genes Involved in Planarian Pharynx Extension.</a> Zoolog. Sci. 33, 311-319 (2016).</li>
<li>Ito, H., Saito, Y., Watanabe, K., Orii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epimorphic+regeneration+of+the+distal+part+of+the+planarian+pharynx%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Epimorphic regeneration of the distal part of the planarian pharynx.</a> Dev. Genes Evol. 211, 2-9 (2001).</li>
<li>Bueno, D., Espinosa, L., Baguñà, J., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+pharynx+regeneration+in++tail+fragments+monitored+with+cell-specific+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Planarian pharynx regeneration in tail fragments monitored with cell-specific monoclonal antibodies.</a> Dev. Genes Evol. 206, 425-434 (1997).</li>
<li>Hyman, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHyman%2C+L+%22The+invertebrates%3A+Platyhelminthes+and+Rhynchocoela%2C+the+acoelomate+Bilateria%22">The invertebrates: Platyhelminthes and Rhynchocoela, the acoelomate Bilateria</a>. , McGraw-Hill. (1951).</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

ويصف هذا البروتوكول طريقة التذرية انتقائية البلعوم باستخدام أزيد الصوديوم. استخدمت دراسات أخرى الاجتثاث المستهدفة في بلاناريانس تعديل عملية جراحية لإزالة photoreceptors21 أو العلاج الدوائي ليجتذ تتميز الخلايا العصبية22. واحد ميزة هامة من بتر الكيميائية عبر الطرق الحالية أنها لا تتطلب جراحة. يسهل بنية جامدة البلعوم مقارنة ببقية الجسم البلاناريا إزالة كاملة من الحيوان، الذي أكثر ليونة جسديا. كما يفصل البلعوم من الحيوان في مفرق صغيرة (المريء)30 الانضمام...

التجديد هو ظاهرة تحدث في جميع أنحاء المملكة الحيوانية، مع قدرات التجدد بدءاً من تجديد كامل الجسم في بعض اللافقاريات إلى قدرات أكثر تقييداً في الفقاريات1. استبدال أنسجة وظيفية عملية معقدة، وكثيراً ما يستتبع إعادة متزامنة بأنواع متعددة من الخلايا. على سبيل المثال، تجديد أطرافهم [سلمندر]، خلايا الاوستيوبلاستس، chondrocytes، والخلايا العصبية، والعضلات، والخلايا الظهارية في حاجة إلى أن يكون محل2. هذه أنواع الخلايا التي تم إنشاؤها حديثا تحتاج أيضا إلى أن تنظم بشكل صحيح لتيسير وظيفة جديدة من أطرافهم. فهم هذه العمليات المعقدة تتطلب التقنيات التي تركز على التجديد لأنواع محددة من الخلايا واندماجها في الأجهزة.
واحدة من الاستراتيجيات المستخدمة لتبسيط دراسة استجابات التجدد هو الاجتثاث المستهدفة أما بعض أنواع الخلايا أو مجموعات أكبر من الأنسجة. على سبيل المثال، في الزرد، التعبير عن نيتروريدوكتاسي في أنواع محددة من الخلايا يؤدي إلى تدميرها بعد تطبيق ميترونيدازول3،4. في اليرقات المورفولوجية ، يمكن التعبير عن الجينات برو-أبوبتوتيك تحت المروجين الأنسجة على حدة بشكل انتقائي يجتذ مناطق محددة من5،إيماجينال القرص6. كل من هذه الاستراتيجيات تسبب التلف السريع الخاضعة للرقابة، وقد استخدمت لتشريح الآليات الجزيئية والخلوية المسؤولة عن التجدد.
في هذه المخطوطة، يمكننا وصف أسلوب انتقائي يجتذ جهازا أسرة تسمى البلعوم في البلاناريا mediterranea شميدتيا. بلاناريانس نموذج كلاسيكية للتجدد، معروفة بقدرتها التجدد غزير، حيث يمكن أن تنمو شظايا دقيقة حتى الحيوانات كله 7،8. لديهم عدد سكانها كبيرة وغير متجانسة من الخلايا الجذعية تتكون من خلايا pluripotent وفروعه المقيدة بالنسب9،،من1011. تتكاثر هذه الخلايا والتفريق ليحل محل جميع الأنسجة المفقودين، بما في ذلك البلعوم ونظم الجهاز العصبي والجهاز الهضمي والإخراج، والعضلات والخلايا الظهارية9،،من1012. وفي حين أننا نعرف أن هذه الخلايا الجذعية الشروع في التجديد، نحن لا يفهم تماما الآليات الجزيئية التي تدفع بهم استبدال كل هذه الأنواع المختلفة من الخلية. يمكن أن تساعد الأساليب مما أسفر عن إصابة محددة بأن الحصول على ردود محددة من الخلايا الجذعية تحدد هذه العملية المعقدة.
البلعوم عبارة عن أنبوب أسطواني كبير، واللازمة لتغذية، ويحتوي على الخلايا العصبية، والعضلية، والخلايا الظهارية والافرازيه13،29. عادة مخبأة في حقيبة على الجانب البطني للحيوان، فهي تمتد من خلال جسم الحيوان واحد فتح عند استشعار وجود الغذاء. إلى بتر البلعوم بشكل انتقائي، ونحن نقع بلاناريانس في أزيد صوديوم تسمى كيميائية، مخدر استخداماً في C. ايليجانس14،،من1516. استخدامها في بلاناريانس وأبلغت أولاً أدلر et al.، في عام 201412. في غضون دقائق تعرض لأزيد الصوديوم، بلاناريانس قذف بهم فارينجيس، ويفصل البلعوم مع الانفعالات لطيف، من الحيوان. نشير إلى هذه الخسارة كاملة وانتقائية البلعوم ك "بتر الكيميائية". أسبوع واحد بعد بتر الأطراف، البلعوم تعمل بكامل طاقتها هو استعادة12. لأن البلعوم مطلوب للتغذية، يمكن قياس التجدد الوظيفية برصد سلوك التغذية. أدناه، ونحن تصف البروتوكول لبتر الكيميائية، وتقييم تجديد البلعوم وإعادة تغذية السلوك.

ثنائي <table><tbody><tr><td>هيدرات كلوريد الكالسيوم (CaCl 2) فيشر</td> <td>كيماويكال</td><td>C79-3</td><td>Montju & iuml ؛ ج محلول الملح</td></tr><tr><td>كبريتات المغنيسيوم اللامائية (MgSO4) فيشر</td> <td>الكيميائية</td><td>M65-3</td><td>Montju & iuml; ج محلول الملح</td></tr><tr><td>سداسي هيدرات كلوريد المغنيسيوم (MgCl2) Acros</td> <td>/ VWR</td><td>41341-5000</td><td>Montju &iuml; ج محلول الملح</td></tr><tr><td>كلوريد البوتاسيوم (KCl) Acros</td> <td>Organics / VWR</td><td>196770010</td><td>Montju &iuml; ج محلول الملح</td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) أكروس</td> <td>العضوية / VWR</td><td>207790050</td><td>مونتجو & يومل. ج محلول ملح</td></tr><tr><td>بيكربونات الصوديوم (NaHCO3) Acros</td> <td>Organics / VWR</td><td>123360010</td><td>Montju & iuml. ج محلول الملح</td></tr><tr><td>Nalgene البولي بروبيلين كوبوليمر قابل للتعقيم lowboy مع حنفية</td><td>ThermoFisher Scientific / VWR</td><td>2324-0015</td><td>تخزين مياه بلاناريا</td></tr><tr><td>الفورية المحيط</td> البحر <td>طيف الطيف العلامات التجارية أمازون</td><td></td><td>بلاناريا المياه</td></tr><tr><td>جنتاميسين كبريتات</td><td>الجوزاء المنتجات الحيوية</td><td>400-100P</td><td>شفرات الحلاقة المياه بلاناريا</td></tr><tr><td></td><td>علوم المجهر الإلكتروني</td><td>71970</td><td>فرم الكبد&nbsp;</td></tr><tr><td>أكياس المعجنات التي تستخدم لمرة واحدة - 16 بوصة ، 12 عبوة</td><td>من Wilton</td><td>Amazon</td><td>Liver aliquots</td></tr><tr><td>5 مل محاقن</td><td>BD / VWR</td><td>309647</td><td>الكبد Aliquots</td></tr><tr><td>أطباق بتري - 35 مم / 60 مم</td><td>Greiner Bio-One / VWR</td><td>82050-536 / 82050-544</td><td></td></tr><tr><td>حاويات بلاستيكية (أحجام مختلفة)</td><td>Ziploc</td><td>Amazon</td><td>Housing planarians في الثقافة الساكنة</td></tr><tr><td>الصوديوم أزيد</td><td>سيجما</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>نقل ماصة</td><td>الكرة الأرضية العلمية</td><td>138030</td><td></td></tr><tr><td>ملقط - Dumont Tweezer ، Style 5</td><td>Electron Microscopy Sciences &nbsp ؛</td><td>72700-D (0203-5-PO)</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>DAPI&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>62247</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin ، Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher</td><td>S11223</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Fisher الكواشف الحيوية</td><td>BP229-1</td><td></td></tr></tbody></table>

الكيميائية البتر والتجديد البلعوم في البلاناريا mediterranea شميدتيا

Chemical Amputation and Regeneration of the Pharynx in the Planarian Schmidtea mediterranea

بلاناريانس هي فلاتورمس التي فعالة للغاية في التجديد. أنهم مدينون بهذه القدرة على عدد كبير من الخلايا الجذعية التي يمكن الاستجابة بسرعة لأي نوع من الضرر. نماذج الإصابات الشائعة في هذه الحيوانات إزالة كميات كبيرة من الأنسجة، مما يضر بأجهزة متعددة. للتغلب على هذه الأضرار الأنسجة واسعة، يصف لنا هنا طريقة لإزالة جهاز واحد، البلعوم، بشكل انتقائي في البلاناريا mediterranea شميدتيا. نحقق ذلك بالحيوانات مغطس بمحلول يحتوي على أزيد الصوديوم مثبطات السيتوكروم أوكسيديز. تعرض موجزاً لأزيد الصوديوم يسبب بثق البلعوم من الحيوان، والتي نسميها "الكيميائية البتر." بتر الكيميائية يزيل البلعوم كامل، ويولد جرحا صغيراً حيث تولي البلعوم للامعاء. وبعد الشطف واسعة النطاق، تجديد جميع الحيوانات المبتورة البلعوم تعمل بكامل طاقتها في أسبوع واحد تقريبا. الخلايا الجذعية في بقية أنحاء الجسم محرك التجديد البلعوم الجديدة. هنا، نحن نقدم مفصل البروتوكول لبتر الكيميائية، ووصف طرق غذائها والسلوكية على السواء لتقييم نجاح البتر والتجديد.

التعرض لأزيد الصوديوم يعطل حركية طبيعية من بلاناريانس، مما تسبب في الحيوانات على امتداد وتلوي. قوة هذه الحركات البلعوم الخروج من الجانب البطني للحيوان، وبعد حوالي 6 دقائق في محلول أزيد الصوديوم، يمكن رؤية تلميح أبيض البلعوم (الشكل 1B-اللوحة اليسرى). بضع دقائق في وقت لاحق، الحيوانات بنشاط العقود وتمديد البلعوم تماما بقوة دفعها خارج الجسم. (الشكل 1B-الفريق الأوسط). حوالي الساعة 11 دقيقة بعد التعرض ...

البلاناريا mediterranea شميدتيا نموذج ممتاز لدراسة الخلايا الجذعية وتجديد الأنسجة. ويصف هذا المنشور أسلوب لإزالة جهاز واحد، البلعوم، بشكل انتقائي بتعريض الحيوانات لأزيد الصوديوم الكيميائية. ويوجز هذا البروتوكول أيضا أساليب لرصد التجديد البلعوم.

Planarians are flatworms that are extremely efficient at regeneration. They owe this ability to a large number of stem cells that can rapidly respond to ...

الهدف العام من إجراء البتر هذا هو إزالة البلعوم بشكل انتقائي وكامل من المستويين دون الإضرار بالأعضاء الأخرى. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التجديد. مثل كيفية التعرف على الخلايا الجذعية للأعضاء المفقودة وبدء تجديدها.الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها دقيقة للغاية وأن الأعضاء الأخرى لا تتضرر أثناء العملية. خطرت لي فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما كنت أخدر المستويين بأزيد الصوديوم. لقد لاحظت أن التعرض لأزيد الصوديوم تسبب في خروج البلعوم.يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأن البتر يتطلب الاختيار الصحيح للحيوانات بالإضافة إلى المراقبة الدقيقة لحركة ومورفولوجيتها. ستظهر الإجراء ديفيا شيرور ، طالبة الدراسات العليا من مختبري. قبل البدء في الإجراء ، استخدم ماصة نقل بلاستيكية لاختيار الديدان التي تم إطعامها قبل خمسة إلى سبعة أيام في طبق بتري نظيف.ضع مسطرة مسطحة أسفل طبق بتري للتأكد من أن كل مستوي يبلغ طوله 6 ملليمترات على الأقل أثناء الزحف عبر الطبق. ثم انقل ما يصل إلى 20 دودة مختارة إلى طبق بتري مقاس 35 ملم واستخدم ماصة نقل لإزالة جميع المياه المستوية من الطبق. ضع الطبق تحت مجهر استريو واضبط التكبير بحيث يمكن مشاهدة متعددة.أضف خمسة ملليلتر من محلول أزيد الصوديوم الطازج 100 مللي مولار إلى الطبق. راقب دون تحريك الطبق لمدة ثلاث إلى أربع دقائق لمراقبة بثق البلعوم. عندما يمتد ما لا يقل عن نصف الموجودة في الطبق إلى البلعوم بالكامل ، استخدم ماصة نقل بلاستيكية لشفط الديدان وتوزيعها بالقوة حول الطبق عدة مرات.إذا تم تمديد أي بلعوم بالكامل ، فإن هذه الماصة القوية ستؤدي إلى انفصالها. بدلا من ذلك ، استخدم زوجا من الملقط الدقيق لإمساك البلعوم أثناء رفع المستوي لأعلى باتجاه الغضروف المفصلي. عندما يتم تربية ، سيؤدي التوتر السطحي إلى انفصال البلعوم.أثناء تحريك البلعوم ، احرص على عدم التسبب في إصابة عرضية للحيوانات. المستويين ناعمون جدا ويتضررون بسهولة ، خاصة عندما يكون في أزيد الصوديوم. استخدم ماصة نقل لنقل حوالي 15 مبتورة إلى طبق جديد يحتوي على ماء مستوي عذب وشطف الديدان بالماء المستوي العذب ثلاث مرات.تأكد من غسل أزيد الصوديوم تماما. حتى آثار المادة الكيميائية يمكن أن تتسبب في تحلل. ثم احتضان الديدان عند 20 درجة مئوية لمدة سبعة أيام.في اليوم التالي للبتر ، ضع الديدان مرة أخرى تحت المجهر لتحديد ما إذا كانت البقعة الداكنة مرئية على الجانب الظهري من الدودة. لتغذية الديدان ، انقل كمية مناسبة من معجون الكبد إلى أنبوب طرد مركزي دقيق وقم بالطرد المركزي للأنبوب لفترة وجيزة لإزالة أي فقاعات هواء. بعد تقدير حجم حبيبات المعجون ، أضف الماء المستوي إلى خمس حجمه.بناء على الحجم الكلي في الأنبوب ، أضف اثنين بالمائة من ألوان الطعام الحمراء. امزج عينة الطعام جيدا حتى يتم توزيع الصبغة بالتساوي في جميع أنحاء المعجون وقم بالطرد المركزي للأنبوب لفترة وجيزة مرة أخرى. انقل المبتورة إلى طبق بتري جديد وضعها في الظلام لمدة ساعة تقريبا.في نهاية الحضانة ، قم بقص ما يقرب من نصف سنتيمتر من نهاية طرف ماصة P200 واستخدم الطرف المعدل لنقل 25 ميكرولترا من معجون الكبد الأحمر إلى الطبق. اسمح للحيوانات بالتغذية لمدة 30 دقيقة. ثم ضع الديدان على خلفية بيضاء لتسجيل عدد التي تظهر باللون الأحمر.بعد حوالي 6 دقائق في محلول أزيد الصوديوم ، يمكن رؤية الطرف الأبيض للبلعوم. بعد بضع دقائق ، تنقبض بنشاط وتخرج البلعوم بقوة من أجسامها. بعد حوالي 11 دقيقة من التعرض للأزيد ، تسترخي وعند هذه النقطة يصبح شكل الجرس المميز للبلعوم مرئيا بوضوح.وهي الآن جاهزة للبتر. تؤدي إزالة هذه الكتلة الكبيرة غير المصطبغة من الأنسجة إلى ظهور بقعة داكنة على الجانب الظهري للحيوانات المبتورة. لمراقبة تجديد البلعوم بشكل أكثر دقة ، يمكن تلطيخ بالستربتافيدين المترافق بالفلورسنت بين عشية وضحاها.من خلال الجمع بين تلوين الطعام ومعجون الكبد ، يمكن تمييز التي تأكل عن التي لا تأكل. يمكن بعد ذلك تحديد عدد الحمراء لتقييم النسبة المئوية للحيوانات ذات البلعوم الوظيفي. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في 20 أو 30 دقيقة.عند محاولة هذا الإجراء ، تذكر أن تراقب الحركة المستوية بعناية لتحديد متى يجب أن يبدأ البتر. يمكن أن تساعد عمليات البتر الانتقائية في معالجة أسئلة مثل كيفية بدء الخلايا الجذعية في اتخاذ قرارات النسب المناسبة لإنجاز التجديد. يجب أن يوفر هذا الفيديو فهما جيدا لكيفية إجراء الإزالة الانتقائية للبلعوم باستخدام أزيد الصوديوم.يمكن أن يكون العمل مع أزيد الصوديوم خطيرا للغاية. تذكر دائما التعامل معها بالقفازات ، والتخلص من النفايات بشكل صحيح وتنظيف مساحة العمل الخاصة بك بعد التجربة.

chemical-amputation-regeneration-pharynx-planarian-schmidtea

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

نموذج لدراسة جاذبية تمايز الخلايا الجذعية داخل الحيوانات الحية هي دودة مسطحة مستورقة. هو درس تجارب التجديد التي بتر بسيطة التي يتم تنفيذها بسهولة في المختبر الأساسية وقابلة لل(والدوائية...

فحوصات الوراثية الدوائية وظيفية للتلاعب تجديد مستورقة Dugesia تفرضه اليابان</em

وصفت وسيلة فعالة لتطعيم الأنسجة من حجم محدد وثابت بين المستورقات. كما تضمنت وصفا للطريقة التي يمكن أن تتكيف تقنية تجميد المستخدمة لزراعة الأعضاء، وبالتزامن مع دروع الرصاص، لتشعيع جزئي للحيوانات الحية.

تجميد مستورقة، التشعيع جزئي، والنسج

نوضح هنا كيفية تحفيز ومراقبة التجدد في شقائق النعمان البحرية النجمية Nematostella vectensis ، وهو نموذج أنثوزوان مجوف مجوف.  نوضح كيفية بتر وتصنيف التجديد باستخدام نظام التدريج المورفولوجي ، ونستخدم هذا النظام للكشف عن متطلبات الالتهام الذاتي في تجديد هياكل الاورام الحميدة.

حمل كاملة ورم التجديد من مجافي الفم المنفخة من البحر شقائق النعمان النجيم Nematostella vectensis

يظهر هذا البروتوكول كيفية استئصال باستمرار عيون مستورقة (أكواب البصرية) من دون إزعاج الأنسجة المحيطة بها. باستخدام إبرة الأنسولين والمحاقن، إما احدة أو كلتا العينين يمكن أن يكون ذاب لتسهيل التحقيقات في آليات تنظيم التجديد العين، وتطور تجديد البصري، والأساس العصبي للسلوك الناجم عن الضوء.

الجراحية تذرية الفحص لدراسة التجديد العين في مستورقات

هنا، نقدم بروتوكول اعادة الاستئصال الطرفية للفأر الكبار للتحقيق في تكوين الببلاسيما الثدييات وتحجر داخل الهستيرين، وتحليلها من قبل الكيمياء المناعية الفلورية والتتابع في الجسم الحي التصوير المقطعي المجهري.

الكبار الماوس أرقام بتر وتجديد: نموذج بسيط للتحقيق في تكوين بلاسيما الثدييات والتحجر intramembranous

يحمل المُعَلِّقون في المياه العذبة ثلاث مشيات (مزلق، و peristalsis، وscrunching) يمكن تمييزها من خلال التحليل السلوكي الكمي. نحن وصف طريقة للحث على scrunching باستخدام مختلف المحفزات الضارة، وتحديد كم من ذلك، والتمييز من ال peristalsis وتزلق. باستخدام ضرب الجينات ، ونحن نبين خصوصية scrunching كمي phenotypic القراءة.

بلانكوري Scrunching كما قراءات سلوكية كمية لتحسس المحفزات الضارة

كان هدف هذه الدراسة توحيد نهج جراحي آمن وقابل للتكرار لإجراء بتر كامل عرضي للفك السفلي في Ambystoma mexicanum لدراسة تجديد الأنسجة الجمجمية والوجهية.

تصميم وتوحيد نموذج إصابة الفك السفلي لدراسة تجديد أنسجة الجمجمة الوجهية في نموذج أمبيستوما مكسيكانوم

يوفر هذا البروتوكول دليلا مفصلا ومميزا لاستخدام السطحية Schmidtea Mediterranean كنموذج لدراسة التفاعلات بين المضيف والممرض أثناء العدوى الفطرية. تعتمد الطريقة على الإجراء السابق لإصابة البلاناريين بممرض الفطر البشري كانديدا ألبيكانس، مقدمة إرشادات مفصلة لتعزيز قابلية التكرار والاتساق التجريبي.

بروتوكول محسن لعدوى الكانديدا ألبيكانس في شميدتي البحر الأبيض المتوسط لدراسة مسببات الفطريات والدفاع عن المضيف

نصف الخطوات التفصيلية لمقايسة كيميائية عالية الإنتاجية في الديدان الخيطية Caenorhabditis elegans المستخدمة لتقييم سمية السلالة الجرثومية. في هذا الفحص ، تتم مراقبة اضطراب وظيفة السلالة الجرثومية بعد التعرض للمواد الكيميائية باستخدام مراسل فلورسنت خاص بأجنة اختلال الصيغة الصبغية.

تقييم شامل من سلالة الجرثومية الكيماوية السمية باستخدام نيماتودا<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

ذبابة الفاكهة ، أو خلايا الدم ، تدور بين المواقع المقيمة والدورة الدموية.  في اليرقة ، تتمركز الخلايا الدموية المقيمة (اللاطئة) في البيئات الدقيقة الاستقرائية ، والجيوب المكونة للدم ، بينما تتحرك الخلايا الدموية المنتشرة بحرية في الهيموليمف. الهدف من هذا البروتوكول هو العزل الموحد والقياس الكمي لهذين المجموعتين ، المتمايزتين سلوكيا ولكنهما متداخلتان.

يعاير بالسكان خلية الدم لل<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em&gt; اليرقة

تعلم طريقة إزالة البلعوم انتقائيًا في الديدان المسطحة باستخدام أزيد الصوديوم. تساعد هذه التقنية الباحثين على دراسة تجديد الأعضاء وسلوك الخلايا الجذعية.

الكيميائية البتر والتجديد البلعوم في البلاناريا mediterranea شميدتيا

استكشف المزيد من الفيديوهات