توصيف البوليمرات الاصطناعية عن طريق مصفوفة بمساعدة الليزر الامتزاز التأين وقت الرحلة (استخدام-TOF) الطيف الكتلي

الهدف العام من هذا البرنامج التعليمي MALDI-TOF MS هو تعليم المستخدمين حول إعداد العينات والحصول عليها وتحليلها أثناء التوصيف بواسطة MALDI-TOF MS. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال توصيف البوليمر ، مثل الوزن الجزيئي للبوليمر والتشتت وهوية المجموعة النهائية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بتحديد مجموعات نهاية البوليمر المتجانس. أولا ، قم بإعداد سلسلة من الحلول عن طريق خلط محاليل المصفوفة والتحليل والكاتيون المعدة مسبقا مع تغيير النسب النسبية للمكونات بحيث يتم صنع تسعة مخاليط عينات فريدة.

في هذه التجربة ، امزج 15 ميكرولترا من محلول بولي (L-lactide) مع 15 ميكرولترا من محلول حمض 2 و 5-ثنائي هيدروكسي بنزويك وميكرولتر واحد من محلول ثلاثي كلورو أسيتات الصوديوم. ماصة ميكرولتر واحد من كل خليط محلول على عينة فردية على لوحة مستهدفة MALDI. أضف العينات بشكل تدريجي في أجزاء صغيرة لمنع العينة من التدفق من العينة جيدا ، مما يسمح لكل حصة بالتبخر حتى تجف قبل إضافة عينة إضافية.

لبدء الحصول على البيانات ، أولا ، افتح برنامج الحصول على البيانات ، Flexcontrol. أخرج المنصة لتمكين تحميل اللوحة المستهدفة بالضغط على زر الإخراج. ضع اللوحة المستهدفة برفق مع عينات العيار والتحليل المحملة على المنصة في الاتجاه المناسب.

بعد ذلك ، استخدم برنامج الاستحواذ لحقن اللوحة المستهدفة على المنصة بالضغط على زر الإخراج مرة أخرى. حدد طريقة الحصول على البيانات المناسبة بالضغط على ملف واختيار تحديد طريقة. قبل الحصول على البيانات ، تأكد من تحديد نطاق كتلة مناسب لجمع البيانات بالنقر فوق علامة التبويب الكشف وعرض النطاق الكتلي.

من برنامج الاستحواذ ، حدد الموضع على اللوحة المستهدفة الذي يتوافق مع المادة المراد تحليلها. لبدء جمع البيانات ، اضغط على ابدأ وحرك هدف الليزر حول العينة لزيادة الإشارة إلى أقصى حد. باستخدام شريط الانزلاق على الجانب الأيسر من نافذة الكاميرا ، اضبط طاقة الليزر بحيث يتم تحقيق الحد الأدنى من الطاقة اللازمة لتحقيق دقة النظائر.

قم بتكبير ذروة فردية في منتصف نطاق الكتلة محل الاهتمام ، وتحسين الدقة عن طريق ضبط الفرق في جهد التسارع عن طريق تغيير قيمة IS2 في علامة التبويب مقياس الطيف. أخيرا ، قم بتحسين طاقة الليزر عن طريق تقليلها إلى أدنى مستوى ممكن مع الاستمرار في توليد نسبة إشارة معقولة إلى الضوضاء. بمجرد تحسين معلمات الاكتساب ، احفظ الطريقة عن طريق تحديد ملف ثم حفظ الطريقة باسم.تأكد من إبطال أي معايرة موجودة أو في وضع يتم استبدالها بالضغط على إلغاء إبطال المعايرة ضمن علامة التبويب مقياس الطيف.

باستخدام نفس معلمات الاستحواذ ، انقل الليزر إلى بئر العينة التي تحتوي على العيار عن طريق تحديد البئر المقابل للمؤشر والحصول على طيف بالضغط على ابدأ. بمجرد الحصول على إشارة كافية ، اضغط على ابدأ لإنهاء الحصول على البيانات. بمجرد الحصول على طيف كتلي من العيار، حدد القائمة المنسدلة قائمة التحكم في الكتلة في علامة التبويب المعايرة التي تتوافق مع معيار المعايرة هذا.

قبل مطابقة الذروة المرجعية المقابلة مع كل ذروة عيار محددة، تأكد من إستخدام بروتوكول انتقاء الذروة المناسب عن طريق تحديد علامة التبويب المعالجة. قم بتطبيق الكتلة المرجعية من قائمة التحكم في الكتلة على الإشارة المقابلة للطيف الكتلي عن طريق تحديد المنطقة الموجودة على يسار ذروة الاهتمام ثم النقر فوق الكتلة المقابلة في قائمة التحكم للتطبيق. استمر في هذه العملية لقمم العيار المتبقية.

استعادة الطيف التحليلي بمجرد معايرة المقياس الشامل لمعلمات الاستحواذ المحسنة. افتح Analyte Spectrum في برنامج تحليل البيانات. قم بتكبير الذروة لتحديد ما إذا كان قد تم تحقيق دقة النظائر عن طريق تحديد زر تكبير النطاق X.

الآن ، اضغط على قائمة الكتلة واختر بحث لتحديد القمم. إذا تم حل الذروة أحادية النظير ، فحدد هذه الذروة الأولى في توزيع النظائر لتحديد كتلتها باستخدام بروتوكول انتقاء الذروة أحادي النظير. يؤكد MALDI-TOF MS التوزيع الضيق لبولي (L-lactide) thiol وتم استخدام برنامج التحليل لحساب خصائص البوليمر الموضحة هنا.

الكتلة المرصودة ل 26-mer هي 1973.62 ، وهو ما يعادل سالب 0.07 دالتون يختلف عن القيمة النظرية. تشير الإشارة الأصغر عند 2045.74 إلى الأسترة التبادلية أثناء بلمرة فتح الحلقة لحمض اللاكتيك. من المحتمل أن تكون الذروة الصغيرة عند 2057.73 نتيجة البدء من الماء أثناء بلمرة فتح الحلقة لمونومر اللاكتيد.

يؤكد MALDI-TOF MS التوزيع الضيق للبولي (L-lactide) thiol الذي تم إنهاؤه بعد تفاعل الثيول-إيين مع ماليميد وتم استخدام برنامج التحليل لحساب خصائص البوليمر الموضحة هنا. تتوافق الكتلة النظرية ل 26-mer من poly (L-lactide) thiol المنتهية مع 2070.56891 ، وهو ما يختلف بمقدار 0.03 دالتون عن الكتلة المرصودة. لوحظ أيضا نفس النوع المؤين بالبوتاسيوم عند 2086.49.

تدل الذروة الصغيرة عند 2167.58 على نفس الشوائب من بدء المياه التي لوحظت في مادة البداية. لا يحدث نفس التحول في الكتلة الذي لوحظ لمنتجات تفاعل الثيول ene ، مما يشير إلى أن هذا المركب النهائي من حمض الكربوكسيل يفتقر إلى مجموعة نهاية الثيول للخضوع لتفاعل الوظيفية. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحسين إعداد العينة ومعلمات الحصول على البيانات ، بالإضافة إلى تحليل البيانات التي تم إنشاؤها بواسطة توصيف قياس الطيف الكتلي MALDI-TOF للبوليمرات.