نموذج أرنب التعبير التحوير دائم في الوريد للشريان السباتي المشترك فاصلة الطعوم

يمكن لهذه الطريقة الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول التسبب في فشل الكسب غير المشروع الوريدي. على سبيل المثال ، يمكنه تحديد وسطاء فشل الكسب غير المشروع واختبار الاستراتيجيات التي تهدف إلى منع فشل الكسب غير المشروع. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي قدرتها على تحقيق تعبير دائم ومستقر للجينات المعدلة وراثيا في بطانة الطعم الوريدي.

بعد تخدير الأرنب وفقا لبروتوكول النص ، احلق من الشق القصي إلى حافة الفك السفلي. عند الانتهاء من الإعداد الجراحي ، استخدم الكي الكهربائي لقطع الجلد على طول خط الوسط بين الشق القصي والفك السفلي ، بطول حوالي سبعة إلى تسعة سنتيمترات. ثم قم بإرفاق مشابك المناشف لفتح الشق.

تشريح بصراحة تحت اللفافة على طول خط الوسط بأكمله. ثم استخدم الكي الكهربائي لقطع الطبقة اللفافية المقطعة على طول خط الوسط. بعد ذلك ، بدءا من الجانب الأيمن ، قم بالتشريح بين العضلة اللامية القصية التي تغطي القصبة الهوائية والعضلة القصية لكشف الشريان السباتي المشترك.

ثم قم بتشريح جزء من أربعة إلى خمسة سنتيمترات من الشريان السباتي المشترك وفروعه الأكبر الخالية من الأنسجة المحيطة. استخدم 5-0 خيوط حريرية لربط الفروع الكبيرة للشريان السباتي المشترك قبل قطع كل فرع بعيد عن الخياطة. بعد تكرار التشريح على الشريان السباتي المشترك الأيسر ، استخدم ملقط الأنسجة لإغلاق طبقة الأنسجة تحت الجلد مؤقتا.

ثم قم بتشريح اللفافة السطحية من الجلد على الجانب الأيمن حتى ينكشف الوريد الوداجي الخارجي. قم بتشريح جزء من أربعة إلى خمسة سنتيمترات من الوريد الوداجي الخارجي وحرر فروعه من الأنسجة المحيطة. استخدم 5-0 خيوط حريرية لربط الفروع ، ثم قطع الفروع.

بعد ذلك ، قم بربط الوريد المعزول من كلا الطرفين ، وقطع نهاية الجمجمة ، وغسل التجويف بمحلول ملحي هيبارين. لإجراء تطعيم الوريد ، استخدم مشبك الأوعية الدموية لتثبيت الشريان السباتي المشترك الأيمن في نهاية الجمجمة للجزء المعزول. ثم ضع مشبك الأوعية الدموية على الطرف الذيلي.

الآن قم بإجراء بضع الشرايين الذيلية فقط في الجمجمة إلى المشبك الذيلي الذي يساوي في الطول قطر نهاية الجمجمة لجزء الوريد. ثم أدخل قسطرة وريدية متصلة بحقنة من المحلول الملحي العادي الهباريني من خلال بضع الشرايين الذيلية وقم بغسل تجويف الشريان السباتي. سيخرج السائل عن طريق بضع الشرايين.

بالعودة إلى الوريد الوداجي ، قم باستئصال الوريد وضعه بجوار الشريان الوداجي. باستخدام غرز مفردة من 7-0 مادة البولي بروبيلين ، قم بخياطة الطرف الذيلي لبضع الشرايين الذيلية إلى الطرف الجمجمي لجزء الوريد. ثم ضع غرزة ثانية 180 درجة من الغرزة الأولى لخياطة حافة الجمجمة لبضع الشرايين الذيلية إلى نهاية الجمجمة لجزء الوريد.

ضع غرزة ثالثة على مسافة متساوية من أول غرزتين على الجانب الجانبي من مفاغرة. ثم ضع غرزة رابعة على الجانب الإنسي من مفاغرة على مسافة متساوية من أول غرزتين وعبر الغرزة الثالثة. ضع أربع غرز إضافية بين كل غرز من واحدة إلى أربعة.

قم بإجراء بضع الشرايين القحفية على الجانب الذيلي من المشبك البعيد. يجب أن تكون المسافة بين الطرف القحفي لبضع الشرايين القحفي والنهاية الذيلية لبضع الشرايين الذيلية هي نفس طول الجزء الوريدي. طول بضع الشرايين القحفي يساوي قطر الطرف الذيلي لجزء الوريد.

مع تمديد الوريد في الجمجمة من مفاغرة على طول الشريان السباتي ، تأكد من عدم التواء الوريد. ثم استخدم المحلول الملحي العادي الهيباريني لطرد الشريان السباتي والوريد عن طريق بضع الشرايين القحفية. بعد ذلك ، ضع غرزة أولى لخياطة الطرف الذيلي لبضع الشرايين القحفي إلى الطرف الذيلي لجزء الوريد.

ثم ضع غرزة ثانية 180 درجة من الغرزة الأولى لخياطة حافة الجمجمة لبضع الشرايين القحفي إلى الطرف الذيلي لجزء الوريد. أكمل مفاغرة كما هو موضح سابقا في الفيديو. حرر مشبك الجمجمة مؤقتا للسماح للطعم الوريدي بالامتلاء بالدم واضغط برفق بشاش جاف لوقف أي نزيف.

كرر هذه الخطوة حتى يتوقف المفاغرة عن النزيف. ثم قم بإزالة كل من مشابك الجمجمة والذيلية. استخدم الشاش لوقف أي نزيف إضافي في مفاغرة.

استخدم خياطة حريرية 3-0 لربط طرفي جزء الشريان السباتي المشترك بين مفاغرة. ثم قسم الشريان السباتي في منتصف الطريق بين الأربطة. يجب رؤية النبضات السريعة في الطعم الوريدي.

كرر وضع طعم الوريد على الجانب الأيسر. باستخدام خياطة 5-0 PGA ، أغلق الأنسجة تحت الجلد بنمط مستمر. ثم استخدم خياطة 3-0 PGA لإغلاق الجلد بنمط داخل الأدمة ودفن العقد على كلا الطرفين.

إجراء رعاية ما بعد الجراحة والموجات فوق الصوتية عبر الجلد وفقا لبروتوكول النص. لإجراء جراحة نقل الجينات ، قم بعزل طعم الوريد الأيمن بعناية بما في ذلك 1.5 إلى سنتيمترين من الشريان السباتي المجاور للطعم على جانبي الجمجمة والذيلية. كرر التشريح على الجانب الأيسر بنفس الطريقة.

استخدم المحلول الملحي العادي لملء تجويف الجرح الجراحي على الجانب الأيمن لتمكين انتقال الموجات الصوتية. قم بتوصيل مسبار التدفق المحيط بالأوعية الدموية بطول ملليمترين بمقياس تدفق الحجم واغمر المسبار في المحلول الملحي في تجويف الجرح. اضبط معدل التدفق على الصفر.

ضع مسبار التدفق حول الشريان السباتي إما الذيلية أو الجمجمة في الطعم الوريدي. ثم استخدم نظاما إلكترونيا للحصول على البيانات لتسجيل البيانات من مسبار التدفق. بعد حقن الهيبارين في الأرنب عبر القسطرة الوريدية وغسلها بالمحلول الملحي ، استخدم مشبك الأوعية الدموية لتثبيت الشريان السباتي المشترك في نهاية الجمجمة من الطعم الوريدي.

ثم ضع مقطعا ثانيا على الشريان السباتي حوالي 10 ملليمترات الذيلية على مفاغرة الذيلية لترك مساحة لبضع الشرايين. ثم ضع ربطتين من الحرير بشكل فضفاض حول الشريان السباتي فقط الذيلية في الطعم الوريدي. بعد ذلك ، باستخدام إبرة مثنية معدة مسبقا بمقياس 21 ، قم بثقب الذيلية السباتية إلى الكسب غير المشروع والجمجمة فقط إلى مشبك الأوعية الدموية الذيلية.

ادفع الإبرة إلى التجويف ذهابا وإيابا مرتين للتأكد من أن التجويف واضح. ثم اسحب الإبرة بعناية. بعد تحضير حقنة وقسطرة وريدية مع DMEM وفقا لبروتوكول النص ، أدخلها في بضع الشرايين السباتية الشائعة حتى نقطة الانحناء واغسل تجويف الطعم الوريدي عن طريق ملئه ب 0.5 مل من DMEM مرتين.

قم بإزالة DMEM من الكسب غير المشروع باستخدام إصبع يرتدي قفازا للضغط برفق في نهاية الجمجمة من الكسب غير المشروع. ثم حرك الإصبع بحذر على طول الكسب غير المشروع باتجاه الطرف الذيلي للطعم لطرد المحتويات اللمعية عن طريق بضع الشرايين. قم بإزالة حقنة DMEM من القسطرة تاركة القسطرة في الوعاء.

قم بتوصيل المحقنة التي تحتوي على محلول الفيروس مع التأكد من عدم دخول الهواء إلى القسطرة. حرك الأربطة الحريرية المعقدة بشكل فضفاض أسفل الشريان حتى تكون حول طرف القسطرة ولكن لا تشد عليها. قم بنقع 0.03 مل من محلول الفيروسات لإخراج DMEM المتبقي من القسطرة.

ثم باستخدام إصبع ، قم بإزالة كل السوائل من تجويف الطعم الوريدي بالضغط برفق من الجمجمة إلى الذيلية. شد العلاقتين حول الشريان وطرف القسطرة لإغلاق التجويف. ثم قم بغرس محلول الفيروس حتى ينتفخ الوريد.

ضع المحقنة برفق على عش من الشاش. بعد 20 دقيقة ، استخدم حقنة فارغة لشفط المحلول المحتوي على الفيروس برفق من الكسب غير المشروع حتى ينهار الوعاء. قم بإزالة المحقنة مع ترك القسطرة في مكانها.

ثم قم بقص وفك خيوط الحرير واسحب القسطرة من الوعاء. استخدم الآن خياطة 7-0 من مادة البولي بروبلين بنمط X لإغلاق بضع الشرايين. ثم اسحب نهايات الخيط برفق واربطها معا بعقدتين مربعتين.

بعد استعادة تدفق الدم في طعم الوريد الأيمن كما هو موضح في البروتوكول النصي ، كرر تسريب الفيروس على الجانب الأيسر. لحصاد الطعوم المنقولة ، قم بتشريح الترقيع الوريدي والشرايين السباتية الشائعة وقم بإجراء قياسات التدفق على الجانبين الأيسر والأيمن كما هو موضح سابقا. استخدم خياطة حريرية 3-0 لربط قحفة الشريان السباتي المشترك الأيمن بالطعم.

ثم استخدم خياطة حريرية 3-0 لربط الذيلية السباتية بالكسب غير المشروع. استئصال طعم الوريد الأيمن عن طريق تقسيم الشريان السباتي المجاور بين كل من الأربطة ومفاغرة الوريد المجاورة. ثم قم بإزالة طعم الوريد من الأرنب واستخدم المحلول الملحي لشطف التجويف.

المعلم الأول الذي يجب أن يحققه المشغل الجديد هو سالكية تطعيم الوريد المتسقة بعد كل من جراحة تطعيم الوريد الأولية وجراحة التنبيغ المتأخرة اللاحقة. عندما يكون طعم الوريد حاصلا على براءة اختراع ، سيكشف الفحص بالموجات فوق الصوتية عن وعاء دموي كبير مع ذيلية سريعة لتدفق الدم في الجمجمة. تم حصاد الطعوم بعد ثلاثة أيام من التنبيغ ، وتقطيعها إلى أقسام وتلطيخها ب X-gal.

أظهر التصوير الداخلي للأسطح اللمعية ترقيع وريدي مع نقل فعال ونقل ضعيف. كما هو موضح في هذا المخطط ، فإن مستويات بيتا جالاكتوزيداز mRNA في الطعوم الوريدية التي تم نقلها بواسطة المشغل الجديد ، لم تختلف اختلافا كبيرا عن مستويات بيتا جالاكتوزيداز mRNA في الطعوم الوريدية التي تم نقلها بواسطة مشغل متمرس. عند تنفيذ هذا البروتوكول ، من المهم أن تتذكر عكس الطعم الوريدي في الجمجمة إلى الذيلية قبل الإصابة بمفاغرة.

هذا ضروري لتجنب إعاقة تدفق الدم بواسطة البلعة الوريدية. بمجرد إتقان هذه العمليات الجراحية ، يمكن إكمالها في حوالي ثلاث ساعات لإجراء تطعيم الوريد ، وساعتين لإجراء نقل جين الترقيع الوريدي و 45 دقيقة لإجراء الحصاد. لا تنس أنه نظرا لأن هذا البروتوكول يتطلب العمل مع النواقل الفيروسية والأشياء الحادة ، يجب اتباع إجراءات السلامة الحيوية والأدوات الحادة المناسبة.