في Ovo نموذجية لاختبار مركبات الأنسولين ميميتيك

العام لنموذج جنين الكتاكيت المعدل المقدم هو توصيف المواد ذات الخصائص المقلدة للأنسولين في الكائن الحي. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث مرضى السكر مثل العثور على مستخلصات عشبية ذات خصائص محاكي الأنسولين تقلل من مستويات الجلوكوز في الدم دون آثار جانبية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن اختبار فعالية المركبات في كائن حي بمعدلات إنتاجية كافية ، وأن الإذن من لجنة الأخلاقيات ليس ضروريا.

العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم خطوات التحضير والقطع ، لأن الأوعية لا يتم تحضيرها بسهولة ، أو غالبا ما يتم قطعها تماما وتضيع. افحص البويضات بحثا عن الإخصاب بعد الحضانة عند 38 درجة مئوية بمتوسط رطوبة يتراوح بين 40 و 60 بالمائة لمدة تصل إلى 11 يوما. للقيام بذلك ، قم بغمس هامش مصباح الشمعين في وسادة حبر ، ثم قم بشمعة الجانب المدبب من البيضة.

لتحديد المثانة الهوائية ، تحقق من الاختلافات في السطوع في الجزء العلوي من البيضة. تظهر المثانة الهوائية كمنطقة مستديرة وأكثر شفافية ، بينما يبدو الألبومين أغمق. حدد موقع المثانة الهوائية عن طريق الضغط على المصباح قليلا على البيضة بالحبر المطبق مسبقا.

استبعاد البويضات غير المخصبة ، والتي لا تظهر فرقا في السطوع بين الألبومين والمثانة الهوائية. تحضير الأنسولين المقلد ، أو الأنسولين ، عن طريق التخفيف إلى التركيز المطلوب في محلول الملح المتوازن من هانك. لتطبيق المركب المحدد ، استخدم زوجا مدببا من الملقط لنقر قشر البيض بعناية في المنطقة المحددة من المثانة الهوائية لتشكيل ثقب يساوي قطر حقنة الإبرة.

استخدم حقنة معقمة سعة ملليلتر واحد لحقن 300 ميكرولتر من المحلول العازل الذي يحتوي على المادة ذات الاهتمام. لتحديد تأثير تقليل نسبة الجلوكوز في الدم لمادة ما ، ضع البيض مرة أخرى في الحاضنة وقم بقياس نسبة الجلوكوز في الدم بعد 60 و 120 و 180 دقيقة. في الوقت المناسب ، قم بإزالة قشر البيض بعناية فوق المثانة الهوائية وقم بموازنة غشاء قشر البيض عن طريق إضافة ما يكفي من PBS المخزن المؤقت لتغطية الغشاء بأكمله.

بعد سكب PBS الزائد ، استخدم زوجا مدببا من الملقط لسحب غشاء قشر البيض بعناية. استخدم مقصا صغيرا لقطع وإزالة الغشاء المشيمي مع تجنب أي أوعية كبيرة في الغشاء. حدد موقع الوعاء الكبير المنشأ من بطن الجنين.

ارفع هذا الوعاء من الألبومين بمقص صغير مغلق وضعه على شريط بلاستيكي من الأس الهيدروجيني. حرك شريط الأس الهيدروجيني أسفل الوعاء واسحب المقص الدقيق للخلف بعناية. من الضروري تحضير الأوعية الدموية الكبيرة التي تنشأ من البطن ، حيث قد تمزق الأوعية الأصغر مما يجعل جمع الدم مستحيلا.

قم بإزالة أي سائل يحيط بالوعاء باستخدام ماصة لتجنب تخفيف الدم. ثم استخدم ورق الترشيح لتجفيف الوعاء وشريط الأس الهيدروجيني. لجمع الدم ، من المهم عدم قطع الوعاء تماما لأنه سيضيع.

بعد ذلك ، استخدم مقصا صغيرا لقطع الأوعية الدموية بعناية على جانب واحد. لا تقطع أكثر من منتصف الوعاء لتجنب قطع الوعاء تماما. اجمع الدم المتسرب على شريط الأس الهيدروجيني باستخدام ماصة.

مطلوب 10 ميكرولتر من الدم لتحديد مستويات الجلوكوز باستخدام جهاز قياس جلوكوز الدم. بعد تطبيق المركب المحدد لمدة 24 ساعة ، قم بموازنة غشاء قشر البيض مع PBS كما كان من قبل لمدة 30 ثانية على الأقل. قم بإزالة المخزن المؤقت PBS الزائد عن طريق سكبه بعيدا.

ثم اسحب غشاء قشر البيض بعناية باستخدام زوج مدبب من الملقط. افحص الأوعية الدموية بحثا عن الآفات ، وتأكد من الحيوية من خلال مراقبة حركة جنين الكتكوت. تم استخدام مقتطفات محضرة من combretum indicum ، أو زاحف رانغون ، ومستخلص غير معلن عنه المسمى 0845 لهذه التجارب.

كما هو موضح في هذا الشكل ، فإن المستخلص من زاحف رانغون لم ينتج عنه انخفاض كبير في نسبة الجلوكوز في الدم في البيض. ومع ذلك ، تم تقليل تركيز الجلوكوز في الدم بنجاح باستخدام المستخلص 0845 مع تأثير كبير لوحظ عندما تم إطالة وقت الحضانة. بالمقارنة مع البيض غير المعالج ، أدى علاج البيض بمستخلص عشبي سام في اليوم 10 لمدة 24 ساعة إلى آفات شديدة في الأوعية الدموية في الغشاء المشيمي.

كانت الآفات واضحة أيضا على الجنين المعالج مقارنة بالسيطرة الطبيعية. بمجرد إتقانها ، يمكن تحليل بيضتين لمستويات الجلوكوز والسمية في خمس دقائق إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير الأوعية الدموية وجمع الدم في نموذج جنين الدجاج لقياس تأثيرات تقليل نسبة الجلوكوز في الدم للمركبات الطبيعية أو الاصطناعية.