نموذج أورثوتوبيك طرحه ونيون مورين سينجينيك المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا

والهدف من هذا البروتوكول لإثبات حقن خلايا سرطان البروستاتا، مع عملية الاخصاء اللاحقة داخل البروستاتا. نماذج أورثوتوبيك قبل الإكلينيكية المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا بالغة الأهمية لدراسة المرض في سياق ذات صلة سريرياً وورم المكروية ومضيف الأشخاص.

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء حقن داخل البروستاتا لخلايا سرطان الفئران للحث على تكوين أورام تقويم العظام الزاهرية التي يمكنها نمذجة سرطان البروستاتا المعتمد على الأندروجين والمقاوم للإخصاء. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان البروستاتا، مثل ما الذي يدفع تطور سرطان البروستاتا وما هي العلاجات التي تعمل بشكل أفضل في القضاء على هذه الأورام. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أن أورام تقويم العظام أكثر تعقيدا من الناحية الوراثية ، وتتطور في بيئة مكروية للورم ممثلة سريريا ، ويمكن تعديلها وراثيا قبل الحقن.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو علاج سرطان البروستاتا البشري حيث تستجيب أورام تقويم العظام للعلاجات بطريقة مماثلة لتلك التي لوحظت في المرضى من البشر. بعد التأكد من عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم ، ضع مرهما على عيون الفأر واحلق كل الفراء من بطن. عقم الجلد المكشوف بثلاث جولات من المقشر الجراحي باستخدام ضمادات معقمة غير ملتصقة متبوعة بمناديل كحولية معقمة.

عندما يجف الجلد ، ضع الفأر في وضع ضعيف على سطح نظيف فوق وسادة تدفئة مباشرة تحت هدف المجهر الجراحي النظيف. وقم بتغطية بستارة معقمة مع ثقب صغير مقطوع فوق البطن. قم بعمل شق بطول سنتيمتر واحد في الجلد الخارجي وعضلات البطن الداخلية على طول خط الوسط للبطن متفوقا على القضيب والغدد الحاملة.

حدد موقع إحدى الحويصلات المنوية الثنائية وفصوص البروستاتا الأمامية المرفقة التي عادة ما تكون خلفية وجانبية ومتفوقة قليلا على المثانة اطلب من أحد المساعدين مزج محلول الخلايا السرطانية MIC-CAP Matrigel مع ماصة لطيفة وشفط 30 ميكرولترا من الخلايا ببطء في إبرة قياس 28 متصلة بحقنة سعة 50 ميكرولترا. بعد ذلك ، باستخدام ملقط الأنسجة Graefe ، ارفع طرف حويصلة منوية واحدة برفق لخلق توتر على الأنسجة دون ثقب الحويصلة وأدخل شطبة الإبرة بعناية موازية للمحور الطويل لفص البروستاتا الأمامي. قم بحقن الحجم الكامل للخلايا ببطء في الفص متبوعا بالتراجع البطيء للإبرة لمنع التسرب.

سيظهر الحقن الناجح من خلال احتقان فص البروستاتا الأمامي. حافظ بعناية وثبات على الحويصلة المنوية وفص البروستاتا المحقون خارج الفأر لمدة 30 ثانية تقريبا للسماح ل Matrigel بالتصلب جزئيا داخل الفص. استخدم قضيبا معقما برأس بوليستر لجمع أي تسرب لمحلول الخلية في البطن لمنع تطور الورم غير المتقويم.

الحقن الدقيق داخل الأطراف الاصطناعية أمرا بالغ الأهمية لتطور الورم غير التقويمي. إن الحرص الشديد على تجنب ثقب الحويصلة المنوية ، وحقن تعليق الخلايا السرطانية ببطء وجمع أي تسرب للخلايا سيزيد من نجاح هذا الإجراء. الآن ، أعد الحويصلة المنوية والفص المحقون برفق إلى البطن دون الضغط على الفص واستبدل أي أنسجة خارجية.

باستخدام خيوط إبرة القطع العكسي القابلة للامتصاص 5-0 فيكريل ، أغلق عضلات البطن الداخلية بغرز مستمرة متبوعة بإغلاق جلد البطن الخارجي بغرز متقطعة باستخدام خيوط إبرة قطع عكسية غير قابلة للامتصاص 4-0 من النايلون. بعد ذلك ، قم بإدارة تسكين ما بعد الجراحة وضع الفأر في قفص بدون فراش في منتصف الطريق على وسادة تدفئة مع المراقبة حتى الشفاء التام. يسمح التعدي المستقر لخلايا Myc-CaP للوسيفيراز اليراع وتعبير mCherry باتباع أورام البروستاتا من قبل التلألؤ الحيوي غير الغازي في الجسم الحي والتألق.

هنا ، يتم عرض الأورام التمثيلية التي تم تشريحها من البطن في اليوم 30 بعد الحقن داخل البروستاتا. باستخدام التقنية المناسبة ، يمكن تسجيل حجم الورم ووزنه بخطأ معياري صغير نسبيا ، على الرغم من توقع بعض التباين بين كتل الورم الصغيرة والكبيرة. يمكن أيضا تحليل خلايا سرطان الفئران المحقونة داخل البروستاتا عن طريق الكيمياء المناعية لوجود خلايا تائية إيجابية CD3 متسللة للورم أو خلايا مناعية أخرى ذات أهمية.

علاوة على ذلك ، يوفر هذا النموذج نقطة نهاية موضوعية للبقاء على قيد الحياة حيث أن كتلة الورم الأولية الكبيرة تسبب استسقاء البطن النزفي و / أو انخفاض الاستمالة المتنقلة و / أو الانتصاب. يؤدي الإخصاء بعد ثلاثة أيام من الحقن داخل البروستاتا إلى انحدار قوي للورم متبوعا بتكرار الورم في نهاية المطاف بعد حوالي 30 يوما يمثل سرطان البروستاتا المقاوم للإخصاء. يكشف التشريح والتحليل النسيجي لأورام سرطان البروستاتا المقاومة للإخصاء عن عدم وجود تمايز في الغدد الصم العصبية حيث تحافظ الأورام على مستويات عالية من مستقبلات الأندروجين وتكون سلبية لعلامة الغدد الصم العصبية synaptophysin.

بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في غضون 20 إلى 30 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إعطاء المسكنات قبل الجراحة وبعدها وإجراء جميع العمليات الجراحية باستخدام تقنية معقمة وبمساعدة مساعد جراحي. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الكيمياء المناعية وقياس التدفق الخلوي وتقييم حجم الورم ووزنه وبقاء للإجابة على أسئلة إضافية حول الاستجابات للعلاجات المناعية والعلاجات التجريبية الأخرى.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية حقن خلايا سرطان البروستاتا في فص البروستاتا الأمامي للفئران من أجل الإخصاء الجراحي في نهاية المطاف وتحليل انحدار الورم وتكراره. لا تنس أن العمل مع الخلايا السرطانية يمكن أن يكون خطيرا للغاية وهناك احتياطات مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية الصحيحة التي يجب دائما اتخاذها أثناء تنفيذ هذا الإجراء.