ظهرت مفصص الجزئي: نموذج جراحية لتجديد الكبد مورفولوجك

الهدف العام من هذا الإجراء الجراحي هو تحفيز تجديد الكبد المورفولوجي عن طريق استئصال الكبد الفصيصي الجزئي. يمكن لهذه الطريقة الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات بيولوجيا الخلايا الجذعية والطب التجديدي حول تجديد الكبد المورفولوجي والخلايا الجذعية الخاصة بالكبد. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها طفيفة التوغل ولا تتطلب إهانات كيميائية أو كي.

قبل لمس ، افركي الفراش من قفص الأم على القفازات. ثم انقل جميع الجراء وبعض الفراش من قفص الأم إلى قفص فارغ فوق وسادة تدفئة. بعد ذلك ، ضع جروا تحت مجهر تشريح.

بعد التأكد من المستوى المناسب من التخدير بسبب عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم ، استخدم وسادة شاش صغيرة لتطهير جدار البطن الخلفي للحيوان بالبيتادين. استخدم مقص التشريح الدقيق والملقط لعمل شق نصف سنتيمتر يسار أسفل القفص الصدري مباشرة. استخدم الملقط لفصل الجلد برفق.

ثم قم بعمل شق أعمق ثان في التجويف البريتوني واستخدم الحافة الخلفية الحادة لمقص التشريح الدقيق والملقط لتطبيق ضغط جانبي لطيف على جانبي البطن ، مما يجبر قمة الفص الأيسر على الخروج من التجويف البريتوني. عندما تكون القمة اليسرى للفص الأيسر مرئية ، قم ببتر الكمية التجريبية المناسبة من الأنسجة من الفص وضع الأنسجة في أنبوب 1.5 مليلتر من PBS على الجليد. باستخدام قطعة ملفوفة من الشاش ، أعد الفص الأيسر برفق إلى التجويف البريتوني.

قم بإزالة الشاش عند توقف النزيف وبلل موقع الجراحة والمنطقة المحيطة بها بشاش مبلل ب PBS. أغلق موقع الجراحة بالخيوط الجراحية وغرزة جارية. ثم قم بلف شاش مبلل ببرنامج تلفزيوني برفق ولكن جيدا على موقع الجرو والجرح لضمان عدم وجود دم أو بيتاتين.

اسمح للجرو بالتعافي بالقرب من ضمادات الشاش المعرضة لبراز الأم وبولها. عندما يتم تقطيع جميع الجراء إلى الكبد ، أعد جميع والفراش إلى قفص الأم. بعد وزن الفصوص ، قم بإصلاح عينات الأنسجة في 2٪ بارافورمالدهيد لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.

في نهاية التثبيت ، انقل الأنسجة إلى قوالب تجميد فردية تحتوي على وسط درجة حرارة القطع الأمثل للتجميد فوق الثلج الجاف. واحصل على أقسام 7-10 ميكرومتر من كل فص باستخدام أي نابردات منعدة قياسية. افحص الجراء يوميا لمدة 56 يوما على الأقل للتأكد من أن جروحهم لا تزال مغلقة وحقن التسكين بعد 24 و 48 ساعة من الجراحة.

في نقطة النهاية التجريبية المناسبة ، قم بحصاد ووزن الكبد من كل جرو على كتلة. ثم افصل بعناية كل فص فردي عند ارتباطه القريب وقارن كتلة الفص الأيسر المبتور بكتلة الكبد بأكمله لتحديد مدى التجدد في كل فص. يمكن ملاحظة التجديد الدقيق للفص الأيسر بعد 7-14 يوما من الجراحة وغالبا ما يتم ملاحظة التجدد الكامل بعد 56 يوما.

مع عدم وجود فرق كبير في مناطق خلايا الكبد في الكبد المتجدد الذي كشف عنه التحليل النسيجي. علاوة على ذلك ، تشير حقن الفئران حديثي الولادة باستخدام EdU إلى زيادة كبيرة في عدد الخلايا المتكاثرة في الفص الأيسر المتجدد المصاب مقارنة بالضوابط غير المصابة مما يشير إلى أن تكاثر الخلايا يساهم في تجديد الفص الأيسر عند حديثي الولادة. ومع ذلك ، فإن استئصال الكبد في اليوم 14 بعد الولادة ، تؤدي الفئران الصغيرة إلى انخفاض التجدد في الفص الأيسر مع زيادة التعويض من الفصوص غير المصابة.

مشيرا إلى أنه بحلول 14 يوما تتحول استجابة الإصابة للاستئصال الحاد من تجديد الفص المحدد إلى التعويض العالمي. بمجرد إتقان هذه التقنية ، يمكن إكمال هذه التقنية في غضون 15 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم توخي الحذر قدر الإمكان حتى لا تسبب ضغطا إضافيا للأم أو الجراء.

بعد هذا الإجراء ، يمكن القيام بطرق أخرى مثل الكبد الكبد التسلسلي أو إصابات الكبد المزمنة لتقييم إمكانات التجدد في الكبد. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال بيولوجيا الخلايا الجذعية لاستكشاف تجديد الكبد في فأر حديثي الولادة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إكمال بتر محدد للفص في كبد الفأر حديثي الولادة.

لا تنس أن العمل مع الأيزوفلوران أمر خطير للغاية ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل قناع الوجه والقفازات عند تنفيذ هذا الإجراء.