نيوفاسكولاريزيشن آيريس المستحثة بثقب كنموذج الفأر من إيريديس روبيوسيس

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحفيز الأوعية الدموية للقزحية ، مما يسمح بالتصور المباشر في الجسم الحي لعمليات توليد الأوعية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال طب العيون ، خاصة في أمراض الأوعية الدموية الجديدة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تستخدم الفئران البيضاء للسماح بتوجيه تصور الجسم الحي للأوعية الدموية.

من خلال هذه الطريقة يمكن أن تعطي نظرة ثاقبة لأمراض الأوعية الدموية العينية. يمكن أيضا تطبيقه كنموذج عام لتكوين الأوعية الدموية ، مثل اختبار علاجات جديدة لتولد الأوعية. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية ، حيث أن تشريح القزحية يمثل تحديا بسبب صغر حجم عين الفأر.

ذلك ، مع الممارسة ، يمكن إتقانه. بعد تخدير فأر P12.5 وإعداده للإجراء ، ضعه في وضع الاستلقاء الجانبي تحت مجسم وتأكد من أن القناع في وضع جيد. يجب أن تملأ العين مجال الرؤية.

التركيز الواضح للعين أمر حتمي. بعد ذلك ، باستخدام ملقط ربط صغير في اليد غير المهيمنة ، تبرز العين بعناية عن طريق الضغط لأسفل على الجفون والظهرية والبطنية للعين. يساعد الحفاظ على قبضة قوية على الجفن.

قبل المتابعة ، قم بتوثيق الأوعية الدموية بالصورة عند 40X. بعد ذلك ، استخدم المجسم لتحديد موقع طيف القرنية. يمكن التعرف بسهولة على طيفي الفئران البيضاء BALB / c على أنه الضفيرة الوعائية الدائرية الخلفية للقرنية.

الآن ، في اليد المهيمنة ، أمسك إبرة مشطوفة قياس 30 واستخدمها لإجراء ثقب عنبي صغير بالقرب من الحد القزوي الخلفي للعنبية بين الجسم الهدبي وأورا سيراتا. قم بعمل الثقب باستخدام طرف الإبرة فقط وليس أكثر من نصف الشطبة. تجنب تمزق العدسة.

يجب أن يكون الثقب ذاتي الغلق ولكن لا يزال يسمح بالحقن داخل العين لمواد الدراسة من خلال الجرح. بعد ذلك ، قم بإجراء ثقب عنبي ثان في الموقع المقابل للعين. قم بتحسين الثقوب لتكون في أكثر المواضع الظهرية والبطنية.

كرر الثقوب العنبية في نفس الموضعين كل أربعة أيام حتى P24.5. وقبل تكرار الثقب ، تحقق دائما من إعتام عدسة العين الرضحي. بعد استئصال العين وإصلاحها كما هو موضح في بروتوكول النص ، قم بإزالة محلول التثبيت واشطف العين ثلاث مرات باستخدام PBS الجديد.

ثم ضع العين على سطح أملس وجاف مع الغرفة الأمامية لأعلى. بعد ذلك ، أدخل إبرة مشطوفة قياس 30 خلف الطرف لعمل نقطة دخول. بعد ذلك ، قم بتأمين الجزء الأمامي بملقط ربط صغير واستخدم مقص Clayman-Vannas المستقيم لقطع حول الأطراف أثناء تدوير العين.

يمكن أن يؤدي استخدام التخفيضات الجزئية إلى تسهيل العملية. عند الانتهاء ، يجب تحرير الجزء الخلفي من العين. بعد ذلك ، ضع الجزء الأمامي لأسفل لكشف العدسة.

قم بإزالة العدسة بعناية عن طريق الإمساك بها بملقط صغير وسحبها لأعلى. الآن ، ضع الجزء الأمامي بحيث تكون القرنية متجهة لأسفل ومع القطع بشكل عمودي على مجال الرؤية. بعد ذلك ، أمسك الأنسجة الخلفية للجسم الهدبي برفق باستخدام ملقط ربط صغير في اليد غير المهيمنة.

مقص مستقيم من Clayman-Vannas لتقليم الجزء الأمامي من الجسم الهدبي بهدف إزالة الشبكة التربيقية وعزل القزحية. يجب أن تتحرك القزحية بعد ذلك داخل القرنية. بعد ذلك ، استخدم ملقط ربط صغير لإمساك القرنية ونقل كوب العين الأمامي بعناية إلى صفيحة مكونة من 96 بئرا تحتوي على 200 ميكرولتر من PBS.

حافظ على قبضة القرنية واستمر في تشريح القزحية عن طريق شطف الأنسجة باستخدام PBS. إذا لزم الأمر ، يمكن استخدام إبرة قياس 30 للمساعدة في إزاحة القزحية. الآن ، قم بإزالة القرنية باستخدام ملقط الربط الصغير.

يمكن بعد ذلك تخزين القزحية المعزولة في PBS عند أربع درجات مئوية مؤقتا حتى يتم تجربتها. تعرضت الفئران ألبينو BALB / c في P12.5 لثقوب عنبية تتكرر كل أربعة أيام حتى P24.5 ، كما هو موضح. نظرا لشفافية القرنية ونقص الميلانين في الفئران BALB / c ، فإن الأوعية الدموية للقزحية مرئية بسهولة في صغار P16.5 وتكثف طوال مدة البروتوكول.

في P27.5 ، تم قتل الفئران وتشريح قزحية العين بعناية. تسببت الثقوب في استجابة وعائية من القزحية عن طريق تحفيز نظام التئام الجروح. تم إجراء الكيمياء المناعية ضد PECAM1.

أظهرت البقعة الناتجة زيادة في الأوعية الدموية الكلية في قزحية العين المثقوبة مقارنة بالضوابط. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحفيز تكوين الأوعية الدموية للقزحية وعزل قزحية الفأر بنجاح. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل QBCR من أجل الإجابة على أسئلة جزيئية وخلوية إضافية مثل اختبار فعالية المواد المؤيدة لتولد الأوعية الدموية أو المضادة للأوعية.

بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين لاستكشاف أمراض الأوعية الدموية الجديدة من خلال طرق في الجسم الحي وغير الغازية باستخدام القوارض الصغيرة كنموذج.