Name: تقييم الليزوزومية الغدق في الأمعاء ومن يعيش ايليجانس كاينورهابديتيس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-13T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: اكتشف تقييم فقدان حموضة الليزوزومات في أمعاء C. elegans باستخدام صبغة cDCFDA الحساسة للرقم الهيدروجيني. هذه الطريقة البسيطة والاقتصادية تساعد الباحثين على دراسة وظائف الليزوزوم والتلاعم الذاتي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نود أن نشكر مركز علم الوراثة كاينورهابديتيس السلالات، والعلوم الطبيعية ومجلس البحوث الهندسية (مقدمة)، والمؤسسة الكندية للابتكار (CFI) للتمويل. ونود أن نشكر الدكتور تشين ليزين (إدارة أنظمة الخلية والتشريح، UT الصحة سان أنطونيو) للسماح بالاستخدام غير المقيد لها مرافق مختبر لجميع التجارب التي C. ايليجانس ، فضلا عن الدكتور وانغ اكسينج (المدير المعاون، مرفق التصوير الضوئي ، UT الصحة سان أنطونيو) للحصول على المساعدة مع الفحص المجهري [كنفوكل]. ونود أيضا أن نشكر الدكتور مايرون إغناطيوس لتقديم الدعم والتشجيع لتسهيل تصوير فيديو.

1-وصمة عار والصورة lysosomes المعوية
<ol><li>لوحات البذور وسائط النمو السلكية (NGM) مع OP50
	<ol>
<li>إعداد لوحات NGM وفقا للبروتوكول الموصى بها19 والسماح لوحات مغلقة لتجف لمدة يومين في درجة حرارة الغرفة.</li>
		<li>تلقيح البكتيريا OP50 إلى مرق مرق لوريا (رطل) عقيمة وتنمو في حمام حاضنة أو الماء تهتز عند 37 درجة مئوية لمدة 36 ح أو حتى التوجيه التشغيلي بين 0.2 و 0.4. تجنب استخدام ثقافة بكتيرية مع OD > 1 أو OD < 0.2.</li>
		<li>مجرد لوحات NGM جافة، ضع قطره (~ 30 ميليلتر) من العدوى OP50 في وسط اللوحة ومن ثم امتد الانخفاض إلى تصحيح تقريبا التي 2 سم × 2 سم في الحجم. ملاحظة: يمكن تخزين أي العدوى OP50 المتبقية في 4 درجات مئوية لتصل إلى شهر.</li>
		<li>عكس لوحات OP50 بمجرد العدوى قد المجففة (حوالي 10 أو 15 دقيقة)، ومن ثم احتضان اللوحات في 37 درجة مئوية ح 36.</li>
		<li>بعد 36 ساعة، إزالة اللوحات من الحاضنة ومخزن في 4 درجات مئوية حتى استخدامها في وقت لاحق. ملاحظة: يجب أن تكون اللوحات جيدة لمدة تصل إلى شهر واحد في 4 درجات مئوية.</li>
	</ol></li>
	<li>المكمل كدكفدا إلى OP50
	<ol>
<li>لتكملة كدكفدا على لوحات OP50، إعداد رصيد عامل من كدكفدا 10 ملم في ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس]). يبقى الحل كدكفدا محمية من الضوء ومخزن في-20 درجة مئوية لاستخدامها في وقت لاحق.</li>
		<li>بلطف ضع 100 ميليلتر من محلول كدكفدا 10 ملم على سطح التصحيح OP50 2 سم × 2 سم، مثل تصحيح كامل موحد مغطاة كدكفدا. ملاحظة: من المهم جداً أن تتناول تصحيح كامل من OP50 مع كدكفدا. إذا لزم الأمر، استخدم يصل إلى 150 ميليلتر من كدكفدا لكل لوحة. من المحتم أيضا أن الحل كدكفدا لا يتعدى حدود التصحيح OP50، ﻷن أي كدكفدا الذي يتدفق من التصحيح OP50 لن يتم تضمينها في المواد الغذائية، وسوف يسفر عن انخفاض كثافة المصبوغة.</li>
		<li>ضع لوحات OP50 في مربع الظلام على أعلى مقاعد البدلاء حتى يمتص كل حل كدكفدا في التصحيح البكتيرية (عادة حوالي 25 إلى 30 دقيقة).</li>
	</ol></li>
	<li>تلوين الديدان باستخدام كدكفدا
	<ol>
<li>مرة واحدة وقد ساد كدكفدا تماما التصحيح OP50، ضع الديدان لا يزيد عن 20 للوحة الواحدة واحتضان لوحات مقلوب في 20 درجة مئوية للحد ني ح 14. ملاحظة: من المستحسن وضع لوحات كدكفدا في مربع مبهمة لتقليل التعرض للضوء.</li>
		<li>للتحكم في كمية الاختلافات بين التجارب وتطبيع إشارات كدكفدا، (مستحسن) وصمة عار التعاون مع 3-{2-[(1H,1'H-2,2'-bipyrrol-5-yl-kappaN(1))methylidene]-2H-pyrrol-5-yl-kappaN}-N-[2-(dimethylamino)ethyl]propanamidato) ( ديفلورو) البورون (2.5 ميليلتر من حل تقدم طازجة 1 ملم)، صبغ أمين ضعيفة أسيدوتروبيك الأسفار التي غير متغيرة إلى حد كبير على مدى الطيف الأس الهيدروجيني الحمضية (انظر الجدول للمواد للأسماء الشائعة من الكواشف). ملاحظة: لا وصمة عار الديدان لأقل من 14 ح هذا قد توفر كثافة المصبوغة كدكفدا غير كافية وتعطي تفسيراً كاذبة للأس الهيدروجيني الليزوزومية.</li>
	</ol></li>
	<li>تحضير الشرائح للفحص المجهري
	<ol>
<li>وضع الشريطين موازية لوسم الشريط حوالي 3 بوصة عن بعضها البعض على سطح مستو سلس، مثل مرآة (الشكل 1).</li>
		<li>معطف السطح من النسخة المتطابقة مع رذاذ طارد المياه، وتمحو السائل الفائض.</li>
		<li>تذوب [اغروس] 2% (حله في المقطر ح2س) في فرن ميكروويف حتى المسال تماما، ثم ضع قطره 50 ميليلتر من [اغروس] بين الشريطين من الشريط وتغطية بسرعة الانخفاض مع شريحة مجهر، أن الشريحة من عمودي إلى الشرائط من الشريط. بعد وقد توطد [اغروس]، تشكل منصة دائرية تحت الشريحة، اقلب الشريحة وإضافة 10 إلى 15 ميليلتر من أزيد الصوديوم 5 مم (نان3) على لوحة المفاتيح [اغروس]. ملاحظة: نان3 مثبط السيتوكروم ج أنه عندما تستخدم بتركيزات منخفضة، أنيسثيتيزيس الديدان عكسية حيث أنه سوف لا تتحرك أثناء التصوير.</li>
		<li>اختيار الديدان من لوحة OP50 تكملة مع كدكفدا، ونقلها إلى لوحة NGM نظيفة دون أي OP50. السماح للديدان للتحرك لبضع ثوان للسماح لمعظم OP50 المراد إزالتها من على سطح أرض الديدان، وثم نقل الديدان إلى لوح [اغروس] يتضمن أزيد الصوديوم 5 ملم.</li>
		<li>تغطية لوحة المفاتيح [اغروس] كشف الغطاء فورا. تأكد من وضع بكشف الغطاء بلطف دون تطبيق الكثير من الضغوط، حيث يمكن أن ينتج هذا الديدان تتضاعف. ملاحظة: البكتيريا OP50 تكملة مع كدكفدا فلوريس عندما تصور بالفحص المجهري، ومن ثم من المهم لتنظيف الديدان على أفضل وجه ممكن قبل وضعها على اللوحة [اغروس] يتضمن أزيد الصوديوم. إذا كان الاستعداد أكثر من 6 سلالات من C. ايليجانس (بما في ذلك N2، مراقبة نوع البرية)، من المستصوب إعداد العينات على دفعات 6، ضمانا لأن الديدان لم تجف على منصة [اغروس]. في بعض السلالات، يبدأ الفرج للتمزق بعد فترات طويلة من الوقت بسبب الضغط من كشف الغطاء، ولذلك فمن المهم التخطيط وفقا لذلك.</li>
	</ol></li>
	<li>مجهر [كنفوكل] ملاحظة: بعض المجاهر لديها ميزة مضمنة تلقائياً زيادة كثافة الأسفار لتعويض مستويات متغيرة من الأسفار. قد لا تعمل هذه المجاهر جيدا للتصوير الديدان ملطخة كدكفدا، نظراً لطبيعتها ستزيد كثافة العينات الأسفار.<ol>
<li>تنفيذ التصوير على الميكروسكوب [كنفوكل] قياسية باستخدام موجات الإثارة/الانبعاثات المحددة إلى 488/530 نانومتر كدكفدا. التقاط صور طائرة واحدة (لا مداخن-Z) من lysosomes المعوية واستخدم فقط ليسوسوميس التي في التركيز (شدة الإشارة القصوى) لتقدير كثافة. ملاحظة: ربما بسبب الاختلافات في توافر صبغ، lysosomes الخلايا المعوية الخلفي مباشرة إلى البلعوم الحفاظ على كدكفدا تلطيخ كثافة بغض النظر عن النمط الوراثي أو العمر، ومن ثم ينبغي الحرص على تجنب التصوير lysosomes في هذه الخلايا.</li>
		<li>صورة الشريحة التي تحتوي على نوع البرية القديمة يوم 2 N2 الديدان أولاً. عند القيام بذلك، قم بتعديل معالم التصوير [كنفوكل] مثل طاقة الليزر، والثقب، وفتحه لضمان أن لا يتم oversaturated كدكفدا تلطيخ كثافة. ملاحظة: بمجرد تعيين هذه الإعدادات، لا تغييرها لكامل مدة التصوير لهذا اليوم.</li>
		<li>التقاط الصور 1024 × 1024 بكسل لطائرة واحدة من الأمعاء (3 إلى 4 صور كل دودة) استخدام 60 X عدسة التكبير. ملاحظة: سوف تسفر عن طيف انبعاث كدكفدا في الديدان ذروة بارز واحد في 520 nm تزامنت مع به الأسفار عنها الطيف20، توفير قراءات إشارة محددة التي تختلف عن أوتوفلوريسسينسي المعوية (الشكل 3).</li>
		<li>تصدير الصور [كنفوكل] الخام (ملفات.lsm) كملفات.tiff لكل قناة.</li>
		<li>بعد ذلك، فتح إيماجيج وانقر فوق ملف | فتح لفتح ملف الصورة كمياً. بمجرد أن يتم تحميل الصورة، استخدم أداة التحديد الشكل البيضاوي في إيماجيج لتحديد منطقة للفائدة (العائد على الاستثمار).</li>
		<li>وبعد ذلك، انقر فوق تحليل | مقياس لقياس كثافة الأسفار لأن العائد على الاستثمار. حدد 4 – 5 مختلفة lysosomes التركيز في كل صورة وحساب كثافة متوسط fluorescence النسبية لكل منطقة للفائدة (ROI).</li>
		<li>لكل صورة، وقياس كثافة fluorescence الخلفية في منطقة الأمعاء بين ليسوسوميس. طرح قيم الكثافة fluorescence الخلفية من قيم الكثافة fluorescence الليزوزومية.</li>
		<li>وفي المجموع، جمع حوالي 30 إلى 50 قيم طبيعية الفردية لكثافة كدكفدا (6 إلى 10 الحيوانات) لكل سلالة يجري اختبارها. استخدام هذه القيم لرسم مربع والخط الطولي مؤامرة باستخدام أي البرامج الإحصائية المناسبة. ملاحظة: تلطيخ يمكن أن تختلف اختلافاً كبيرا تبعاً لعوامل مثل درجة الحرارة ووقت الحضانة والصحة/سن عموما من الحيوانات مثل أن المقارنات كثافة الأسفار فقط ذات الصلة ضمن عملية العينات في نفس التجربة المصبوغة. ولذلك من المهم أن عملية المراقبة في كل تجربة المصبوغة. حساب الاختلافات الإحصائية (t-الاختبارات) باستخدام أي من البرامج الإحصائية المناسبة.</li>
		<li>صورة جميع سلالات من نفس التجربة (الملون في نفس اليوم) في التسلسل، مع الحرص على عدم تغيير أي من المعلمات التصوير.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Erjavec, N., Larsson, L., Grantham, J., Nystrom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+aging+and+failure+to+segregate+damaged+proteins+in+Sir2+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Accelerated aging and failure to segregate damaged proteins in Sir2 mutants.</a> Genes Dev. 21 (19), 2410-2421 (2007).</li>
<li>Madeo, F., Eisenberg, T., Kroemer, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2758740/">Autophagy for the avoidance of neurodegeneration.</a> Genes Dev. 23 (19), 2253-2259 (2009).</li>
<li>Rubinsztein, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+intracellular+protein-degradation+pathways+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The roles of intracellular protein-degradation pathways in neurodegeneration.</a> Nature. 443 (7113), 780-786 (2006).</li>
<li>Cohen, E., Bieschke, J., Perciavalle, R. M., Kelly, J. W., Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opposing+activities+protect+against+age-onset+proteotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Opposing activities protect against age-onset proteotoxicity.</a> Science. 313 (5793), 1604-1610 (2006).</li>
<li>Cuervo, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+aging%3A+the+importance+of+maintaining+%26%2334%3Bclean%26%2334%3B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy and aging: the importance of maintaining &#34;clean&#34; cells.</a> Autophagy. 1 (3), 131-140 (2005).</li>
<li>Harrington, A. J., Knight, A. L., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+as+a+model+system+for+identifying+effectors+of+alpha-synuclein+misfolding+and+dopaminergic+cell+death+associated+with+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans as a model system for identifying effectors of alpha-synuclein misfolding and dopaminergic cell death associated with Parkinson's disease.</a> Methods. 53 (3), 220-225 (2011).</li>
<li>Muchowski, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+misfolding%2C+amyloid+formation%2C+and+neurodegeneration%3A+a+critical+role+for+molecular+chaperones%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Protein misfolding, amyloid formation, and neurodegeneration: a critical role for molecular chaperones?</a> Neuron. 35 (1), 9-12 (2002).</li>
<li>Cuervo, A. M., Dice, J. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10806201">Age-related decline in chaperone-mediated autophagy.</a> J Biol Chem. 275 (40), 31505-31513 (2000).</li>
<li>Tonoki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+evidence+linking+age-dependent+attenuation+of+the+26S+proteasome+with+the+aging+process%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic evidence linking age-dependent attenuation of the 26S proteasome with the aging process.</a> Mol Cell Biol. 29 (4), 1095-1106 (2009).</li>
<li>Squier, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+and+protein+aggregation+during+biological+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress and protein aggregation during biological aging.</a> Exp Gerontol. 36 (9), 1539-1550 (2001).</li>
<li>Sarkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecules+enhance+autophagy+and+reduce+toxicity+in+Huntington%27s+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Small molecules enhance autophagy and reduce toxicity in Huntington's disease models.</a> Nat Chem Biol. 3 (6), 331-338 (2007).</li>
<li>Glick, D., Barth, S., Macleod, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy%3A+cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Autophagy: cellular and molecular mechanisms.</a> J Pathol. 221 (1), 3-12 (2010).</li>
<li>Boya, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+function+and+dysfunction%3A+mechanism+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Lysosomal function and dysfunction: mechanism and disease.</a> Antioxid Redox Signal. 17 (5), 766-774 (2012).</li>
<li>Kim, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-aging+treatments+slow+propagation+of+synucleinopathy+by+restoring+lysosomal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Anti-aging treatments slow propagation of synucleinopathy by restoring lysosomal function.</a> Autophagy. 12 (10), 1849-1863 (2016).</li>
<li>Vila, M., Bove, J., Dehay, B., Rodriguez-Muela, N., Boya, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+membrane+permeabilization+in+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Lysosomal membrane permeabilization in Parkinson disease.</a> Autophagy. 7 (1), 98-100 (2011).</li>
<li>Cuervo, A. M., Dice, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+do+intracellular+proteolytic+systems+change+with+age%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">How do intracellular proteolytic systems change with age?</a> Front Biosci. 3, d25-d43 (1998).</li>
<li>Cuervo, A. M., Dice, J. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10767573">When lysosomes get old.</a> Exp Gerontol. 35 (2), 119-131 (2000).</li>
<li>Gachet, Y., Codlin, S., Hyams, J. S., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((btn1%2C+the+Schizosaccharomyces+pombe+homologue+of+the+human+Batten+disease+gene+CLN3%2C+regulates+vacuole+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">btn1, the Schizosaccharomyces pombe homologue of the human Batten disease gene CLN3, regulates vacuole homeostasis.</a> J Cell Sci. 118 (Pt 23), 5525-5536 (2005).</li>
<li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK19649/?report=reader">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li>
<li>Preston, R. A., Murphy, R. F., Jones, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+of+vacuolar+pH+in+yeast+and+identification+of+acidification-defective+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Assay of vacuolar pH in yeast and identification of acidification-defective mutants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 86 (18), 7027-7031 (1989).</li>
<li>Pringle, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+microscopy+methods+for+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence microscopy methods for yeast.</a> Methods Cell Biol. 31, 357-435 (1989).</li>
<li>Baxi, K., Ghavidel, A., Waddell, B., Harkness, T. A., de Carvalho, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+Lysosomal+Function+by+the+DAF-16+Forkhead+Transcription+Factor+Couples+Reproduction+to+Aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Regulation of Lysosomal Function by the DAF-16 Forkhead Transcription Factor Couples Reproduction to Aging in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 207 (1), 83-101 (2017).</li>
<li>Colacurcio, D. J., Nixon, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disorders+of+lysosomal+acidification-The+emerging+role+of+v-ATPase+in+aging+and+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Disorders of lysosomal acidification-The emerging role of v-ATPase in aging and neurodegenerative disease.</a> Ageing Res Rev. 32, 75-88 (2016).</li>
<li>Kang, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+screening+identifies+ATM+as+a+target+for+alleviating+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical screening identifies ATM as a target for alleviating senescence.</a> Nat Chem Biol. 13 (6), 616-623 (2017).</li>
<li>Arrasate, M., Mitra, S., Schweitzer, E. S., Segal, M. R., Finkbeiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+body+formation+reduces+levels+of+mutant+huntingtin+and+the+risk+of+neuronal+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inclusion body formation reduces levels of mutant huntingtin and the risk of neuronal death.</a> Nature. 431 (7010), 805-810 (2004).</li>
<li>Brunk, U. T., Terman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial-lysosomal+axis+theory+of+aging%3A+accumulation+of+damaged+mitochondria+as+a+result+of+imperfect+autophagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial-lysosomal axis theory of aging: accumulation of damaged mitochondria as a result of imperfect autophagocytosis.</a> Eur J Biochem. 269 (8), 1996-2002 (2002).</li>
<li>Gerland, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autolysosomes+accumulate+during+in+vitro+CD8%2B+T-lymphocyte+aging+and+may+participate+in+induced+death+sensitization+of+senescent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Autolysosomes accumulate during in vitro CD8+ T-lymphocyte aging and may participate in induced death sensitization of senescent cells.</a> Exp Gerontol. 39 (5), 789-800 (2004).</li>
<li>Poon, H. F., Vaishnav, R. A., Getchell, T. V., Getchell, M. L., Butterfield, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+proteomics+analysis+of+differential+protein+expression+and+oxidative+modification+of+specific+proteins+in+the+brains+of+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Quantitative proteomics analysis of differential protein expression and oxidative modification of specific proteins in the brains of old mice.</a> Neurobiol Aging. 27 (7), 1010-1019 (2006).</li>
<li>Yin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+basis+of+lipofuscin%2C+ceroid%2C+and+age+pigment-like+fluorophores%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Biochemical basis of lipofuscin, ceroid, and age pigment-like fluorophores.</a> Free Radic Biol Med. 21 (6), 871-888 (1996).</li>
<li>Nehrke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reduction+in+intestinal+cell+pHi+due+to+loss+of+the+Caenorhabditis+elegans+Na%2B%2FH%2B+exchanger+NHX-2+increases+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A reduction in intestinal cell pHi due to loss of the Caenorhabditis elegans Na+/H+ exchanger NHX-2 increases life span.</a> J Biol Chem. 278 (45), 44657-44666 (2003).</li>
<li>Chakraborty, K., Leung, K., Krishnan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+lumenal+chloride+in+the+lysosome+is+critical+for+lysosome+function%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">High lumenal chloride in the lysosome is critical for lysosome function.</a> Elife. 6, (2017).</li>
</ol>

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

مجموعة متنوعة من الأحداث الجزيئية والخلوية تسهم في الشيخوخة، متأثر بسمات تاريخ الحياة والعوامل الوراثية. لدينا الدراسة الأخيرة22 تشير إلى أن دورة الإنجابية دوراً هاما في السيطرة على اللياقة البدنية سوما من خلال تنظيم ديناميات الليزوزومية الأس الهيدروجيني. أظهرنا أن يتعزز هذا proteolysis الليزوزومية بوساطة حين استنساخ الحيوانات بنشاط قبل upregulation نسخ الخامس-ATPase، الذي يكفل بدوره lysosomes الحمضية. عند نهاية الاستنساخ، قطرات التعبير الخامس-ATPase، الكالينيزي lysosomes، وتتراكم المجاميع البروتي...

ظهور المجاميع البروتين مقبول على نطاق واسع أن تكون السمة مميزة للشيخوخة في الخلايا حقيقية النواة1،2،3، وتشكيل التي يعتقد أن من بين السائقين مبدأ الشيخوخة الخلوية4 , 5 , 6 , 7-وهناك أدلة متزايدة على أن الخلايا العمر، تقويض البروتين البصر، مما يؤدي إلى زيادة في تجميع البروتين. انهيار بروتيوليسيس في شيخوخة الخلايا ينطوي على ضعف أوتوفاجي8 ، فضلا عن تدهور البروتين بوساطة بروتوزوم9. أخيرا، يتم زيادة أكسدة البروتين الذي لا رجعة فيه في الخلايا القديمة، وإضعاف زيادة تقويض البروتينات10.
أوتوفاجي كان يعتقد في البداية أن يكون عملية غير انتقائية لتدهور الجزء الأكبر من البروتينات التالفة، ولكن الدراسات الأخيرة أشارت إلى أن أوتوفاجي انتقائي للغاية لتقويض المجاميع البروتين واختلال العضيات التي لا قابلة للتحلل عن طريق آليات إزالة البروتين الأخرى11. أثناء عملية أوتوفاجي، هي المحتبس البروتينات التالفة ومجمعة في حويصلة غشاء مزدوج يسمى في أوتوفاجوسومي. ثم الصمامات هذه أوتوفاجوسومي مع العضيات الحمضية التي تسمى lysosomes، الأمر الذي يؤدي إلى تدهور من البضائع أوتوفاجوسومي12. تمثل نقطة النهاية لمسار أوتوفاجيك lysosomes والمشاركة في العمليات الخلوية المختلفة مثل التحكم النسخي وإصلاح الغشاء والاستشعار المغذيات؛ تسليط الضوء على دورها المركزي في التوازن الخلوية (إعادة النظر في الرقم 13). وأظهرت العديد من الدراسات وجود ارتباط بين انخفاض تعتمد على العمر وظيفة الليزوزومية و اضطرابات الأعصاب المختلفة13. دأبت، استعادة وظيفة الليزوزومية في خلايا كبار السن يمكن أن تؤخر ظهور المتصلة بالشيخوخة تعمل14،15. وتوحي الدراسات التكوين للوسط إينترالومين أن انهيار الدالة الليزوزومية في خلايا كبار السن ليس سبب انخفاضا في إنتاج البروتياز الليزوزومية16. وبدلاً من ذلك، اقترح أن فقدان إينتراليسوسومال الحموضة، مطلبا جوهريا لنشاطها الأنزيمي، قد تكمن وراء انخفاض يحلول بوساطة بروتيوليسيس17. لتكون قادرة على استكشاف هذه الفرضية، من الضروري تطوير الكواشف وبروتوكولات للتحقيق التغيرات الدينامية في تعويض درجة الحموضة في الخلايا الحية بطريقة متسقة وقابلة للتكرار.
الأمعاء من C. ايليجانس الأنسجة الأيضية الرئيسية في الديدان ومنظم حاسمة للتوازن المنهجي وعمر. لقد قمنا بتطوير فحوصات لتقييم التغييرات في حموضة التجويف lysosomes المعوية الديدان لتحديد كيف بوساطة يحلول proteolysis يسهم في الشيخوخة. على الرغم من أن فلوروفوريس حساسة لدرجة الحموضة قد استخدمت سابقا في C. ايليجانس بمناسبة ليسوسوميس المعوية، لم يكن هناك بعد محاولة لوضع بروتوكول ناجحة التي يمكن الكشف عن زيادات صغيرة في الأس الهيدروجيني الليزوزومية في فيفو18. هنا، نحن نقدم بروتوكول التي يمكن استخدامها للكشف عن فقدان الليزوزومية الحموضة في الخلايا المعوية من C. ايليجانس استخدام بروتوكول تغذية بسيطة ومريحة الذي يشتمل فلوروفوري حساسة لدرجة الحموضة (كدكفدا) في الغذاء OP50.

<table><tbody><tr><td>OP50 (E. coli) مركز</td><td></td> <td>Caenorhabditis لعلم الوراثة</td><td>اطلب عبر الإنترنت على https://cgc.umn.edu/strain/OP50</td></tr><tr><td>5 (6) -carboxy-2 '، 7'-dichlorofluorescein diacetate &nbsp ؛</td><td>ThermoFisher</td><td>C369</td><td>المعروف باسم cDCFDA</td></tr><tr><td>9-diethylamino-5H-benzo (a) phenoxazine-5-one و (3-{2-[(1H,1'H-2,2'-bipyrrol-5-yl-kappaN (1))methylidene] -2H-pyrrol-5-yl-kappaN}-N- [2- (dimethylamino) ethyl] propanamidato) (ثنائي فلورو) البورون</td><td>ThermoFisher</td><td>L7528</td><td>المعروف باسم مجهر Lysotracker الأحمر</td></tr><tr><td>متحد البؤر (مثل Zeiss LSM 510) ImageJ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>قم بالتنزيل مجانا من https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td></tr><tr><td>LB Broth Powder</td><td>ThermoFisher</td><td>22700041</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Sigma</td><td>A5306-1KG</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Peptone</td><td>Fisher Scientific</td><td>S71604</td><td></td></tr><tr><td>مسحوق الكوليسترول</td><td>Sigma</td><td>C3045 &nbsp ؛</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma</td><td>449709</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>K3PO4</td><td>Sigma</td><td>P5629</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Azide</td><td>Sigma</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>شرائح مجهر</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>زلات الغطاء</td><td>ThermoFisher</td><td>3406</td><td></td></tr> مرآة <tr><td>حاضنة</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Agarose</td><td>Sigma</td><td>A6013</td><td></td></tr><tr><td>أو أي سطح</td><td></td><td></td><td></td> مستو أملس</tr></tbody></table> آخر

تقييم "الليزوزومية الغدق" في "الأمعاء ومن يعيش" ايليجانس كاينورهابديتيس

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس (C. ايليجانس) هو نموذج نظام الذي يستخدم على نطاق واسع لدراسة طول العمر والمسارات الإنمائية. ومما ييسر هذه الدراسات شفافية الحيوان، والقدرة على توجيه وعكس الاختبارات الجينية، والسهولة النسبية لتوليد البروتينات المسماة فلوريسسينتلي، واستخدام الأصباغ الفلورية التي يمكن أما أن يكون ميكروينجيكتيد في وقت مبكر الجنين أو إدماجه في غذائها (سلالةكولاي OP50) لتسمية العضيات الخلوية (مثلاً 9-ديثيلامينو-ح 5-بنزو (أ) فينوكسازيني-5-واحد و (3-{2-[(1H,1'H-2,2'-bipyrrol-5-yl-kappaN(1)) ميثيليديني] ح-2-بيرل-5-يل-كابان}-N- [2-(dimethylamino)ethyl]propanamidato)(difluoro)boron). هنا، نحن نقدم استخدام صبغة حساسة لدرجة الحموضة الفلورسنت البقع lysosomes المعوية، توفير قراءات بصرية للتغيرات الفسيولوجية، ودينامية في الحموضة الليزوزومية في الديدان الحية. هذا البروتوكول ليس قياس درجة الحموضة الليزوزومية، ولكن بدلاً من ذلك يهدف إلى وضع طريقة يمكن الاعتماد عليها لتقييم التغيرات ذات الصلة الفسيولوجية في الحموضة الليزوزومية. كدكفدا هو مركب بيرمينت خلية التي يتم تحويلها إلى نيون فلوروفوري 5-(and-6)-carboxy-2',7'-dichlorofluorescein (تتيح) عند التحلل من استيراسيس داخل الخلايا. بروتونيشن داخل lysosomes الفخاخ تتيح في هذه العضيات، حيث يتراكم. وقد استخدمت هذه الصبغة سبب لها pKa منخفضة من 4.8، كجهاز استشعار درجة حموضة في الخميرة. هنا يصف لنا باستخدام كدكفدا كمكمل غذائي لتقييم الحموضة المعوية ليسوسوميس في C. ايليجانس. هذا الأسلوب يسمح للكشف عن ليسوسوميس الكالينيزينج في الحيوانات الحية، ، ولديها مجموعة واسعة من التطبيقات التجريبية بما في ذلك الدراسات المتعلقة بالشيخوخة، وأوتوفاجي، ونشوء حيوي الليزوزومية.

كدكفدا البقع lysosomes بطريقة تعتمد على درجة الحموضة، و pKa منخفضة وامتصاص جاهزة في ليسوسوميس يجعل استشعار الرقم الهيدروجيني مثالي21. كدكفدا تلطيخ كثافة يتناسب عكسيا مع18،الليزوزومية الأس الهيدروجيني (أي المصبوغة يزداد كثافة كانخفاض الأس الهيدروجيني)22. كدكفدا إشارات ضعيفة دائماً في lysosomes الحيوانات تعامل مع 20 مم لدواء الكلوروكين، مثبط لتحميض الليزوزومية، والديدان المستنفد من الخامس-ATPase، الب...

دليل خطوة بخطوة للتحقيق في فقدان الليزوزومية الحموضة في الأمعاء من C. ايليجانس استخدام صبغة حساسة لدرجة الحموضة الحيوية 6-كاربوكسي-2 '، اسيتات 7'-ديتشلوروفلوريسسين (كدكفدا)

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم الفقدان النسبي لحموضة الليزوزومات في الجسيمات الحالة المعوية ل C.elegans. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الالتهام الذاتي من خلال توفير معلومات غير مباشرة حول وظيفة الأحزمات وتدهور البروتين. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها بسيطة وغير مكلفة ومريحة وقابلة للتكرار.خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما لاحظنا تقنية التلوين المستخدمة لتقييم القلوية الفراغية في الخميرة. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا مهما لأن بعض الخطوات ، مثل إضافة cDCFDA إلى طعام OP50 والتحكم في التصوير بالديدان البرية التي يبلغ عمرها يومين أمر بالغ الأهمية. بعد تحضير ألواح NGM ، اترك الأطباق تجف في درجة حرارة الغرفة لمدة يومين مع إغلاق الغطاء.ثم قم بتلقيح بكتيريا OP50 في مرق لوريا المعقم. بعد التلقيح ، اترك اللقاح في الحاضنة حتى يصبح OD بين 0.2 و 0.4. ثم ضع قطرة من لقاح OP50 في وسط صفيحة NGM الجافة.بعد ذلك ، استخدم موزعة لنشر اللقاح في رقعة ما يقرب من سنتيمترين × سنتيمترين. بعد 15 دقيقة تقريبا ، اقلب صفيحة OP50 بعد أن يجف اللقاح. ثم احتضن اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 36 ساعة.بمجرد انتهاء الحضانة ، انقل اللوحة على أربع درجات مئوية حتى الاستخدام. بعد ذلك ، قم بإعداد مخزون عمل من 10 مللي مولار cDCFDA في المخزن المؤقت M9. قم بتخزين محلول cDCFDA بعيدا عن الضوء عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر.بعد ذلك ، قم بتعبئة 100 ميكرولتر من 10 مللي مولار cDCFDA لتغطية رقعة OP50 بأكملها بشكل موحد على اللوحة. اترك ألواح cDCFDA في صندوق مظلم على سطح المقعد لمدة 30 دقيقة تقريبا. بعد أن يتخلل cDCFDA رقعة OP50 تماما ، انقل 20 دودة على اللوحة ، ثم اترك اللوحة في حالة مقلوبة لمدة 14 ساعة عند 20 درجة مئوية.بعد ذلك ، خذ شريطين من أشرطة الملصقات وضعهما على بعد 1.5 بوصة على سطح مرآة أملس ومسطح. ثم قم بتغطية سطح المرآة برذاذ طارد للماء ، وقم بإزالة السائل الزائد. بعد ذلك ، قم بإذابة 2٪ agarose في الماء المقطر في الميكروويف.بعد أن يذوب الاغاروز ، ضع قطرة من الاغاروز بين شريطي الأشرطة وقم بتغطية القطرة بشريحة المجهر. بعد أن يتجمد الاغاروز على شكل وسادة دائرية أسفل الشريحة ، اقلب الشريحة. ثم أضف 10 إلى 15 ميكرولترا من أزيد الصوديوم بخمسة مللي مولار على وسادة الاغاروز.الآن ، انقل الديدان من اللوحة المكملة ب cDCFDA إلى لوحة NGM نظيفة بدون أي OP50. دع الديدان تتحرك لبضع ثوان حتى تتم إزالة OP50 من سطحها. ثم انقل الدودة على وسادة الاغاروز التي تحتوي على خمسة مللي مولار أزيد الصوديوم.قم بتغطية وسادة الاغاروز بسرعة بقلة غطاء. بعد ذلك ، استخدم عدسة تكبير 60X والتقط صورا في مستوى واحد من الأمعاء من النوع البري والديدان الطافرة التي يبلغ عمرها يومين. ثم افتح ImageJ وانقر على الملف.ثم انقر فوق فتح لفتح الملف الذي يحتاج إلى تحديد كميا. بعد تحميل الصورة، استخدم أداة التحديد ذات الشكل البيضاوي لتحديد منطقة الاهتمام. ثم انقر فوق تحليل ، وأخيرا ، قياس لتحديد كثافة التألق في المنطقة التي تهمك.لدراسة النشاط الوظيفي الليزوزومي ، يتم قياس كثافة تلطيخ cDCFDA باستخدام التصوير متحد البؤر. في هذه الصورة ، توجد شدة إشارة مضان قوية cDCFDA في الجسيمات الحالة المعوية للنوع البري اليوم الثاني C.Elegans. هذا يشير إلى ليزوزوم حمضي مؤهل وظيفيا.على العكس من ذلك ، يتم قمع شدة التألق إلى حد كبير في الجسيمات الحالة المعوية للديدان البرية البالغة من العمر ثمانية أيام. هذا بالمقارنة مع الجسيمات الحالة المعوية لديدان اليوم الثاني. أشارت النتيجة إلى وجود الليزوزوم القلوي غير الكفء وظيفيا في اليوم الثامن من الديدان العمرية.ومن المثير للاهتمام ، أن شدة مضان cDCFDA قد انخفضت أيضا بشكل ملحوظ في كل من اليوم الثاني والثمانية من ديدان RNAi القديمة عند مقارنتها بالدودة من النوع البري. هنا ، تم إسقاط جين vha ، الذي يشفر الوحدات الفرعية الفراغية ATPase في البطانة الليزوزومية في اليوم الثاني والثامن من الديدان. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال نظام التلوين والفحص المجهري بالكامل في أقل من 18 ساعة ، إذا تم إجراؤه بشكل صحيح.أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر احتضان الديدان في مكمل cDCFDA في طعام OP50 لمدة 14 ساعة على الأقل. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقييم فقدان الحموضة الليزوزومية في الجسيمات الحالة المعوية ل C.elegans الحية.

assessing-lysosomal-alkalinization-intestine-live-caenorhabditis

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

المصدر: لي، ت. أ. ن. وآخرون، قياس تأثير البكتيريا والمواد الكيميائية على نفاذية الأمعاء لالتهاب الكاينورهابديتس الإليجان. J. Vis. Exp. (2019)يظهر هذا الفيديو اختبارا قائما على الفلورة لقياس نفاذية الأمعاء في C. elegans المعرضة لPseudomonas aeruginosa. مقارنة بالضبط الذي تم إطعام الإشريكية القولونية، تظهر الديدان المعالجة بالممرضات زيادة في تسرب الفلوروفور إلى تجويف الجسم، مما يشير إلى تلف الحاجز الظهاري.

تقييم نفاذية الأمعاء لدى C. elegans بعد التعرض للبكتيريا

يصف هذا الفيديو مقايسة لونية لقياس اللاكتات في محللات الخلايا باستخدام إنزيم نازعة هيدروجين اللاكتات. يحول هذا الإنزيم اللاكتات إلى بيروفات ، جنبا إلى جنب مع تحويل NAD إلى NADH الذي يتفاعل مع أصباغ التيترازوليوم ويعطي منتجا ملونا يمكن قياسه بشكل طيفي لقياس اللاكتات.

الفحص اللوني للقياس الكمي للاكتات في عينات الاختبار

نحن تصف أساليب لدراسة جوانب amylopathies في...

A<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; النظام النموذجي للدراسات Amylopathy

لدراسة العلاقة بين توازن البروتين والإجهاد والشيخوخة ، راقبنا التغيرات في طي البروتين باتباع خلل البروتين ، وتوطين البروتين في الخلية واستقرار البروتين على مستويات الكائنات الحية والخلوية والبروتين ، باستخدام metazoan Caenorhabditis elegans القابل للتتبع وراثيا كنظام نموذجي.

استخدام Caenorhabditis elegans كنظام نموذجي لدراسة توازن البروتين في كائن حي متعدد الخلايا

شفافية يمكن الأمعاء C. ايليجانس بمثابة "في فيفو أنسجة دائرة" لدراسة أبيكوباسال الغشاء والتجويف نشوء حيوي على مستوى خلية واحدة وسوبسيلولار أثناء توبولوجينيسيس متعددة الخلايا. هذا البروتوكول يصف كيفية الجمع بين العلامات القياسية والوراثية فقدان لوظيفة [رني/] والنهج المجهري تشريح هذه العمليات على مستوى جزيئي.

الأمعاء C. ايليجانس "كنموذج" ل Morphogenesis التجويف بين الخلايا و في فيفو الاستقطاب نشوء غشاء حيوي على مستوى الخلايا المفردة: وضع العلامات تلطيخ جسم والخسارة [رني] من وظيفة تحليل وتصوير

القناة C. ايليجانس مطرح نموذج خلية واحدة فريدة من نوعها لتحليل البصرية في فيفو نشوء حيثياته استقطاب غشاء حيوي. ويصف هذا البروتوكول مزيجاً من القياسي الوراثية/[رني] والتصوير النهج، قابلة للتكيف لتحديد وتوصيف جزيئات توجيه أحادي الخلية توبولوجينيسيس، ونشوء حيوي الغشاء والتجويف قمي.

قناة Excretory C. ايليجانس كنموذج ل Morphogenesis التجويف داخل الخلايا و في فيفو الاستقطاب نشوء غشاء حيوي في "خلية واحدة": وضع العلامات بالتجارة والنقل-الأنشطار والشاشة التفاعل [رني] والتصوير

يصف لنا استخراج معدلة على نطاق ضيق وفحوصات اللونية لاكتات وبيروفات في ديدان أسطوانية C. ايليجانس. عند استخدام أدوات التحليل التجاري، المهم التطور التقني الحساسية والدقة. ترسيب البروتين في استخراج هي الخطوة الأكثر أهمية لتحديد الكمية من نواتج الأيض داخل الخلايا.

قياس الألوان فحوصات من داخل الخلايا لاكتات الصغيرة وبيروفات في السلكية ايليجانس كاينورهابديتيس

يصف هذا البروتوكول كيفيه قياس نفاذيه المعوية من الايلي+آت Caenorhabditis. هذا الأسلوب مفيد للبحوث البيولوجية الاساسيه علي الصحة المعوية المتعلقة بالتفاعل بين البكتيريا المعوية والمضيفة وللكشف لتحديد عوامل بروبيوتيك والكيميائية لعلاج متلازمة الأمعاء المتسربة وامراض الأمعاء التهابيه.

قياس اثار البكتيريا والمواد الكيميائية علي نفاذيه المعوية من اليجان

انخفاض بروتيوستاتيكي هو السمة المميزة للشيخوخة، وتسهيل ظهور الأمراض العصبية. نحن الخطوط العريضة لبروتوكول لقياس قياس كميا proteostasis في اثنين من مختلف الأنسجة Elegans Caenorhabditis من خلال التعبير heterologous من polyglutamine يكرر تنصهر لمراسل الفلورسنت. يسمح هذا النموذج بسرعة في التحليل الجيني في الجسم الحي للبروتيوستاسي.

قياس الانخفاض البروتيني البروتيوستيكي الخاص بالأنسجة في إليجانات Caenorhabditis

يسمح الفحص المجهري المحفز لتشتت رامان (SRS) بالتصوير الانتقائي الخالي من التسميات للمويات الكيميائية المحددة وقد تم استخدامه بشكل فعال لتصوير جزيئات الدهون في الجسم الحي. هنا، ونحن نقدم مقدمة موجزة لمبدأ المجهر SRS ووصف أساليب لاستخدامه في تخزين الدهون التصوير في Elegans Caenorhabditis.

التصوير الخالي من التسميات لديناميكيات تخزين الدهون في Elegans Caenorhabditis باستخدام المجهر التشتت رامان المحفزة

يمكن جعل تدريس العلوم البيولوجية أكثر تحفيزا للطلاب من خلال استخدام التجريب. تقدم هذه المخطوطة بروتوكولين مختلفين ولكنهما متكاملان يمكن استخدامهما في الفصل الدراسي لتشجيع الطلاب على صياغة واختبار الفرضيات المتعلقة بالوجبات الغذائية عالية السعرات الحرارية والجوع والشيخوخة.

استخدام الأصباغ منخفضة التكلفة لتصور تراكم الجليكوجين وسلامة الأمعاء في Caenorhabditis elegans

اكتشف تقييم فقدان حموضة الليزوزومات في أمعاء C. elegans باستخدام صبغة cDCFDA الحساسة للرقم الهيدروجيني. هذه الطريقة البسيطة والاقتصادية تساعد الباحثين على دراسة وظائف الليزوزوم والتلاعم الذاتي.

تقييم "الليزوزومية الغدق" في "الأمعاء ومن يعيش" ايليجانس كاينورهابديتيس

استكشف المزيد من الفيديوهات