بروتوكول تجريبي لاستخدام المورفولوجية كنظام نموذجي اللافقاريات لاختبار السمية في المختبر

يمكن استخدام هذا البروتوكول لفهم تأثير المواد السامة على اللياقة البدنية في مراحل النمو المختلفة وفحص تأثير التعرض للملوثات عبر الأجيال. سيظهر الإجراء طالبان جامعيان في مختبري البحثي وهما جزء من المجتمعات لبناء مشاركة نشطة في العلوم والتكنولوجيا والهندسة والرياضيات في جامعة ولاية كولورادو بويبلو وهيو لونج وتايلر هارفي. لبدء العمل مع ملوثات بيئية ذات أهمية ، حدد أولا الجرعة المميتة بنسبة 50٪ من مركب ذبابة الفيليا.

استخدم الأساليب المعمول بها لإنشاء منحنى استجابة الجرعة. بعد ذلك ، قم بإعداد وسط النمو بالمركب بالتركيز المطلوب. على سبيل المثال ، أضف المركب في كمية الماء عند عمل وسيط فوري.

في موازاة ذلك ، قم بعمل وسيط التحكم بدون المركب المضاف. لإعداد الثقافة التي يمكن من خلالها جمع التجارب ، قم بنقل البالغين الإنجابيين إلى وسط النمو باستخدام الطرق القياسية. توحيد عدد الذباب لكل قارورة وتجنب اكتظاظ البالغين.

ثم احتضان الذباب في ظل ظروف قياسية لمدة يوم إلى أربعة أيام. بعد الحضانة ، تخلص من البالغين ، تاركا وراءه البويضات المخصبة لتنضج للاختبار. ثم أعد القوارير في الحاضنة.

يمكن إعداد التعرض في أي مرحلة من مراحل النمو. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن جمع الموضوعات التجريبية في أي مرحلة من مراحل النمو اعتمادا على الأهداف التجريبية. تحقق من النامية يوميا لتحديد العلامة الأولى لمرحلة الاهتمام ، مثل يرقات الطور الثالث المتجولة.

لاختبار تأثيرات التعرض على مرحلة يرقات الطور الثالث المتجولة ، اجمع اليرقات في غضون ساعة من إضاءة الأضواء ، عندما تبدأ في الخروج من ركيزة الطعام. بعد ذلك ، اسكب الماء وانقل اليرقات إلى أنسجة المختبر لإزالة أي ماء زائد برفق. بمجرد أن تجف ، انقل اليرقات إلى الأنابيب المناسبة للتجميع.

لاختبار آثار التعرض على البالغين ، اجمع البالغين المغلقين حديثا. تخدير ثاني أكسيد الكربون على ما يرام. تأكد من جمع الذباب قبل أن ينضج تكاثريا ويبدأ في التزاوج. قسم الذباب إلى مجموعات خاصة بالجنس وانقلها إلى قوارير محملة بالوسيط الضابط أو الملوث بالتجربة لتتناسب مع التعرض الموجود مسبقا.

في وقت لاحق ، قبل 24 ساعة من قياس الملوثات في الذباب البالغ ، قم بنقل البالغين في كل من وسيط التحكم والملوث إلى قارورة محملة بوسيط التحكم للسماح للبالغين بالعناية بالوسط الزائد من أجسامهم. بعد 24 ساعة من الاستمالة ، يمكن اختبار الذباب بالطريقة المناسبة. على سبيل المثال ، يمكن اختبار التغييرات السلوكية باستخدام مقايسة اختيار التزاوج.

باستخدام هذه الأساليب ، من السهل جدا دراسات التأثيرات عبر الأجيال للتعرض للملوثات. ما عليك سوى إعداد التهجين بين البالغين المعرضين على وسط التحكم ودراسة آثار التعرض ل Fnot على ذريتهم. تم استخدام هذا البروتوكول لتقييم تراكم الرصاص والتخلص منه وعزله داخل نفس الجيل من النسل.

ذبابة الفاكهة تراكمت بسهولة الرصاص بجرعات مختلفة ومراحل النمو والمقاييس التطورية. باستخدام التعرض متعدد الأجيال ، وجد أن تعرض الوالدين لا ينتقل إلى الجيل الأول من النسل البالغ. لذلك ، باستخدام هذا البروتوكول ، من الممكن اختبار الاستجابات التكيفية على نطاقات تطورية مختلفة ، بالإضافة إلى التأثيرات عبر الأجيال Fnot للتعرض.

بعد ذلك ، تم تربية الذباب من مرحلة البويضة إلى مرحلة البلوغ على وسيط تحكم أو محتوي على الرصاص واختباره بعد 24 ساعة من التنقية ، وتم اختبار تفضيل الشريك. تربى الإناث على وسط محتوي على الرصاص ، ويفضل أن يتزاوج مع الذكور المعرضين للرصاص على الذكور المعرضين للتحكم. من ناحية أخرى ، لم يظهر الذكور نفس التحيز.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تربية ذبابة الفاكهة وجمعها للإجابة على الأسئلة المختلفة وعلم السموم. بمجرد إتقانه ، يمكن إجراء هذا البروتوكول في غضون شهر إلى شهرين إذا تم تنفيذه بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التعامل مع الذباب برفق ، حتى لا تسبب إجهادا غير ضروري.

بعد هذا الإجراء ، يمكن اختبار أسئلة أخرى مثل الأسئلة السلوكية والوراثية والعصبية. لا تنس أن العمل مع الملوثات يمكن أن يكون خطيرا للغاية ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات ، مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية وإعداد الملوثات في غطاء المحرك أثناء تنفيذ هذا الإجراء.