مورين التقييم الوظيفي اللعابية عبر التالي التحفيز Pilocarpine مجزأ الإشعاع

نقدم نهجاً مفصلاً لأداء مجموعة اللعاب، بما في ذلك القصبة الهوائية مورين وعزل الغدد اللعابية الرئيسية الثلاثة.

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم وظيفة اللعاب في الفئران عن طريق تحفيز بيلوكاربين. يمكن تطبيق هذه الطريقة لفهم التاريخ الطبيعي لخلل الغدد اللعابية ، ولاختبار فعالية أي تدخلات محتملة. يوفر بروتوكولنا منصة معيارية من التقنيات ، بما في ذلك بضع القصبة الهوائية في الفئران وجمع اللعاب وتشريح الغدة.

سريريا ، هذه التقنية لها آثار على الدراسات التي تقيم إما جفاف الفم أو الإفراط في إنتاج اللعاب. ويمكن أيضا تطبيقه على الإجراءات الأخرى داخل الفم التي تتطلب إدارة مجرى الهواء. قد يجد أولئك الذين يتعلمون هذا البروتوكول لأول مرة أن فغر القصبة الهوائية وتسلخ الغدة يشكلان تحديا.

نأمل أن يساعدك هذا الفيديو على تعلم تقنية عزل الغدة المناسبة ، بالإضافة إلى علم التشريح ذي الصلة. باستخدام ميزان تحليلي ، قم بوزن 20 ملليغرام من بيلوكاربين ، ثم قم بإذابته في 2 مل من المحلول الملحي المعقم. يجب أن تكون محاليل بيلوكاربين طازجة في يوم استخدامها.

بعد ذلك ، قم بوزن جميع أوعية التجميع للإجراء ، وقم بوزن الفأر لجرعته بدقة. استخدم سلالة C57 black 6. بعد تخدير الفأر ، وتأكيد التخدير بقرص إصبع القدم ، ضع مرهم العين باستخدام قضيب برأس قطني ، وضع الفأر ضعيفا.

ثم قم بتأمين أطرافها وأنفها وذيلها بشريط جراحي. بعد ذلك ، قم بتنظيف الرقبة وترطيبها باستخدام منديل كحولي. الآن ، استخدم الملقط لقرص رقبة خط الوسط البطني ، وباستخدام المقص ، قم بعمل قطع سطحي صغير.

بعد ذلك ، قم بتوجيه المقص إلى الفتحة وافتح الشفرات ببطء تحت الجلد لفصل مستويات الأنسجة. مع الحفاظ على الجلد مرفوعا ، قم بعمل قطع آخر بعناية سنتيمترا واحدا أسفل الفم. ثم قم بعمل شقين جانبيين ، أدنى ومتفوقين على القطع الأول.

الآن ، باستخدام الملقط ، اسحب الجلد برفق للوصول إلى تشريح الرأس والرقبة. تابع باستخدام مجهر تشريح بتكبير ثمانية أضعاف. باستخدام ملقط دقيق ، ارفع الغدة تحت الفك السفلي برفق لفضح العضلات تحت الحمراء الأربعة التي تغطي القصبة الهوائية.

تجنب تمزق أو تعطيل الأوعية الدموية المحيطة أو القنوات الإخراجية. في حالة جمع اللعاب من أكثر من فأر ، قم بإعداد جميع الفئران حتى هذه النقطة قبل المتابعة. يمكن لشخص واحد التعامل مع ما يصل إلى خمسة فئران في وقت واحد.

الآن ، لمواصلة الجراحة ، استخدم مقصا صغيرا لإزالة الجزء الإنسي من عضلات الحزام مع البقاء بالقرب من خط الوسط. قم بإزالة ما يكفي من العضلات لتصور القصبة الهوائية ومنع العضلات من التدخل في الإجراء. عند تشريح عضلات الحزام ، من المهم بشكل خاص تجنب وخز الأوعية القريبة.

يمكن أن يؤدي النك إلى استنفاد الحجم الثانوي للنزيف ، وبالتالي يجعل بيلوكاربين غير فعال في تحريض إفراز اللعاب. للمضي قدما ، اعكس عضلات الحزام بعيدا عن القصبة الهوائية لتصور الحنجرة والقصبة الهوائية والغدة الدرقية. تأكد من خلو القصبة الهوائية من الأنسجة المغطية.

أخيرا ، قم بعمل شق أفقي في القصبة الهوائية ، أدنى من الغدة الدرقية ، باستخدام مقص تشريح صغير ، وليس مشرط. تأكد من أن مجرى الهواء هذا حاصل على براءة اختراع وخالي من السوائل. لجمع اللعاب ، قم أولا بإزالة الشريط اللاصق بالقرب من الفم ، ثم قم بإمالة مرحلة التشريح عند 45 درجة لتوجيه تدفق اللعاب في الجمجمة.

بعد ذلك ، استخدم حقنة 0.5 ملليلتر بإبرة نصف بوصة قياس 29 لإدارة حقن بيلوكاربين داخل الصفاق. ثم ابدأ مؤقتا. إذا تم حقن عدة فئران ، فاعمل بسرعة بمساعدة المساعد.

بعد ذلك ، استخدم ملقطا قياسيا لفتح الفم وإحضار أنبوب شعري إلى موضعه. يجب أن تتشكل حبة من اللعاب في غضون بضع دقائق. ضع أحد طرفي الأنبوب الشعري في اللعاب ، وضع الطرف الآخر في أنبوب تجميع موجود أسفل مرحلة التشريح.

حسب الحاجة ، أعد وضع الأنبوب لسحب اللعاب. تجنب ملامسة الأنسجة المخاطية ، لأن المخاط قد يعيق المدخل. اجمع اللعاب لمدة 12 دقيقة من وقت الحقن.

يجب أن تظل الفغرة واضحة طوال الوقت. إذا كان الفأر يعاني من انخفاض وظيفة اللعاب ، فقم بنقل السوائل من فمه إلى أنبوب التجميع باستخدام ماصة دقيقة P200. استخدم دائما أنبوبا أو طرفا مختلفا لكل ماوس.

بعد الانتهاء من جميع المجموعات ، أعد وزن أوعية التجميع. بعد القتل الرحيم للفأر عن طريق الاختناق بثاني أكسيد الكربون ، قم بإجراء بضع الصدر بعناية ، وضع الفأر ضعيفا على مرحلة مجهر التشريح. بعد ذلك، أعد وضع الغدد في موقع الجراحة الأصلي.

أقل من ثمانية أضعاف التكبير, تصور الغدد الرئيسية, PG, SMG و SLG. PG منتشر ، ويتم وضعه بشكل جانبي للمسدس الرشاش و SLG. قم بتشريح PG أولا.

أمسك ذيل PG بالملقط ، واسحبه بعيدا عن الهياكل الأساسية. قم ببناء توتر لطيف ، ثم قم بقص رأس PG بمقص تشريح. بعد ذلك ، قم باختراق الكبسولة المحيطة بالمسدس الرشاش بالملقط.

ثم افصل برفق بين المسدس الرشاش الأيمن والأيسر. بعد ذلك ، حرر الجانب الظهري من SMG من الأنسجة غير الغدية المحيطة. لإزالة SMG ، شد قناة وارتون بالملقط ، وقم بقص القناة بمقص تشريح.

SLG في الجانب الفائق من SMG. لفصل الغدتين ، أمسك كل منهما بملقط منفصل ، وضع سنين واحد في مستوى الأنسجة بين الغدد. بعد ذلك ، قم ببناء التوتر ببطء ، وسوف تتفكك الغدتان تدريجيا.

بعد عزل الأنسجة الغدية ، أعد وزن أوعية التجميع على الفور. كعنصر تحكم إيجابي في التحليل ، تم تشعيع مسدس الرشاشات الفأرية ومقارنتها بالضوابط. بعد أسبوعين من أربعة أجزاء من الإشعاع عند 6.85 رمادي ، انخفضت وظيفة اللعاب بشكل كبير.

أظهر كل من إفراز اللعاب الكلي والإفراز الطبيعي للغدة الوزن الرطب أن القدرة الوظيفية اللعابية قد انخفضت ، مما يدل على حساسية الفحص. بعد ذلك ، تم تشريح SMGs. يمكن إصلاحها وتقسيمها وتلطيخها.

تم استخدام تلطيخ الهيماتوكسيلين والأيوزين لمقارنة الهندسة المعمارية الإجمالية مع أو بدون تحفيز بيلوكاربين. بالإضافة إلى ذلك ، تم تلطيخ الأنسجة بالمناعة لناقل كلوريد الصوديوم والبوتاسيوم الغشائي ، NKCC1. في أي من البقعة ، أظهرت الأنسجة مورفولوجيا خلوية مماثلة ، بغض النظر عن تحفيز البيلوكاربين.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تقييم وظيفة اللعاب في الفئران عن طريق تحفيز البيلوكاربين. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية الكاملة في أقل من ساعة. تسمح هذه الطريقة للباحثين في اللعاب بجمع اللعاب الكامل لتحديد وظيفة الغدة ، وعزل الغدد اللعابية الرئيسية الثلاث بشكل نظيف ومتكرر.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، خاصة مع أكثر من فأر واحد ، من المهم التحرك بسرعة ، وإنهاء جمع اللعاب في النقطة الزمنية الصحيحة. بعد هذا الإجراء ، يمكن تحديد التركيب ونشاط الإنزيم من اللعاب الكامل ، بينما يمكن معالجة الأنسجة الغدية للأنسجة أو التلوين المناعي.