نموذج حلقة معوية الواصلة في الدجاج الحرة تخديره الممرض محددة لدراسة كلوستريديوم بيرفرنجنز الفوعة

نقدم هنا بروتوكولا لإنشاء 'الحلقات الواصلة المعوية' جراحيا في الأمعاء الصغيرة الدجاج. يسمح هذا الإجراء للمقارنة بين سلالات كلوستريديوم بيرفرنجنز متعددة بضراوة في الموقع في مضيف واحد. ملحوظة هذا الأسلوب يقلل من عدد الدجاج اللازمة عادة لتجارب مماثلة في فيفو .

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث التهاب الأمعاء النخري للدجاج. مثل مقارنة الفوعة من سلالات Clostridium perfringens محددة تسبب هذا المرض. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يقلل بشكل ملحوظ من عدد الدجاج الضروري عادة لتجارب الأجواء المتشابهة.

في حين أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في إمكانات الفوعة من سلالات Perfringens كلوستريديوم، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على مسببات الأمراض المعوية الأخرى مثل كلوستريديوم difficile، أو السالمونيلا enterica. عموما، سوف الأفراد الجدد لهذه الطريقة النضال لأن العمليات الجراحية يحتاج إلى تدريب محدد ويجب أن يتم فقط من قبل أولئك الذين اكتسبوا مهارات مثل خياطة، وتقنيات قبل التجربة. بعد تخدير 10 أسابيع محددة ممرضة محددة الدجاج leghorn الحرة، وإعداد شاشات لقياسات حيوية والبدء في إزالة يدويا الريش من البطن عن طريق الجر لطيف.

بعد ذلك، فرك موقع الجراحة باستخدام جلوكونات الكلورهيكسيدين مع فرشاة شعيرات ناعمة. فرك بلطف الجلد من المركز إلى المحيط لمدة خمس دقائق دون عكس مسار. ثم, تنفيذ ثلاثة ممرات بالتناوب على موقع الجراحة مع حل غلوكونات الكلورهيكسيدين والكحول الأيزوبروبيل باستخدام الشاش المعقم.

مرة أخرى، انتقل من المركز إلى المحيط، ثم، ستائر الدجاج. تبدأ بفتح الستائر فوق موقع الجراحة، ثم جعل شق الجلد في خط الوسط منخفضة على شكل L مع مشرط رقم ثلاثة، بدءا من حضن سنتيمتر واحد إلى القص، وتنتهي في القرنية سنتيمتر واحد إلى cloicha. بعد ذلك، استمر في عمودي شق على شكل حرف L على الأول عن طريق القيام بشق ثان يبدأ في نهاية عناق الشق الأول ويستمر خمسة سنتيمترات إلى الجانب الأيسر من البطن باتباع خط الحوض.

هذا الافتتاح سوف يسمح بسهولة استخراج الأمعاء. بعد ذلك، افتح عضلات الصفاق والبطن باستخدام نفس النمط على شكل حرف L للوصول إلى تجويف البطن. سوف تتعرض الآن الحويصلات الهوائية ويجب أن تبقى رطبة باستخدام الشاش المحلى المنقوع.

بعد ذلك ، أدخل هوك Snook spay في تجويف البطن باتباع جدار البطن الأيسر والعمل على ربط حول الحويصلات الهوائية البطنية لاستخراج الأمعاء. ثم، وذلك باستخدام الشاش الجاف، ومواصلة التزيين بلطف الأمعاء لفضح Jejunum. تنتشر خارج الأمعاء والاحتفاظ بها رطبة مع رش متكررة مع المالحة وعن طريق تغطيتها مع الشاش المبلل المنقوع.

من المهم أن تكون لطيف جدا في حين أخذ الأمعاء بسبب التوتر المفرط يمكن أن تمزق الأوعية mesenteric التي قد تؤدي إلى آفات نقص تروية الأمعاء وتهين إلى حد كبير نتيجة الإجراء. بعد الأمعاء الخارج، وجعل سلسلة من الحلقات في الأمعاء ابتداء من Jejunum. يمكن استخدام كل حلقة لعلاج مختلف.

في Jejunum القريبة، ضع رباط بسيط مع مادة متعددة الألياف الاصطناعية للامتصاص الاصطناعية مع تجنب ربط الأوعية الرئيسية المينتونية. بعد ذلك، ضع رباطًا ًا ً فصّلاً على بعد سنتيمترين من الرباط القريب لإكمال الحلقة الأولى. يجب أن تكون جميع الأربطة القريبة والمسافات متباعدة بنحو سنتيمترين.

كل زوج من الأربطة يجعل حلقة، وهو جزء محكم. بعد ذلك، إنشاء interloop أو قطعة من الأمعاء بين الحلقات. ضع رابطة بسيطة نصف سنتيمتر على حدى إلى الرباط الثنية للحلقة الأولى.

هذا الربط هو في منتصف interloop وسوف تقلل من التلوث عبر ممكن بين الحلقات. الآن ، ومواصلة نمط خلق حلقة أخرى نصف سنتيمتر aborely من ربطة عنق interloop. هنا، يتم إنشاء تسع حلقات وثمانية interloops تغطي 26 سنتيمترا من الأمعاء.

يمكن ضبط عدد الحلقات حسب الحاجة. المقبل، والمضي قدما في حقن سلالة من Perfringens كلوستريديوم في الحلقات. في الجانب المضاد للميناتاريا من الحلقة ، استخدم إبرة قياس 26 بزاوية 45 درجة لحقن 0.2 ملليلتر من محلول BHI ، يحتوي على مليون وحدة مستعمرة تشكل البكتيريا في مرحلة نمو منتصف الجلد.

في هذه الحالة، مع تسع حلقات، يتم حقن خمس سلالات مختلفة في حلقات بالتناوب مع الحلقات المتدخلة حقنها مع السيارة وحدها كضوابط سلبية. بعد حقن مسببات الأمراض ، استبدل بلطف الأمعاء إلى منطقة الظهر في تجويف البطن تحت الحويصلات الهوائية. ثم أغلق تجويف البطن.

خياطة البريتوني وعضلات البطن على طول الحوض مع نمط خياطة مستمرة بسيطة باستخدام مادة متعددة الألياف الاصطناعية للامتصاص. الاستمرار عن طريق خياطة البريتون وعضلات البطن من القص إلى كليش باستخدام خيوط مستمرة بسيطة. المقبل، خياطة الجلد إغلاق باستخدام مادة متعددة الألياف الاصطناعية متعدد الألياف ونمط بسيط مستمر.

أولا، خياطة على طول الحوض، ثم خياطة من القص إلى كليش. بعد إغلاق الشقوق، والحفاظ على الدجاج تحت التخدير العام مع الاستخدام السليم للمسكنات لتقليل آلام الحيوان خلال وقت العدوى. مواصلة مراقبة التخدير لضمان مستوى التخدير الكافي.

بعد المبلغ المطلوب من وقت العدوى، مثل سبع ساعات في التجربة الحالية، euthanize الطيور وجمع الأنسجة المعوية. باستخدام مشرط رقم ثلاثة، وقطع من نصف إلى مقطع حلقة سنتيمتر واحد. ثم، نقل القسم إلى 10٪ Formalin لتثبيت بين عشية وضحاها ومزيد من تحليل الهدولوجي.

ثم، استخدم نفس شفرة مشرط على نفس الحلقة لقطع ما تبقى من الحلقة ونقل تلك الأنسجة إلى أنبوب دقيق لعزل البكتيريا. كرر هذا الإجراء لكل حلقة باستخدام شفرة مشرط جديدة في كل مرة. بعد سبع ساعات من الحقن ، تحتوي حلقة الأمعاء التي يتم حقنها بوسيلة معقمة للتحكم على حد فرشاة مخاطية سليمة مع عدم وجود نخر.

احتقان خفيف في الطبقات المعوية من شرائح ليس من غير المألوف. سبع ساعات بعد الحقن مع الممرض، كلوستريديوم perfringens، وتتآكل نصائح الزغب مع مواقع دخول نخرية المحيطة نصائح. ثم المواد النخرية المحيطة الزغب، وهناك مجموعات من البكتيريا على شكل قضيب كبير.

في بعض الأحيان نخر هو بسبب سوء التنفيذ الإجرائية ويمكن أن يساء تفسيره على أنها آفات تنتجها البكتيريا. علامات تنبئ هي عدم وجود البكتيريا في قسم النسيج. أيضا ، يتم توسع الأوعية الدموية في الطبقة العضلية بشدة من تراكم العديد من الكريات الحمراء المتحللة التي تدل على احتقان الأوعية الدموية.

كان هذا بسبب الأوعية الدموية الميسنتة التي من المرجح أن تكون مُلَكّلة للقيام بإجهاد جسدي مفرط على الأمعاء. يمكن التعرف بسهولة على الحلقات الإقفاريّة المجهرية أثناء العمليات الجراحية. بعد احتقان الأوعية الدموية الشديدة بعد بضع دقائق من الرباط، وسوف يكون سيروزا الأزرق الداكن بدلا من التلوين الوردي المحمر العادي.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء حلقات الأمعاء متعددة في نموذج الدجاج عن طريق وضع الأربطة على الأمعاء. مرة واحدة يتقن العمليات الجراحية، باستثناء وقت العدوى، يمكن أن يتم في أقل من ثلاث ساعات، إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر للحفاظ على الدجاج تحت التخدير العميق للسيطرة على الألم ومراقبة العلامات الحيوية خلال جميع الإجراءات، بما في ذلك الجزء الجراحي وبعد وقت العدوى.

بعد هذا الإجراء أو أساليب مثل العزل البكتيري، وتحديد مستقيم مثل الكشف الجيني عن طريق PCR يمكن أن يتم من أجل الإجابة على الأسئلة الخارجية مثل الانتعاش وتحديد مسببات الأمراض حقن الأولية. بعد هذا التطور، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال Clostridium perfringens التسبب في الأمراض لاستكشاف التهاب الأمعاء النخري في الدجاج. لا تنسى أن العمل مع الحيوانات الحية يمكن أن يكون متغير للغاية.

وينبغي دائما الاحتياطات مثل الرصد التخدير المستمر للدجاج أن يتم أثناء تنفيذ هذا الإجراء.