طريقتين ديسيلولاريزيشن أنسجة النباتية لتطبيقات هندسة الأنسجة

يمكن أن تساعد هذه الأساليب في معالجة الأسئلة الرئيسية في مجال المواد الحيوية مثل تطوير سقالة ذات قدرات ممتازة لنقل السوائل مع هياكل فائقة متطورة وتصنيع قابل للتطوير. الميزة الرئيسية لهذه التقنيات هي أنه يمكن تطبيقها على معظم النباتات للأنسجة الجذعية دون الحاجة إلى معدات متخصصة. أولا ، اجمع عينات طازجة أو مجمدة من أوراق F.hispida.

قم بتخزين أي عينة طازجة متبقية عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لاستخدامها في المستقبل. دع الورقة تبقى في ماء منزوع الأيونات عند 20 إلى 25 درجة مئوية. استخدم لكمة خزعة نظيفة لتقطيع الورقة إلى أقراص قطرها ثمانية ملليمترات.

بعد ذلك ، لغسل عينات الأوراق ، احتضنها على طبق رج بسرعة منخفضة لمدة خمس إلى 10 دقائق ، في ماء منزوع الأيونات. ثم تحضير 10٪ من الوزن من حيث حجم SDS في الماء منزوع الأيونات. بعد تحضير محلول SDS ، ضع عينات الأوراق على طبق بلاستيكي.

ثم أضف محلول SDS لتغطية العينات بالكامل. ضع عينات الأوراق الناشئة SDS ، مغطاة ، على صفيحة رج لمنع التبخر. ثم احتضان عينة الورقة في درجة حرارة الغرفة لمدة خمسة أيام.

بعد خمسة أيام من الحضانة ، استبدل محلول SDS بالماء منزوع الأيونات. احتضان العينات المنقوعة في ماء منزوع الأيونات لمدة 10 إلى 15 دقيقة على طبق رج. بعد ذلك ، امزج خمسة ملليلتر من الفاعل بالسطح غير الأيوني مع 50 مل من المبيض.

أضف هذا الخليط إلى 445 مل من الماء منزوع الأيونات. ثم قم بإخراج العينات في محلول التبييض الخافض للتوتر السطحي غير الأيوني المحضر حديثا. استمر في تغيير محلول التبييض الخافض للتوتر السطحي غير الأيوني كل 24 ساعة حتى يتم مسح العينات.

ثم اترك العينات التي تم تطهيرها في ماء منزوع الأيونات لمدة دقيقتين على طبق رج. لإزالة الخلايا الخالية من المنظفات ، قم بإعداد خمسة بالمائة من حجم التبييض بحجم 3٪ من محلول بيكربونات الصوديوم بالوزن من حيث الحجم. بعد ذلك ، قم بتسخين المحلول إلى 60 إلى 70 درجة مئوية على صفيحة ساخنة داخل غطاء الدخان.

بمجرد أن يصل المحلول إلى درجة الحرارة المطلوبة ، انقع عينات الأوراق. ثم قلل من سرعة لوحة التحريك لمنع إتلاف العينات وابحث عن العينات التي تم تطهيرها بشكل واضح ونقلها من الحمام بعناية. أخيرا ، احتضان العينات في ماء منزوع الأيونات لمدة دقيقة إلى دقيقتين.

نظرا لأن جميع العينات مختلفة جوهريا ، فمن المستحسن التحقق من تقدم إزالة الخلايا كل 15 دقيقة تقريبا للتأكد من عدم تلف العينات. تمت دراسة معلمات MTM و SAF و UTS لأول مرة للتحقيق في خصائص السقالة المنزوعة الخلايا الفريدة لكل من أنواع P.aquatica و F.hispida. في الواقع ، تعرض جميع المعلمات الثلاثة خصائص ميكانيكية متشابهة باستخدام كل من طرق إزالة الخلايا القائمة على المنظفات والخالية من المنظفات.

ومع ذلك ، فإن الخاصية الميكانيكية UTS ل F.hispida تظهر متوسط قيمة أعلى بكثير باستخدام SDS بدلا من التبييض لإزالة الخلايا. كما يتم تقليل محتوى الحمض النووي الجيني للأنواع النباتية التي تمت تطهيرها والتي تمت دراستها بشكل كبير عند إزالة الخلايا عند مقارنتها بالعينات غير المنزوعة الخلايا. بعد ذلك ، يتم قياس النشاط الأيضي للأرومات الغدة الدرقية الجلدية البشرية أيضا في وجود سقالات P.aquatica أو Garcinia منزوعة الخلايا.

ومن المثير للاهتمام ، أن السقالات الخالية من المنظفات أثارت تأثيرا منخفضا على نشاط التمثيل الغذائي الخلوي ، لكن الغسيل باستخدام محلول ثلاثي هيدروكلوريد ، متبوعا بوسط خال من المصل بعد إزالة SDS يقلل من التأثير على نشاط التمثيل الغذائي الخلوي عند مقارنته بالغسيل بالماء منزوع الأيونات وحده. أخيرا ، يظهر هنا نمو الخلايا الجذعية الوسيطة الملطخة بالكالسين على سطح هيكل ورقة F.hispida. بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنيات من حوالي سبعة أيام إلى أقل من 15 دقيقة عند إجراؤها بشكل صحيح.

عند تنفيذ هذه الإجراءات ، من المهم أن تتذكر مراقبة العينات أثناء إزالة الخلايا لأن العينات يمكن أن تختلف من دفعة إلى أخرى مما قد يؤدي إلى أوقات مقاصة مختلفة. باتباع هذا الإجراء ، يمكن تطبيق طرق أخرى مثل التقليل الكمي أو الاختبار الميكانيكي للإجابة على أسئلة إضافية مثل إلى أي مدى يتم مسح العينات والأنسجة الأخرى التي تشبه العينات ميكانيكيا. بعد تطويرها ، ساعدت هذه التقنية في تمهيد الطريق للباحثين في مجال هندسة الأنسجة لتصنيع سقالات قابلة للانزعاج.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إزالة الخلايا من الأنسجة النباتية لاستخدامها كسقالات. لا تنس أن العمل مع المنظفات وأبخرة التبييض يمكن أن يكون خطيرا ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل استخدام معدات الحماية المناسبة واستخدام غطاء الدخان أثناء تنفيذ هذه الإجراءات.