ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ونحن ممتنون كارين وينتيرهالتير و Semmler كرستين للمساعدة التقنية. وأيد هذا العمل مجموعة التميز برينلينكس-برينتولس (EXC 1086) مؤسسة البحوث الألمانية.

وقد وافقت كافة الأساليب التي تنطوي على الحيوانات التي تعيش فرايبورغ Regierungspräsidium وفقا "القانون الألماني لرعاية الحيوان".
1-الأعمال التحضيرية
<ol><li>تصميم وبناء أداة مناسبة إدراج عابر يحمل المسبار السليكون والموصل الكهربائي أثناء عملية زرع. انظر الشكل 1 لأداة إدراج مبنية مخصصة مثال.</li>
	<li>عناية تحرير الموصل المسبار والقطب السليكون من التعبئة والتغليف باستخدام الملقط مقلوب السيراميك.</li>
	<li>رفع المجلس موصل وإصلاحه بشكل أمن مع المشبك تمساح يعلق على موقف.</li>
	<li>استخدام ستيريوسكوبي، محاذاة التحقيق مع أداة الإدراج مع الملقط مقلوب السيراميك. تطبيق طبقة ~ 2 مم من شمع البارافين ذاب مع كوتيريزير الغراء المسبار إلى أداة الإدراج. الحرص على عدم لمس شانكس التحقيق أثناء هذا الإجراء.</li>
	<li>إصلاح للموصل الكهربائي برمح الأداة الإدراج باستخدام شريط لاصق القياسية. علما أنه حسب الشركة المصنعة، قد يلزم الأسلاك الأرضية يكون ملحوم إلى مجلس الموصل الكهربائي قبل غرس. إزالة العزل من قطعتين قصيرة من الأسلاك النحاسية المعزولة الورنيش باستخدام القصدير اللحام تطبيقها لحام حديد (400 درجة مئوية). لحام الأسلاك الأرضية بفتحات المناسبة في مجلس الموصل الكهربائي.</li>
	<li>إزالة عزل قطعتين إضافية من الأسلاك النحاسية. التفاف كل الأسلاك النحاسية العارية ثلاث مرات حول المسمار فولاذ المقاوم للصدأ (قطرها 1 مم، وطول 2 ملم). تطبيق التمويه مناسبة للحام الصلب ولحام الأسلاك النحاسية إلى الجزء السفلي من غطاء المسمار. تأكد من أن الجزء السفلي نصف رفات المسمار الخيط مجاناً للحام القصدير.</li>
	<li>استخدام متعدد قياسية للتحقق من وجود تماس كهربائي بين السلك والمسمار.</li>
	<li>تطهير شانكس المسبار السليكون ومسامير الأرض بالانغماس في الإيثانول 70% (10 ق).</li>
	<li>إعداد غطاء حماية لزرع المسبار بقطع رأس البلاستيك ماصة باستور في نصف.</li>
</ol>2. جراحة زرع
<ol><li>تعقيم الأدوات الجراحية (مقص، ملقط الجميلة ذات الرؤوس، والمشابك الجراحية) مع معقم حبة ساخنة. مسح جميع الأسطح مع الإيثانول 70%.</li>
	<li>حمل التخدير مع إيسوفلوراني 3% في الأوكسجين وألقى في ~ 1 لتر في الدقيقة.<ol>
<li>للصيانة، واستخدام إيسوفلوراني 1-1، 5%. علما بأن تركيز isoflurane المطلوبة لتحقيق التسامح الجراحية يمكن أن تختلف من الحيوان للحيوان.</li>
		<li>ويتحقق التسامح الجراحية مستقرة عند الحيوان لا تستجيب معسر أخمص القدمين. رصد معدل التنفس للماوس وضبط تركيز isoflurane إذا لزم الأمر.</li>
		<li>تطبيق مرهم عيون الحيوان لمنع الجفاف.</li>
	</ol>
</li>
	<li>جبل الماوس في إطار ستيريوتاكسيك بإدراج أشرطة الإذن بلطف في قناة الإذن. مرة واحدة واستقرت رأس الماوس بأشرطة الإذن، ضع قطعة فم على الآنف لتسليم isoflurane المستمر. ضع الماوس على وسادة أو منشفة على وسادة تدفئة وحقن البوبرينورفين تحت الجلد (0.05-0.1 مغ/كغ وزن الجسم) لضمان التسكين بعد العملية الجراحية.</li>
	<li>حلق الرأس مع آلة حلاقة قياسية وتطهير الجلد مع الإيثانول 70%. باستخدام مقص جراحي، جعل شق في الجلد على طول خط الوسط من الجمجمة وفتح الجلد باستخدام المشابك الجراحية.</li>
	<li>قم بمحاذاة رأس الحيوان مع المعونة من أداة المحاذاة ستيريوتاكسيك بريجما المستوى وامدا. وينبغي أن يكون هناك أقل من 50 ميكرون من إزاحة الارتفاع بين بريجما وامدا. وعلاوة على ذلك، تحديد مستوى سطح الرأس على طول المحور ميديولاتيرال بقياس العمق من بريجما في الجمجمة في المسافات والأيسر (مثلاً، 1 مم غادر وحق بريجما). ضبط إمالة الرأس إذا لزم الأمر.</li>
	<li>تنظيف الرأس مع بيروكسيد الهيدروجين 3% والقضاء على الجفاف مع مناديل معقمة القطن.</li>
	<li>تحديد موقع اوديما بالنسبة إلى بريجما باستخدام طائرة مناسبة أطلس ستيريوتاكسيك12.</li>
	<li>استخدام رأس حفر 0.9 ملم، حفر ثقوب المسمار اثنين في العظام خلال المخيخ مكان مسامير الأرض ومرجع. بالإضافة إلى ذلك، 1-3 ثقوب للمسامير ترسيخ مرغوب فيه لتحقيق الاستقرار في عملية الزرع. موقع مسامير الربط سيعتمد على موقع اوديما. لغرس في الحصين، مكان مسامير ربط أكثر contralateral الجدارية وعن القشرة الأمامية. إدخال المسامير في العظام باستخدام مفك براغي مناسبة. الحرص على عدم اختراق الدماغ.</li>
	<li>أداء اوديما ببطء رقيق الجمجمة بالحفر في منطقة مستطيلة حول الجانب غرس. وكثيراً ما ترطيب العظام مع الفوسفات تعقيم المخزن المؤقت (الجريدة الرسمية). يمكن اخترقت الجمجمة ضعفت المتبقية بلطف وإزالتها مع المعونة من إبرة حقن (27 ز) غرامة وزوج من ملاقط.</li>
	<li>بيرس بعناية الأم الجافية بإبرة حقن (27 ز) رقيقة. شكل هوك صغيرة عن طريق ثني طرف الإبرة مع زوج من ملاقط وسحب دوراً للإزالة. تطبيق الجريدة الرسمية لمنع جفاف سطح الدماغ.</li>
	<li>تحميل الأداة الإدراج القطب على حامل ستيريوتاكسيك وصفر التحقيق في بريجما وحرك اوديما التحقيق إلى إحداثيات ستيريوتاكسيك. اختراق سطح الدماغ ببطء. تأكد من عدم ثني مهاوي التحقيق. تجنب زرع عن طريق الأوعية الدموية.</li>
	<li>انخفاض ببطء التحقيق حتى ~ 200 ميكرومتر أعلاه العمق المطلوب. تغطية اوديما والسيقان المسبار السيليكون مع فازلين معقم للحماية. تطبيق الأسمنت الأسنان لإصلاح القاعدة للتحقيق معه لترسيخ المسمار في الجمجمة.</li>
	<li>الحق بعد تطبيق الأسمنت، تتحرك ببطء التحقيق بعمق الهدف. تتقدم ميكرومتر آخر 200 ~ بعد تطبيق الأسمنت يقلل من الحركة الجانبية للتحقيق ويضمن تلف الأنسجة الحد الأدنى في المنطقة المستهدفة. علما بأن فترة علاج من الأسمنت المستخدمة يمكن أن تؤثر على هذه الخطوة من البروتوكول. بسرعة علاج الأسمنت، تجاهل هذه الخطوة وزرع مباشرة التحقيق بعمق الهدف تجنبا للأضرار بالتحقيق السليكون.</li>
	<li>بعد وقد شُفي الأسمنت، الإفراج عن التحقيق من أداة الإدراج قبل ذوبان الشمع مع كوتيريزير.</li>
	<li>إطلاق المجلس موصل من الجهاز الإدراج ووضعه في مكان مناسب في الجمجمة باستخدام المشبك التماسيح إرفاق إلى مؤشر الإدراج. في حالة زرع التحقيق إلى الحصين، وضع المجلس موصل على العظم الجداري كونترالاتيرال. إصلاح المجلس موصل الجمجمة باستخدام الأسمنت الأسنان.</li>
	<li>لحام أسلاك أرضية ومرجعية المجلس موصل بأسلاك تعلق على مسامير اثنين على المخيخ.</li>
	<li>تقليم الغطاء الواقي للطول الصحيح ووضعه على التحقيق السليكون. إصلاح الغطاء إلى المجلس موصل والجمجمة باستخدام أسمنت الأسنان، تجنب الجلد حول الجمجمة المكشوفة. خياطة الجلد حول الموقع غرس عادة غير مطلوب.</li>
</ol>3-الإنعاش بعد الجراحة
<ol><li>تطبيق العلاج مسكن مناسب لمدة يومين على الأقل (مثلاً تحت الجلد حقن البوبرينورفين كل ح 6 خلال النهار وفي مياه الشرب بين عشية وضحاها جنبا إلى جنب مع والايبوبروفين (4-5 ملغ/كغ من وزن الجسم) تحت الجلد كل 24 ساعة). واحد-الإسكان يوصي بمنع الأضرار بعملية الزرع.</li>
	<li>السماح بأسبوع واحد على الأقل للتعافي. التشاور مع المبادئ التوجيهية لرعاية الحيوانات المحلية.</li>
</ol>4. الحصول على البيانات
<ol><li>سجل لفبس من الانتقال بحرية الفئران باستخدام نظام حيازة بيانات مناسبة متصلة عن طريق مبدلة. للحصول على لفبس، استخدام تردد أخذ عينات من 1-5 كيلو هرتز. معدلات أخذ العينات (20-30 كيلو هرتز) مطلوبة إذا التصريفات وحدة واحدة أن يسجل جنبا إلى جنب مع طابعات الحجم الكبير.</li>
	<li>تخزين الملفات الخام تسجيل القنوات الفردية للتحليل دون اتصال.</li>
</ol>5-علم الأنسجة
<ol><li>بعد انتهاء التسجيل، عميق تخدير الحيوان (مثل 2 غ/كغ الجسم الوزن يوريتان حقن إينترابيريتونيلي). وتؤكد الدولة مخدر بعدم الرد على أخمص القدمين معسر.</li>
	<li>نتخلل ترانسكارديالي الماوس مع المثلج مخزنة الفوسفات المالحة (~ 1 دقيقة) تليها بارافورمالدهيد 4% (~ 10 دقيقة) باستخدام أساليب نضح إينتراكارديال القياسية13. قبل التروية، ليسيونينج كهربائياً من مواقع التسجيل قد التي يؤديها (مثلاً عن طريق تطبيق الخامس 10-20 من الجهد المستمر ليصل إلى 1 s). بدلاً من ذلك، تطبيق الأصباغ الفلورية نصائح عرقوب قبل غرس يمكن استخدامها لتحديد المسار. ويوصي باختبار الأساليب المختلفة للتعرف على مواقف قطب كهربائي للحصول على أفضل النتائج مع أنواع مختلفة من المجسات السليكون.</li>
	<li>قص أجزاء الدماغ (~ 100 ميكرومتر) ووصمة عار الشرائح مع 4-6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI، 1 ميكروغرام/مل) تليها ثلاث خطوات الغسيل في الجريدة الرسمية (كل 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة).</li>
	<li>وضع المقاطع على شريحة مجهر وتطبيق قطره من تضمين المتوسطة ويشمل القسم كشف الغطاء. واسمحوا التضمين متوسطة الجافة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>استخدام ابيفلوريسسينسي أو [كنفوكل] مجهر مسح ليزر، تحديد مواقع التسجيل.</li>
	<li>لمحاولة استرداد المسبار السيليكون لاستخدامها مرة أخرى، إجراء التحقيق مع المشبك التماسيح والإفراج عن التحقيق من سكل بعناية ذوبان الأسمنت الأسنان لحام حديد (400 درجة مئوية). الحرص على عدم لمس شانكس التحقيق أثناء هذا الإجراء!</li>
	<li>أغسل المسبار في الماء المقطر الساخن (~ 80 درجة مئوية، 15 دقيقة) تليها حل الانزيمية (1% تيرجازيمي في الماء المقطر، 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة) والغسيل آخر خطوة في الماء المقطر (15 دقيقة). علما أن معدل نجاح الانتعاش مسبار منخفضة.</li>
</ol>6-لجنة التنمية المستدامة التحليل
<ol><li>استخدام بيئة تحليل مناسبة (مثل بيثون)، تحويل بيانات طابعات الحجم الكبير شأنك الفردية إلى لجنة التنمية المستدامة التي تقارب المشتقة الثانية المكانية على طول الساق <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57714/57714eq1.jpg"> حيث طابعات الحجم الكبيرn, t هو إشارة طابعات الحجم الكبير على مسرىth nعند الزمن t و Δz هو التباعد بين القطب. لاحظ أن سبب n-1 وعمليات n+ 1، يتعذر تقدير لجنة التنمية المستدامة أقطاب الأول والأخير عرقوب، التي يجب أن تؤخذ قيد النظر أثناء موضع التحقيق. تنفيذ الصيغة تقريب استخدام قطعة قصيرة من التعليمات البرمجية التي يحسب إشارة لجنة التنمية المستدامة لكل قطب كهربائي أثناء التكرار مع مرور الزمن (انظر ملف التعليمات البرمجية الإضافية).</li>
	<li>استخدام إشارة لجنة التنمية المستدامة التي تم الحصول عليها لمزيد من التحليل (مثلاً، دراسة نطاقات الترددات المحددة من ذبذبات الدماغ عن طريق تطبيق عوامل تصفية تمرير النطاق).</li>
</ol>

<ol><li>Buzsáki, G., Draguhn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+oscillations+in+cortical+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neuronal oscillations in cortical networks.</a> Science. 304 (5679), 1926-1929 (2004).</li>
<li>Keefe, J., Recce, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+relationship+between+hippocampal+place+units+and+the+EEG+theta+rhythm%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm.</a> Hippocampus. 3 (3), 317-330 (1993).</li>
<li>Benchenane, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coherent+theta+oscillations+and+reorganization+of+spike+timing+in+the+hippocampal-prefrontal+network+upon+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Coherent theta oscillations and reorganization of spike timing in the hippocampal-prefrontal network upon learning.</a> Neuron. 66 (6), 921-936 (2010).</li>
<li>Jadhav, S. P., Kemere, C., German, P. W., Frank, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Awake+hippocampal+sharp-wave+ripples+support+spatial+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Awake hippocampal sharp-wave ripples support spatial memory.</a> Science. 336 (6087), 1454-1458 (2012).</li>
<li>Yamamoto, J., Suh, J., Takeuchi, D., Tonegawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+execution+of+working+memory+linked+to+synchronized+high-frequency+gamma+oscillations%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Successful execution of working memory linked to synchronized high-frequency gamma oscillations.</a> Cell. 157 (4), 845-857 (2014).</li>
<li>Karalis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4-Hz+oscillations+synchronize+prefrontal-amygdala+circuits+during+fear+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">4-Hz oscillations synchronize prefrontal-amygdala circuits during fear behavior.</a> Nature Neuroscience. 19 (4), 605-612 (2016).</li>
<li>Khodagholy, D., Gelinas, J. N., Buzsáki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning-enhanced+coupling+between+ripple+oscillations+in+association+cortices+and+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Learning-enhanced coupling between ripple oscillations in association cortices and hippocampus.</a> Science. 358 (6361), 369-372 (2017).</li>
<li>Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+extracellular+fields+and+currents--EEG%2C+ECoG%2C+LFP+and+spikes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The origin of extracellular fields and currents--EEG, ECoG, LFP and spikes.</a> Nature Reviews Neuroscience. 13 (6), 407-420 (2012).</li>
<li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex%3A+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomena%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomena.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li>
<li>Lasztóczi, B., Klausberger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layer-specific+GABAergic+control+of+distinct+gamma+oscillations+in+the+CA1+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Layer-specific GABAergic control of distinct gamma oscillations in the CA1 hippocampus.</a> Neuron. 81 (5), 1126-1139 (2014).</li>
<li>Strüber, M., Sauer, J. -F., Jonas, P., Bartos, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distance-dependent+inhibition+facilitates+focality+of+gamma+oscillations+in+the+dentate+gyrus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Distance-dependent inhibition facilitates focality of gamma oscillations in the dentate gyrus.</a> Nature Communications. 8 (1), 758(2017).</li>
<li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , Academic Press, Elsevier. (2007).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).</li>
<li>Kajikawa, Y., Schroeder, C. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22153379">How local is the local field potential?</a> Neuron. 72 (5), 847-858 (2011).</li>
<li>Berens, P., Keliris, G. A., Ecker, A. S., Logothetis, N. K., Tolias, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feature+selectivity+of+the+gamma-band+of+the+local+field+potential+in+primate+primary+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Feature selectivity of the gamma-band of the local field potential in primate primary visual cortex.</a> Frontiers in Neuroscience. 2 (2), 199-207 (2008).</li>
<li>Lastóczi, B., Klausberger, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28391402">Distinct gamma oscillations in the distal dendritic field of the dentate gyrus and the CA1 area of mouse hippocampus.</a> Brain Structure and Function. 222 (7), 3355-3365 (2017).</li>
<li>Nguyen Chi, V., Müller, C., Wolfenstetter, T., Yanovsky, Y., Draguhn, A., Tort, A. B. L., Brankačk, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+respiration-driven+rhythm+distinct+from+theta+oscillations+in+awake+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hippocampal respiration-driven rhythm distinct from theta oscillations in awake mice.</a> Journal of Neuroscience. 36 (1), 162-177 (2016).</li>
<li>Chung, J., Sharif, F., Jung, D., Kim, S., Royer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-drive+and+headgear+for+chronic+implant+and+recovery+of+optoelectronic+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Micro-drive and headgear for chronic implant and recovery of optoelectronic probes.</a> Scientific Reports. 7 (1), 2773(2017).</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

أدلة متزايدة تشير إلى أن ذبذبات الدماغ في الدوائر العصبية هيبوكامبال تحدث في النطاقات المكانية المنفصلة10،،من1116. تحليل لجنة التنمية المستدامة يخفض بشكل كبير تأثير حجم التوصيل، شرطا حاسما لدراسة الأحداث المحلية التذبذب. مع هذا الفيديو، ونحن توفير دليل لغرس المسابير السليكون في الحصين الماوس لتحليل بيانات لجنة التنمية المستدامة. نعرض أمثلة من إشارات لجنة التنمية المستدامة من تموجات موجه حادة في CA1 وذبذبات غاما المترجمة في المغز...

التذبذبات في طابعات الحجم الكبير خطيرة تشترك في معلومات معالجة بواسطة الدوائر العصبية. وهي تغطي طائفة واسعة من الترددات، تتراوح بين موجات بطيئة (~ 1 هرتز) تموج بسرعة ذبذبات (~ 200 هرتز)1. نطاقات التردد متميزة ترتبط بالوظائف المعرفية بما في ذلك الذاكرة والمعالجة العاطفية، والملاحة2،3،،من45،،من67. تدفق التيار عبر أغشية الخلايا العصبية تشكل الجزء الأكبر من إشارة طابعات الحجم الكبير8. الكاتيونات دخول الخلية (مثلاً عن طريق تنشيط نهايات ضادات جلوتاماتيرجيك) تمثل المصارف الحالية نشطة (كما يترك تهمة المتوسطة خارج الخلية). وفي المقابل، يصور التدفق الصافي مقابل إيجابية إلى الوسط خارج الخلية، على سبيل المثال بالتنشيط من الاشتباكات العصبية المثبطة جابايرجيك، مصدر الحالية نشطة في هذا الموقع. في قطبانيه العصبية، المقترنة المصارف الحالية مع مصادر سلبية، والعكس بالعكس بسبب تعويض التيارات التي تؤثر على الغشاء المسؤول في مواقع بعيدة.
يمكن أن يؤدي أيضا إلى الجهد الكبير أو في قطب تسجيل مجال الكهربائية التي تنتجها العمليات العصبية البعيدة وقد وبالتالي يعتبر كذبا كحدث محلي. هذا التوصيل الحجم يشكل تحديا خطيرا لتفسير الإشارات طابعات الحجم الكبير. تحليل لجنة التنمية المستدامة يوفر معلومات حول المصارف الحالية المحلية والمصادر الأساسية لطابعات الحجم الكبير إشارات، ويشمل ذلك وسيلة الحد من تأثير حجم التوصيل8. في هياكل مغلفة مثل قرن آمون، ويمكن الحصول أحادي البعد لجنة التنمية المستدامة إشارات المشتقة المكانية الثانية من طابعات الحجم الكبير سجل من مسافة واحدة أقطاب ترتيب عمودي إلى طائرات الصفحي9. أتاح ظهور المسابير السليكون الخطية المتاحة تجارياً الباحثين استخدام أسلوب لجنة التنمية المستدامة لدراسة النشاط المحلي التذبذب في قرن آمون. على سبيل المثال، وقد ثبت أن ذبذبات غاما متميزة تبرز بصورة خاصة بطبقة في المنطقة CA110. علاوة على ذلك، حددت لجنة التنمية المستدامة تحليل المستقلة بؤر النشاط غاما في الطبقة الرئيسية الخلية المغزلي المسنن11. الأهم من ذلك، كانت هذه النتائج الظاهر في لجنة التنمية المستدامة المحلية ولكن ليس في طابعات الحجم الكبير إشارات فقط. وهكذا يوفر تحليل لجنة التنمية المستدامة أداة قوية لاكتساب المعرفة في عمليات سليكون الحصين.
في هذا البروتوكول، ونحن توفير دليل شامل للحصول على إشارات لجنة التنمية المستدامة أحادي الأبعاد مع تحقيقات السليكون. هذه الأساليب سوف تمكن المستخدمين من التحقيق في أحداث التذبذب المترجمة في قرن آمون الفئران يتصرف.

<table><tbody><tr><td>المشبك التمساح مع حامل</td><td>Reichelt Elektronik</td><td>HALTER ZD-10D</td><td></td></tr><tr><td>مسبار السيليكون</td><td>Cambridge Neurotech</td><td>P-series 32</td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Olympus</td><td>SZ51</td><td></td></tr><tr><td>الأسلاك النحاسية المعزولة بالورنيش</td><td>B &uuml ؛ rklin Elektronik</td><td>89 F 232</td><td></td></tr><tr><td>مسامير أرضية</td><td>مسامير & أكثر GmbH (screwsandmore.de)</td> <td>DIN 84 A2 M1x2</td><td></td></tr><tr><td>Flux</td><td>Stannol</td><td>114018</td><td></td></tr><tr><td>ملقط سيراميك ذو رؤوس</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11210-60</td><td></td></tr><tr><td>شمع بارافين</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>327204</td><td></td></tr> أدوات <tr><td></td><td>العلوم الدقيقة</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>لحام الحديد</td><td>Kurtz Ersa</td><td>OIC1300</td><td></td></tr><tr><td>المتر المتعدد</td><td>Uni-T</td><td>UT61C</td><td></td></tr><tr><td>الإيثانول</td><td>كارل روث</td><td>9065.1</td><td></td></tr><tr><td>ماصات باستور</td><td>كارل روث</td><td>EA65.1</td><td></td></tr><tr><td>معقم حراري</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>إطار مجسم</td><td>ديفيد كوب</td><td>موديل 1900</td><td></td></tr><tr><td>حامل قطب كهربائي مجسم</td><td>ديفيد كوب</td><td>موديل 1900</td><td></td></tr> مكثف <tr><td>الأكسجين Isoflurane</td><td>Abbvie</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Respironix</td><td>1020007</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Indivior UK Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ماكينة حلاقة كهربائية</td><td>Tondeo</td><td>Eco-XS</td><td></td></tr><tr><td>وسادة تسخين</td><td>Thermolux</td><td>463265 / -67</td><td></td></tr><tr><td>المشابك الجراحية</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>18050-28</td><td></td></tr><tr><td>بيروكسيد الهيدروجين</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>مناديل قطنية معقمة</td><td>Carl Roth</td><td>EH12.1</td><td></td></tr><tr><td>Drill</td><td>Proxxon</td><td>Micromot 230 / E</td><td></td></tr><tr><td>21G إبرة حقن</td><td>B.</td><td>براون 4657527</td><td></td></tr><tr><td>عازلة فوسفات / محلول ملحي</td><td></td><td></td><td></td>مخزن بالفوسفات</tr><tr><td>أطلس Elsevier</td><td></td><td>9.78012E +12</td><td></td></tr><tr><td>مقص جراحي</td><td>أدوات العلوم</td><td>الدقيقة 14094-11</td><td></td></tr><tr><td>ملقط جراحي</td><td>أدوات العلوم</td><td>الدقيقة 11272-40</td><td></td></tr><tr><td>إبر حقن 27 جرام</td><td>ب. براون</td><td>4657705</td><td></td></tr><tr><td>فازلين</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>أسمنت الأسنان</td><td>صن ميديكال</td><td>سوبر بوند تي آند M</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis</td><td>Rimadyl 50mg / ml</td><td></td></tr><tr><td>مضخم التسجيل</td><td>Intan Technologies</td><td>C3323</td><td></td></tr><tr><td>USB لوحة اقتناء</td><td>Intan Technologies</td><td>C3004</td><td></td></tr><tr><td>كابلات التسجيل</td><td>Intan Technologies</td><td>C3216</td><td></td></tr><tr><td>عدسات</td><td></td> دوريك الكهربائية <td>HRJ-OE_FC_12_HARW</td><td></td></tr><tr><td>يسمح برنامج الاستحواذ</td><td>OpenEphys (www.open-ephys.org)</td> <td>GUI</td><td>بالحصول على البيانات المستقلة عن النظام</td></tr> الأساسي <tr><td>الكمبيوتر للحصول على</td><td></td><td></td><td></td>البيانات</tr><tr><td>بيئة التحليل</td><td>Python (www.python.org)</td><td></td> <td>يسمح بتحليل البيانات المستقل عن النظام</td></tr><tr><td>الأساسي Urethane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000</td><td></td></tr><tr><td>شرائح المجهر</td><td>كارل روث</td><td>H868.1</td><td></td></tr><tr><td>زلات الغطاء</td><td>كارل روث</td><td>H878.2</td><td></td></tr><tr><td>تضمين متوسط</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>81381-50G</td><td></td></tr><tr><td>الماء المقطر</td><td>Millipore</td><td>Milli Q</td><td>آلة سطح الطاولة لإنتاج الماء المقطر</td></tr><tr><td>Tergazyme</td><td>Alconox</td><td>Tergazyme</td><td></td></tr></tbody></table>

تسجيل مكانياً مقيد التذبذبات في قرن آمون التصرف الفئران

Recording Spatially Restricted Oscillations in the Hippocampus of Behaving Mice

الإمكانات الميدانية المحلية (طابعات الحجم الكبير) ينبثق من حركات أيون عبر الأغشية العصبية. نظراً للجهد سجلتها أقطاب طابعات الحجم الكبير يعكس الحقل الكهربائي summed كمية كبيرة من أنسجة المخ، استخراج معلومات حول النشاط المحلي يشكل تحديا. دراسة رقائق الخلايا العصبية، ومع ذلك، يتطلب موثوق بها تمييز بين الأحداث المحلية حقاً وإشارات أجرت وحدة التخزين التي تنشأ في المناطق البعيدة من الدماغ. تحليل كثافة (CSD) المصدر الحالي يوفر حلاً لهذه المشكلة بتوفير معلومات حول المصارف الحالية ومصادر مقربة من أقطاب كهربائية. في مناطق الدماغ مع الصفحي سيتوارتشيتيكتوري مثل قرن آمون، يمكن الحصول على أحادي البعد لجنة التنمية المستدامة بتقدير مشتقة الثانية المكانية طابعات الحجم الكبير. هنا، يمكننا وصف أسلوب لفبس مولتيلامينار سجل استخدام المسابير السليكون الخطي مزروع في الحصين الظهرية. وتحسب آثار لجنة التنمية المستدامة على طول السيقان الفردية للتحقيق. وهكذا يصف هذا البروتوكول إجراء لحل ذبذبات مكانياً مقيد شبكة الخلايا العصبية في قرن آمون التحرك بحرية الفئران.

ويبين الشكل 1 الإدراج الأداة المستخدمة لغرس المسابير السليكون. تسجيلات من السليكون مزمن مزروع يسبر استهداف منطقة CA1 وطبقة الخلايا الحبيبية المغزلي المسنن مبينة في الشكل 2. سجلنا لفبس من شانكس المسبار خلال حرية الحركة في هوميكاجي. لتقليل تأثير حجم التوصيل، تم تحويل الإشارات التي تم الحصول عليها إلى لجنة التنمية المستدامة على طول كل ساق من التحقيق (الشكل 2، د). في المثال الأول هو مبين...

ويصف هذا البروتوكول تسجيل الإمكانات الميدانية المحلية مع متعدد عرقوب يسبر السليكون الخطي. يسمح تحويل الإشارات باستخدام تحليل كثافة المصدر الحالي إعادة بناء نشاط الكهربائية المحلية في قرن آمون الماوس. مع هذه التقنية، يمكن دراسة ذبذبات الدماغ مكانياً المقيدة في الانتقال بحرية الفئران.

The local field potential (LFP) emerges from ion movements across neural membranes. Since the voltage recorded by LFP electrodes reflects the summed ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب مثل كيفية تنظيم أنشطة الشبكة العصبية على المقاييس الزمنية والمكانية الدقيقة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن استخدام مجسات السيليكون الخطية ، وتحليل البيانات الحالية يسمح بإعادة بناء التذبذبات المحلية التي لا يمكن اكتشافها بسهولة في تسجيلات إمكانات المجال التقليدية. لبدء هذا الإجراء ، قم بتعقيم الأدوات الجراحية باستخدام معقم حبة ساخنة ، ثم امسح جميع أسطح العمل بنسبة 70٪ من الإيثانول.بعد ذلك ، قم بتركيب المخدر في إطار تجسيمي عن طريق إدخال قضبان الأذن برفق في قناة الأذن. بمجرد تثبيت رأس الفأر بواسطة قضبان الأذن ، ضع قطعة لسان حال على الخطم لتوصيل الأيزوفلوران المستمر ، ثم ضع مرهما على العينين لمنع الجفاف. بعد ذلك ، ضع وسادة تدفئة أسفل الفأر وحقن البوبرينورفين تحت الجلد لضمان تسكين ما بعد الجراحة.بعد ذلك ، حلق رأسه وتطهير الجلد بنسبة 70٪ من الإيثانول. باستخدام المقص الجراحي ، قم بعمل شق على الجلد على طول خط الوسط للجمجمة وافتح الجلد باستخدام المشابك الجراحية. قم بمحاذاة رأس بمساعدة أداة محاذاة تجسيمية لتسوية بريجما ولامدا.يجب أن يكون هناك أقل من 50 ميكرومتر من إزاحة الارتفاع بين بريجما ولامدا. علاوة على ذلك ، قم بتسوية الرأس على طول المحور الجانبي الإنسي عن طريق قياس العمق على مسافة محددة من بريجما على الجانبين الأيسر والأيمن. اضبط الرأس إذا كان مائلا.نظف الرأس بنسبة 3٪ بيروكسيد الهيدروجين وجففه بمناديل قطنية معقمة. تحديد موقع حج القحف بالنسبة إلى بريجما باستخدام أطلس تجسيمي مناسب. باستخدام رأس حفر 0.9 ملم ، قم بحفر فتحتين لولبيتين في العظم فوق المخيخ لوضع الأرض والبراغي المرجعية.بالإضافة إلى ذلك ، قم بحفر ثقب إلى ثلاثة ثقوب لتثبيت مسامير التثبيت لتثبيت الغرسة. يعتمد موقع مسامير التثبيت على موقع حج القحف. أدخل البراغي في العظم باستخدام مفك براغي مناسب.احرص على عدم اختراق الدماغ. الآن ، قم بإجراء حج القحف عن طريق ترقق الجمجمة ببطء باستخدام المثقاب في منطقة مستطيلة حول جانب الزرع. بلل العظام بشكل متكرر باستخدام عازلة الفوسفات المعقمة.اخترق الجمجمة الرقيقة المتبقية برفق بإبرة حقن قياس 27 وقم بإزالتها باستخدام زوج من الملقط. بعد ذلك ، اخترق الأم الجافية بعناية بإبرة حقن قياس 27. باستخدام زوج من الملقط ، قم بتشكيل خطاف صغير عن طريق ثني طرف الإبرة واستخدم هذا الخطاف لإزالة الجافية.ثم ضع عازلة الفوسفات لمنع سطح الدماغ من الجفاف. بعد ذلك ، قم بتركيب أداة إدخال القطب الكهربائي على حامل تجسيمي وقم بتصفير المسبار على bregma. انقل المسبار إلى الإحداثيات التجسيمية فوق حج القحف واخترق سطح الدماغ ببطء.تأكد من أن أعمدة المسبار لا تنحني وتجنب الزرع في الأوعية الدموية. بعد ذلك ، قم بخفض المسبار ببطء حتى حوالي 200 ميكرومتر فوق العمق المطلوب. بعد ذلك ، قم بتغطية حج القحف وسيقان مسبار السيليكون بالفازلين المعقم للحماية.بعد ذلك ، ضع أسمنت الأسنان لتثبيت قاعدة المسبار على برغي التثبيت في الجمجمة. مباشرة بعد تطبيق الأسمنت ، حرك المسبار ببطء إلى العمق المستهدف. تقدم آخر 200 ميكرومتر بعد وضع الأسمنت لتقليل الحركة الجانبية للمسبار وضمان الحد الأدنى من تلف الأنسجة في المنطقة المستهدفة.بعد معالجة الأسمنت ، حرر المسبار من أداة الإدخال عن طريق إذابة الشمع باستخدام الكي. بعد ذلك ، حرر لوحة الموصل من جهاز الإدخال وضعها في مكان مناسب على الجمجمة باستخدام مشبك التمساح. ثبت لوحة الموصل بالجمجمة باستخدام الأسمنت الأسنان.في حالة زرع المسبار في الحصين ، ضع لوحة الموصل على العظم الجداري المقابل. بعد ذلك ، قم بلحام الأسلاك الأرضية والمرجعية للوحة الموصل بالأسلاك المتصلة بالمسمارين فوق المخيخ. قم بقص الغطاء الواقي إلى الارتفاع الصحيح وضعه فوق مسبار السيليكون.بعد ذلك ، قم بإصلاح غطاء لوحة الموصل والجمجمة باستخدام الأسمنت السني ، وتجنب الجلد حول الجمجمة المكشوفة. بعد الجراحة ، ضع العلاج المسكن المناسب على الفأر لمدة يومين على الأقل. ضع الفأر في منزل واحد لمنع تلف الغرسة.يتم عرض التسجيلات من مجسات السيليكون المزروعة بشكل مزمن والتي تستهدف منطقة CA1 هنا. يتم تطبيق تحليل كثافة المصدر الحالي على طول السيقان الفردية للمسبار. في هذا المثال ، يؤدي حدث تموج موجة حادة واحد إلى بالوعة تيار بارز في الطبقة رادياتوم من CA1 وفي المثال الثاني ، تم تسجيل موقعين متميزين في طبقة الخلية الحبيبية للتلفيف المسنن.تم عزل نطاق جاما العالي عن طريق تطبيق مرشح تمرير نطاق 60 إلى 80 هرتز ، مما يكشف عن رشقات جاما محلية على أحد موقعي التسجيل الموجودين في طبقة الخلية الحبيبية. لاحظ أنه لا يمكن اكتشاف نشاط تذبذب جاما المحلي إلا بعد تحويل الإشارات المسجلة إلى CSD. تحدد CSD ، ولكن ليس إشارات LFP ، فترات عدم تزامن الطور والسعة بين موقعي التسجيل.يوضح هذا الجزء حقبة موجزة من نشاط جاما المتزامن. توضح الآثار هنا فرق الطور ومؤشر فرق السعة لآثار LFP و CSD. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية زرع مجسات السيليكون في الحصين.

recording-spatially-restricted-oscillations-hippocampus-behaving

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

يحدد هذا الفيديو بروتوكولا لزرع مسبار سيليكون خطي متعدد السيقان في دماغ الفأر لقياس إمكانات المجال المحلي. يتضمن الإجراء تثبيت المسبار في وحدة تجسيمية ، ووضعه بدقة فوق منطقة الدماغ المستهدفة ، وإدخاله في الدماغ ، وتثبيته بأسمنت الأسنان. بعد الزرع ، يتم حماية التجميع بغلاف. بعد التعافي ، يسمح الإعداد بتسجيل إمكانات المجال المحلي ، مما يوفر رؤى حول النشاط العصبي.

تسجيل النشاط الكهربائي للدماغ في الفئران التي تتصرف باستخدام مجسات السيليكون الخطية متعددة السيقان

يوضح الفيديو إجراء لتسجيل إمكانات المجال المحلي (LFP) في شرائح قشرة الحصين والحصين الداخلي للفأر. يتم توفير التحفيز الكهربائي في الطبقة CA3 من الحصين ، مما يسبب تغيرات في إمكانات ما بعد المشبكي في الطبقة الهرمية CA1. تم تسجيل التغيير المشترك في إمكانات الغشاء للخلايا العصبية CA1 ، والتي تسمى إمكانات المجال المحلي.

تسجيل إمكانات المجال المحلي في شرائح قشرة الحصين والخلفي في الفأر

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لتعديل تذبذبات ثيتا في نموذج فأر معدل وراثيا مع قنوات أيونية حساسة للضوء في الخلايا العصبية الحاجزية الإنسية GABAergic. من خلال توصيل نبضات ضوئية إلى الحصين ، يهدف البروتوكول إلى مزامنة النشاط العصبي وتوليد تذبذبات ثيتا ، والتي يتم تسجيلها كإمكانات مجال محلي.

التلاعب الانتقائي بتذبذبات ثيتا في نموذج الماوس

يوضح هذا الفيديو الزرع التجسيمي لمجموعة أقطاب كهربائية سلكية وألياف بصرية في الحصين لنموذج الفأر.

زرع مصفوفة أقطاب كهربائية وألياف بصرية في الحصين الفأر

يوضح هذا الفيديو تسجيل نشاط الشبكة العصبية الإيقاعية ، المعروف أيضا باسم تذبذبات ثيتا ، في الحصين المعزول. يتم إدخال الأقطاب الكهربائية في طبقات مختلفة ومواضع مكانية لاكتشاف وتحليل تذبذبات ثيتا. يوضح هذا التراكيب العصبية الفريدة واتصال الشبكة العصبية عبر طبقات مختلفة من الحصين.

التسجيل في المختبر لتذبذبات ثيتا في الحصين الفأر

هنا، نقدم بروتوكول لتسجيل الإيقاعي ثيتا شبكة العصبية وتذبذبات غاما من إعداد الحصين كله معزولة. نحن تصف الخطوات التجريبية من استخراج الحصين إلى تفاصيل الميدان، وحدوية وكل خلية التصحيح المشبك التسجيلات فضلا عن سرعة أوبتوجينيتيك من إيقاع ثيتا.

ضبط في الحصين ثيتا الفرقة<em&gt; في المختبر</em&gt;: منهجيات لتسجيل من القوارض معزولة سيبوهيبوكامبال الدائرة

يصف لنا استخدام أوبتوجينيتيكس والتسجيلات الكهربية للتلاعب الانتقائي للذبذبات ثيتا هيبوكامبال (5-10 هرتز) في سلوك الفئران. ويتم رصد فعالية الرائعة إيقاع استخدام الإمكانات الميدانية المحلية. ويتناول مزيجاً من علم البصريات وتثبيط فارماكوجينيتيك قراءات ناقل هيبوكامبال التزامن.

أوبتوجينيتيك الرائعة للذبذبات ثيتا هيبوكامبال في التصرف الفئران

يصف هذا البروتوكول إعداد شرائح قشرة الأنف -entorhinal الأفقية (HEC) من الفئران التي تظهر نشاطًا عفويًا لموجة حادة. يتم احتضان الشرائح في غرفة احتجاز واجهة مبسطة ويتم تنفيذ التسجيلات في ظروف مغمورة مع السائل النخاعي الاصطناعي المتدفق بسرعة لتعزيز الأوكسجين الأنسجة والظهور التلقائي للنشاط على مستوى الشبكة.

حاد الدماغ الماوس تشريح للتحقيق عفوية نشاط شبكة فرس النهر

توضح هذه المقالة إعداد نافذة تصوير مصنوعة خصيصا تكملها قنية التسريب وزرعها على منطقة CA1 في قرن آمون في الفئران.

إجراء استئصال القحف لتصور الأنشطة العصبية في قرن آمون من الفئران Behaving

يحدد هذا البروتوكول استخدام جهاز تسجيل وأقطاب كهربائية مصممة خصيصا لتسجيل إمكانات المجال المحلي والتحقيق في تدفق المعلومات في قرن آمون الفأر وقشرة الفص الجبهي.

تسجيلات مزدوجة خارج الخلية في الحصين الفأر وقشرة الفص الجبهي

يبحث هذا البروتوكول في العلاقة بين الدماغ والسلوك في الحصين CA1 في الفئران التي تتنقل في عمود الرائحة. نحن نقدم بروتوكولا خطوة بخطوة ، بما في ذلك الجراحة للوصول إلى تصوير الحصين ، والتدريب السلوكي ، وتسجيل المنظار المصغر GCaMP6f ومعالجة الدماغ ، والبيانات السلوكية لفك تشفير موضع الماوس من النشاط العصبي لعائد الاستثمار.

منظار صغير يسجل إشارات الكالسيوم في الحصين للفئران التي تتنقل في عمود الرائحة

تعلم تسجيل مكانياً مقيد التذبذبات في قرن آمون الفئران باستخدام مجسات السيليكون الخطية متعددة الشفرات وتحليل كثافة مصدر التيار. تُحسّن هذه الطريقة كشف التذبذبات المحلية في الدراسات الفسيولوجية الكهربائية للفئران المتحركة.

تسجيل مكانياً مقيد التذبذبات في قرن آمون التصرف الفئران

استكشف المزيد من الفيديوهات