الفحص نيوروسفيري لتقييم تنشيط الخلايا الجذعية العصبية الذاتية في نموذج الفأر من إصابات النخاع الشوكي الحد الأدنى

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة المتعلقة بدور الخلايا السلائف العصبية في الطب التجديدي. على وجه التحديد ، يمكننا أن نسأل كيف تؤثر الإصابة على سلوك الخلايا السليفة العصبية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر نهجا لدراسة تأثير إصابة الحبل الشوكي على حركية الخلايا السلائف العصبية الذاتية.

المرئي لهذه التقنيات أمر بالغ الأهمية. حيث تتطلب الخطوات الجراحية والتشريح الدقة ، وقد يكون من الصعب تعلمها ، على الرغم من أنه يمكن إتقانها بالممارسة. قبل البدء في الإجراء ، استخدم مقصات الشعر لإزالة الفراء من ظهر الفأر المخدر من منتصف الظهر إلى الرقبة والأذنين.

بعد تثبيت الماوس في جهاز تجسيمي ، ضع أربع إلى خمس قطع من الشاش الملفوف أسفل البطن ، مع سحب قاعدة الذيل برفق لتقويم الجسم والعمود الفقري. ادفع لفة الشاش الصدري من بطن الفأر باتجاه الجزء العلوي من الصدر لدعم العمود الفقري الصدري. واستخدم شريط المختبر لتأمين الذيل والأطراف في اتجاه يشبه النجوم.

بعد تطهير الجلد المكشوف بمسحات متسلسلة من الإيثانول واليود بوفيدون بنسبة 70٪ ، استخدم شفرة مشرط رقم 10 لعمل شق رأسي مواز للمحور الطولي للحيوان ، من نقطة منتصف كلتا لوحي الكتف ، إلى انحناء العمود الفقري الصدري. اسحب الجلد لكشف الأنسجة الرخوة ومحيط العمود الفقري. وتحديد الحد السفلي للوسادة الدهنية الكتفية الفائقة.

بعد ذلك ، استخدم المشرط للقطع بعناية ولكن بقوة على طول جانبي العمود الفقري T5 إلى T8 وتسع عظام ، لفصل أوتار عضلة الظهر عن العمود الفقري. إعادة وضع الضاعرات بحيث يتم إدخال أسنان البااعدات في موقع الشق على جانبي العمود الفقري. وقم بتوسيع كل ضام لضبط التعرض ، حتى يرتفع العمود الفقري بدرجة كافية دون وضع الكثير من الضغط على طبقات العضلات المتراجعة.

تحت المجهر الجراحي ، قم بتنظيف العضلات المتبقية والأنسجة الرخوة الأخرى التي تغطي العمود الفقري بعناية ، لكشف عظم العمود الفقري. ربط العملية الشائكة للفقرات بالملقط المسنن ، وتحريك الملقط قليلا لأعلى ولأسفل لتحديد الفقرات التي سيتم إزالتها. بعد ذلك ، أدخل طرفا واحدا من زوج من المقصات المنحنية في جانبي الثقبة الفقرية المكشوفة ، الذيلية إلى الصفيحة الفقرية المراد استئصالها.

وقطع المفاصل الفقرية المتصلة ثنائيا. بعد ذلك ، ارفع الصفيحة لأعلى واقطع المرفق العلوي للصفيحة لعزل العظم وإزالته. عند قطع الصفيحة الفقرية وإزالتها ، احرص دائما على توجيه المقص لأعلى حتى لا يتلف الحبل الشوكي الأساسي.

مع عمل الأوردة الظهرية في خط الوسط كمعلم بارز ، أدخل العمود المنحني بزاوية 45 درجة لطرف إبرة 30 مقياس ، بحيث يكون الجانب المائل لأعلى ، بعمق ملليمتر واحد في السطح الجانبي الظهري للحبل الشوكي. وحوالي 0.5 ملم جانبيا إلى جانبي خط الوسط. حرك الإبرة حوالي ملليمترين من الذيلية إلى الاتجاه المنقاري ، بحيث يتم إدخال طول الشطبة بالكامل في الحبل.

ثم ، استرجع مسار الإدخال لإزالة الإبرة. لإغلاق الجرح ، قم بإزالة الضام واستخدم خياطة قابلة للامتصاص 6-0 للانضمام إلى عضلات الظهر على جانبي الإصابة على طول خط الوسط. وخياطة حريرية 4-0 لإغلاق الجلد المغطى.

لعزل المجالات العصبية ، قم بعمل شق خط الوسط في الجلد بطول الظهر بالكامل لفضح محيط العضلات والعظام الفقرية. ارفع الجانب الإنسي لكل لوح الكتف واستخدم المقص لقطع الأنسجة الرخوة بين لوح الكتف والفقرات. عندما ينكشف العمود الفقري الأساسي ، أدخل المقص في الفتحة الصدرية العلوية ، بعد انحناء العمود الفقري ، وقم بقطع الأضلاع والعضلات والأعضاء الداخلية المرفقة لعزل العمود الفقري.

أدخل المقص في الثقبة الفقرية الذيلية ، واقطع المفاصل الفقرية على جانبي الصفيحة ، مع الحرص على عدم إتلاف الحبل السليم. عندما ينكشف الطول المناسب للحبل السري ، قم بقطع أي أعصاب شوكية تمتد بشكل جانبي من الحبل السري بعناية ، قبل نقل أنسجة الحبل الشوكي إلى طبق بتري من السائل الشوكي الدماغي الاصطناعي العادي على الجليد. تحت مجهر التشريح ، قم بقطع أنسجة الحبل الشوكي لتشمل حوالي ملليمترين من الأنسجة المنقارية والذيلية إلى موقع الإصابة ، واستخدم زوجين من الملقط الدقيق لفصل الحبل برفق إلى نصفين طوليين ، على طول الشقوق الظهرية والبطنية.

استخدم المقص الصغير لقطع المادة البيضاء الجانبية الظهرية المصابة. ووضع الأنسجة المصابة في أنبوب مخروطي سعة 15 مل. إمساك نصف الحبل الشوكي بالملقط ، وإثارة وإزالة المادة البيضاء غير المصابة بزوجين من الملقط على طول المدى الذيلي المنقاري للحبل الشوكي ، لعزل المنطقة المحيطة بالبطينين المناسبة.

بعد عزل المادة البيضاء المصابة والمناطق المحيطة بالبطينين المرتبطة بها من النصف الآخر من الحبل الشوكي بنفس الطريقة ، ضع قطع الأنسجة حول البطينين في أنابيب مخروطية فردية سعة 15 مل. واستخدم المقص الصغير لفرم الأنسجة برفق على جدران الأنابيب. بمجرد الانتهاء من عملية هضم الأنسجة ، والحصول على تعليق الخلية المفردة ، قم بإعداد ثقافة الغلاف العصبي عن طريق إضافة 10 ملليلتر من الوسط المناسب إلى قارورة واحدة لزراعة الأنسجة 25 ملم لكل حالة خلية.

وأضف الخلايا الجذعية العصبية المعزولة حتى كثافة نسيلة تبلغ 10 خلايا لكل ميكرولتر لزراعتها في حاضنة زراعة الخلايا. بعد 24 ساعة ، قم بتدوير القوارير برفق وصب المحتويات في أنابيب مخروطية فردية سعة 15 مليلتر للطرد المركزي. أعد تعليق الكريات في واحد إلى ملليلتر من الوسط القاعدي العصبي الطازج للعد.

وقم بتقطيع الخلايا بكثافة نسيلة في صفيحة واحدة لزراعة أنسجة البئر 24 لكل حالة ، تحتوي على 500 ميكرولتر من الوسط المكمل بالميتوجين المناسب لكل بئر. ثم قم بزراعة المجالات العصبية في حاضنة زراعة الخلايا لمدة سبعة أيام. بعد خمسة أيام من الحد الأدنى من إصابة الحبل الشوكي ، تكون الأعداد المطلقة للمجالات العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية العصبية النهائية أكبر من عدد المجالات العصبية البدائية المشتقة من الخلايا الجذعية العصبية.

المجالات العصبية النهائية قطرا أكبر ومركزا مظلما كبيرا. في حين أن المجالات العصبية البدائية أصغر حجما ومعبأة بإحكام. يؤدي الحد الأدنى من إصابة الحبل الشوكي إلى زيادة كبيرة في المجالات العصبية التي تنمو من القناة المركزية على مستوى الإصابة ، مقارنة بزيادة متواضعة نسبيا في القناة المركزية ، المنقارية إلى مستوى الإصابة.

يمكن أيضا إنشاء المجالات العصبية النهائية من المادة البيضاء الآفة على مستوى الإصابة. منطقة لا تحتوي على خلايا تشكل الغلاف العصبي في استئصال الصفيحة الفقرية وحدها. لوحظت زيادة مماثلة في الخلايا الجذعية العصبية البدائية بعد الإصابة ، باستثناء المجالات العصبية البدائية في المادة البيضاء على مستوى موقع الآفة.

بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء التقنية الجراحية في أقل من 40 دقيقة. ويمكن إجراء تشريح الأنسجة وعزلها في أقل من 30 دقيقة ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد العملية الجراحية ، اعتمادا على سلالة ، يمكن استخدام منهجيات إضافية مثل الكيمياء المناعية والصدمة الخطية ، للإجابة على أسئلة إضافية مثل حركية الانتشار ، والمصير الذاتي للخلايا السليفة العصبية بعد الإصابة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام مقايسة الغلاف العصبي لتقييم تنشيط الخلايا الجذعية العصبية ، بعد إصابة الحبل الشوكي.