Name: أساليب لدراسة التجديد في ستنتور (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: اكتشف أساليب دراسة التجديد في الخلية الواحدة باستخدام Stentor coeruleus كنموذج حي. تُمكّن هذه البروتوكولات الباحثين من إجراء عمليات جراحية دقيقة وتحليل آليات إعادة بناء الهياكل الخلوية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

أيد هذا العمل المعاهد الوطنية للصحة المنحة R01 GM113602 (الحركة) وجبهة الخلاص الوطني 1144247 (AL). ونعترف سلابودنيك مارك وناتالي كيركلاند لتطوير الإصدارات الأولية من بعض من هذه البروتوكولات ومناقشات غنية بالمعلومات. ونحن نشكر بيرلازا كارينا ولويس غريسون لقراءة نقدية من المخطوطة.

<ol><li>Kirschner, M., Gerhart, J., Mitchison, T. <a target="_blank" href="http://www.cell.com/cell/abstract/S0092-8674(00)81685-2">Molecular "vitalism".</a> Cell. 100 (1), 79-88 (2000).</li>
<li>Shulman, J. M., St Johnston, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10611685">Pattern formation in single cells.</a> Trends in Cell Biology. 9 (12), M60-M64 (1999).</li>
<li>Wloga, D., Frankel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+molecules+to+morphology%3A+cellular+organization+of+Tetrahymena+thermophila%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">From molecules to morphology: cellular organization of Tetrahymena thermophila.</a> Methods in Cell Biology. 109, 83-140 (2012).</li>
<li>Frankel, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrankel%2C+J+%22Pattern+Formation%3A+Ciliate+Studies+and+Models%22">Pattern Formation: Ciliate Studies and Models</a>. , Oxford University Press. Oxford. (1989).</li>
<li>Tartar, V. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jez.1401310105/full">Grafting experiments concerning primordium formation in Stentor coeruleus.</a> Journal of Experimental Zoology Part A. 131 (1), 75-121 (1956).</li>
<li>Lillie, F. R. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jmor.1050120105/abstract">On the smallest parts of Stentor capable of regeneration; a contribution on the limits of divisibility of living matter.</a> Journal of Morphology. 12 (1), 239-249 (1896).</li>
<li>Morgan, T. H. <a target="_blank" href="https://www.jstor.org/stable/1535709">Regeneration of proportionate structures in Stentor.</a> The Biological Bulletin. 2 (6), 311-328 (1901).</li>
<li>Slabodnick, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macronuclear+genome+of+Stentor+coeruleus+reveals+tiny+introns+in+a+giant+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">The macronuclear genome of Stentor coeruleus reveals tiny introns in a giant cell.</a> Current Biology. 27 (4), 569-575 (2017).</li>
<li>Tang, S. K. Y., Marshall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-repairing+cells%3A+How+single+cells+heal+membrane+ruptures+and+restore+lost+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Self-repairing cells: How single cells heal membrane ruptures and restore lost structures.</a> Science. 356 (6342), 1022-1025 (2017).</li>
<li>Slabodnick, M., Prevo, B., Gross, P., Sheung, J., Marshall, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+cytoplasmic+flow+during+single-cell+wound+healing+in+Stentor+coeruleus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Visualizing cytoplasmic flow during single-cell wound healing in Stentor coeruleus.</a> Journal of Visualized Experiments. 82 (82), 50848(2013).</li>
<li>Tartar, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTartar%2C+V+%22Biology+of+Stentor%22">Biology of Stentor</a>. , Pergammon Press. Oxford. (1961).</li>
<li>Slabodnick, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinase+regulator+mob1+acts+as+a+patterning+protein+for+stentor+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">The kinase regulator mob1 acts as a patterning protein for stentor morphogenesis.</a> PLOS Biology. 12 (5), e1001861(2014).</li>
<li>Harris, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris%2C+E+%22The+Chlamydomonas+sourcebook%3A+Introduction+to+Chlamydomonas+and+its+laboratory+use%22">The Chlamydomonas sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and its laboratory use</a>. 1, Academic Press. Cambridge. (2009).</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

استزراع ستنتور يعرض عددا من التحديات. أولاً، لإجراء التجارب التي تتطلب أعدادا كبيرة من الخلايا، يحتاج المرء الإبقاء على عدد كبير من الثقافات ستنتور ، كثقافات تصبح غير صحية عندما يتجاوز تركيز ستنتور 20 خلايا/مل. ثانيا، الكائنات الحية التي يمكن أن تلوث الثقافات ستنتور غالباً ما تقسم أسرع من ستنتور وتطغى الثقافة (وهو الملوثات شائعة الروتيفر). وبالتالي، من الضروري أن تفقد الثقافة تحت مجهر بشكل دوري وإزالة الملوثات. في بعض الأحيان، يحتاج ثقافة جديدة ليبدأ من عدد صغير من الخلايا التي أنقذت يدوياً من ثقافة ملوثة. وهذا يزيد من الوقت اللازم للمحافظة على صحة جيدة ستنتور الثقافات. ثالثا، توسيع خلية واحدة إلى ثقافة 400 مل يتطلب شهر واحد على الأقل لدورة الخلية ستنتور من 3-5 أيام. رابعا، خلافا للنموذج الآخر سيلياتيس، ستنتور نادراً ما تذهب إلى شكل كيسه وأنهم لا يمكن أن تجمد.
جانبا مهما من استزراع ستنتور هو اختيار كائن حي الغذاء المناسب. أساليب مختلفة لاستزراع ستنتور وصفت سابقا. واحد منهم يقترح استخدام اللبن المقشود للبكتيريا الثقافة التي تغذي ثم ستنتور. هذه تقنية فعالة في استزراع ستنتور؛ ومع ذلك، يتطلب تطبيق تقنيات الجينوم عينات نقية لتجنب الارتباك الناجم عن قراءة الجينوم من الكائنات الحية الغذاء غير معروف. استخدام البروتوكول الحالي، يمكن زراعتها ستنتور في الكتلة و، لأنه قد تم تعيين تسلسل طعامهم، تشلاميدوموناس،، يمكن الكشف عن وجود تلوث الجينوم من الكائنات الحية الغذاء وتسيطر عليها. لأسباب غير معروفة، كان التكلس تجديد المخزونات له بالعودة إلى حيث وجد ستنتور قبل. مع البروتوكول الحالي، وقد تمكنا من إبقاء ستنتور لسنوات.
تجارب التجديد مع ستنتور واضحة عموما، ولكن هناك بعض التفاصيل الهامة نضع في اعتبارنا. وفيما يتعلق بالمادة 2، قطع ستنتور يمكن أن يتقن الخلايا في نصف دقيقة. وقد يتطلب إتقان إجراءات الجراحة أكثر تقدما من ستنتور أسبوع ممارسة. وفي حين أداء علاج السكروز أو اليوريا (الجزء 3)، إذا في بداية تصوير معظم الخلايا لا تزال تلك العصابات ميمبرانيلار، زيادة وقت الحضانة من 10-30 ثانية لعندما يتم تنفيذ المعاملة السكروز التالية. لا تزيد وقت المعاملة السكروز خارج الحضانة 3 دقيقة نظراً لأنه سوف يؤدي إلى موت الخلية.
التصوير من ستنتور يتطلب تجديد الأساليب بصورة كبيرة الخلايا على مدى فترات طويلة من الزمن. يمكن استخدام أسلوب التصوير بالتفصيل في القسم 4 فقط مع مجهر تستقيم. ثم إذا كان متوفراً مجهر مقلوب بدلاً من ذلك، يمكن وضع الخلايا على الشريحة أو ساترة في الدوائر الصغيرة. أسلوب واحد إنشاء دائرة من فازلين وتغطي مع آخر ساترة لمنع التبخر. وبدلاً من ذلك، يمكن إجراء دائرة لخلية مفردة بصنع حفرة لكمه ثقب من الحجم المطلوب في 1 × 1 سم2 مربعة من مباعدة السيليكون (الجدول للمواد)، وضع فاصل على ساترة، ووضع الخلايا في قاعة ، والتي تغطي الدائرة مع ساترة آخر. عند التصوير، وإذا لم ستنتور في الاتجاه الصحيح مراعاة السمات المميزة لكل مرحلة من التجدد، اضغط على لوحة بحزم لجعل العقد من الخلية. مشاهدة الخلية تمتد إلى تحديد مرحلة التجديد (ملحق كامل يأخذ حوالي 45 ثانية). إذا كانت الخلية لا تزال في اتجاه خاطئ، كرر التنصت. واتخذت هذه الصور هو مبين في الشكل 1 و الشكل 6 مجهر تكبير ستيريو؛ ومع ذلك، يمكن إجراء جميع التجارب بالتفصيل استخدام 5 × تشريح مجهر ستيريو.
يتمثل التحدي الآخر إلى جانب استزراع والتصوير ستنتور تتبع للتجديد، على وجه التحديد مقدار الوقت اللازم التعرف على مراحل. إذا كانت الخلية تجديد المنحى تماما مع منطقة بريمورديوم الشفوية واضحة للعيان، تحديد المرحلة التي تستغرق بضع ثوان. في بعض الأحيان، ومع ذلك، الخلية ستنتور في اتجاه الحيلولة دون تحديد واضح لمرحلة التجديد، ومن ثم أخذ مزيد من الوقت لتحديد. القدر الكبير من الوقت المطلوب لمرحلة الخلايا تجديد الفردية قد يؤخر التقدير الكمي للخلايا تجديد كافة، وبالتالي تقليل الدقة الزمنية التدريج والتي تتطلب المراقب الانتظار وإعادة الصورة الخلية بعد ذلك انتقل إلى توجه جديد. ونتيجة لذلك، هي هذه التجربة المرة وكثيفة العمالة. لهذه الأسباب، سيكون من المرغوب فيه جداً لتطوير أساليب مؤتمتة للكشف عن الخلايا ستنتور وتعيين مراحل التجديد في بيانات الفيديو مجهرية. هذه سوف تسمح أيضا لمزيد من التجارب استنساخه، زيادة في حجم العينة، وإزالة التحيز القائم على البشرية.
قد بدأ ظهور أساليب الجينوم والبروتين حساسة للغاية لوضع دراسات للخلايا المفردة في الوصول. لمثل هذه التحليلات خلية واحدة، يجعل حجم خلية ستنتور العملاقة موضوع اختبار المرغوب فيه لتجارب إثبات المفهوم. لهذه التجارب وذلك يكون من الممكن، استزراع ستنتور هو أمر أساسي، ومن ذلك الأساليب الموصوفة هنا ينبغي أن تلعب دوراً في زيادة تطوير تقنيات أكثر تقدما من خلية واحدة.

الخلايا غير أكياس بسيطة من الإنزيمات، ولكن آلات معقدة للغاية بدلاً من عناصرها يتم تحجيمها إلى الحجم الصحيح بعناية ومرتبة في مواقف محددة تحديداً جيدا. Morphogenesis الخلايا الفردية يمثل عملية رئيسية في الخلية وعلم الأحياء التنموي، لكن آليتها الجزيئية غير معروف1،2. في حين تشبه بعض الخلايا المستزرعة النقط، الكائنات الحية أحادي الخلية يمكن أن يكون معقداً للغاية أبنية، يتجلى في أنماط معقدة القشرية ينظر في سيلياتيس3،4.
ربما هو المثال الأكثر تطرفاً لخلية التنظيم كويروليوس ستنتور، بعيد تتصل هيتيروتريتشوس عملاقة سيلياتي تيتراهيمينا و براميسيوم. ستنتور 1 مم طويل ومغطى بشرائط طولية أكثر من 100 من صبغة زرقاء بالتناوب مع صفوف من أهداب تنظمها المكدسات المتوازية من شرائط ميكروتوبولي التي تعمل طول الخلية بأكملها. الخلية البوق-يتشكل (الشكل 1)، مع عصابة ميمبرانيلار وجهاز عن طريق الفم (الزراعة العضوية) في نهايته الأمامية، وهولدفاست التي تعلق الخلية إلى الركيزة في نهايته الخلفية. الخلية بالإضافة إلى قطبية واضحة الأمامي الخلفي، كما يبين الزخرفة مراوان مميزة، مثل أن التباعد بين صفوف الهدبية تدريجيا الزيادات في اتجاه عقارب الساعة. ينتج عن هذا انقطاع حيث يجتمع الصف أضيق الصف أوسع، وهذه المنطقة من سطح الخلية، المعروفة باسم محور التباين شريطية، يمكن أن يؤدي إلى تشكيل المجموعة الثانية من هياكل نهاية الأمامي عند المطعمة على آخر خلية5، مما يعادل رسميا منظم سبيمان. وهكذا، يكون جميع العمليات الرئيسية لعلم الأحياء التنموي على النظير في ستنتور: أكسياتيون وتشكيل نمط التعريفي. في جنين، هذه العمليات هي مدفوعة بمصير الاختلافات بين خلايا مختلفة، ولكن في ستنتور، وأنهم يجب أن يكون مدفوعا بمصير الفروق بين المناطق المختلفة داخل خلية واحدة. ما يحدد الاختلافات بين المناطق داخل ستنتور لغزا.
إذا تم اقتطاع أي جزء من ستنتور ، يمكن تجديد القطعة المفقودة من الخلية تسفر عن خلية عادية في غضون ساعات. إذا كانت خلية قطع في نصف، أو حتى إلى قطع أصغر بكثير، كل قطعة يعيد إلى خلية يبحث عادي ولكن أصغر حجماً ويعيد التناسب الصحيح بين خلية أجزاء6،7. أجزاء صغيرة حتى، 1/64th حجم الخلية الأصلية، وقادرة على التجدد في زنزانة صغيرة ولكنها تتناسب عادة ومن ثم تنمو إلى الحجم الكامل6. ستنتور وبالتالي من فرصة فريدة لدراسة آليات عضية الحجم التحجيم خلية نمو التنظيم واستخدام الطرق الجراحية التي تطبق عادة على مستوى الأنسجة أو الكائنات الحية كلها.
واحدة من خصائص ستنتور التي يسمح لها بتجديد من طائفة واسعة من العمليات الجراحية يحتوي ماكرونوكليوس نودولاتيد واحد (الشكل 1) مع حوالي 50 ألف نسخة ل الجينوم الكامل8. ما دام جزء من خلية تحتوي على عقده واحدة على الأقل ماكرونوكلير، لديها القدرة على تجديد تماما. خاصية أخرى الكامنة وراء قدرة التجدد ستنتورهو قدرته المذهلة التئام الجروح. وعلى الرغم من العديد من أنواع الخلايا قادرة على شفاء الجروح على9، ستنتور قادراً على استرداد من مجموعة غير عادية من الاضطرابات الجسدية. وأفيد سابقا مثالاً لاسترداد ستنتور من اضطراب جذري، جنبا إلى جنب مع الأساليب لتصور تدفق هيولى في ستنتور10 . تسمح هذه الطرق دراسة كيفية إصابة واللاحقة تؤثر تجديد الحالة المادية السيتوبلازم.
ستنتورضخمة الحجم والقدرة على التجديد غير عادية، وحقيقة أن ذلك يظهر العديد من الظواهر الإنمائية التي ينظر في أجنة متعددة الخلايا (مثل المنظمين، أكسياتيون، والزخرفة) اجتذبت العديد من علماء الأحياء التنموي خلال مطلع القرن الماضي، بما في ذلك "توماس هانت مورغان"7. خلال 50 عاماً وال 60، أثبت النهج microsurgical مجموعة مذهلة من عمليات التجدد ومورفوجينيتيك في هذا الحي وحيدة11. ومع ذلك، ستنتور قد وضعت كنظام نموذجي لبيولوجيا الجزيئية إلا في الآونة الأخيرة. خلال السنوات القليلة الماضية، كان تسلسل جينوم ستنتور وجمعت8، وكان الأسلوب للتشويش التعبير الجيني باستخدام [رني] عن طريق تغذية المتقدمة12.
وكان أحد الأسباب أن ستنتور قد تطورت إلى كائن نموذج للبيولوجيا الجزيئية الحديثة فقط مؤخرا صعوبة متزايدة الثقافات الكبيرة نظراً لدورة الخلية طويلة (3 إلى 5 أيام). ومع ذلك، تتطلب أساليب الجينوم والبروتين الحديثة المواد أقل مما كانوا، وحجم خلية ستنتور واحدة كافية لهذه الأساليب، حتى بدون اللجوء إلى أساليب أولتراسينسيتيفي التي تم تطويرها لتحليل واحد الخلايا التي أصغر بكثير من ستنتور. المادة 1 من البروتوكول تفاصيل الإجراءات المتعلقة بإرساء ثقافة كبيرة من خلية واحدة ستنتور . يمكن استخدام نفس النهج لإرساء ثقافة كبيرة من جزء خلية التي تم الحصول عليها عن طريق خفض خلية. كما يقدم الفرع 1 المبادئ التوجيهية للحفاظ على صحة ستنتور الثقافات على مدى فترات طويلة من الزمن. تنص المادة 2 من البروتوكول المنهجية لحفز التجدد الخليوي بقطع الخلايا يدوياً بإبرة زجاج. المادة 3 من البروتوكول مكرس لطريقتين لحفز تجديد هياكل خلية معينة (جهاز ميمبرانيلار الفرقة والفم): علاج الخلايا مع السكروز أو اليوريا يؤدي إلى سفك هذه الهياكل، تليها بهم التجديد. المادة 4 من البروتوكول تفاصيل طريقة لتصوير الخلايا تجديد الفردية على مدى فترات طويلة من الزمن. وينتهي القسم 4 مع وصف مراحل التجديد ونصائح حول تحليل ديناميات التجديد.

<table><tbody><tr><td>Stentor coeruleus الثقافة الحية</td><td>كارولينا التوريد البيولوجي</td><td>131598</td><td></td></tr><tr><td>Chlamydomonas reinhardtii على أجار</td><td>كارولينا الإمداد البيولوجي</td><td>152040</td><td></td></tr><tr><td>مياه الينابيع المبسترة ، زجاجة 1 لتر</td><td>كارولينا الإمداد البيولوجي</td><td>132458</td><td></td></tr><tr><td>ميثيل السليلوز ، 1500 cP</td><td>Millipore Sigma</td><td>M0387</td><td></td></tr><tr><td>لوحة بقعة زجاجية من Pyrex</td><td>Fisher Scientific</td><td>13748B</td><td></td></tr><tr><td>جرة زجاجية واسعة الفم مع غطاء لولبي ، 60 مل</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>715740</td><td></td></tr><tr><td>حاوية زجاجية 2 كوب بغطاء زجاجي</td><td>Pyrex</td><td>1095600</td><td></td></tr><tr><td>CultureWell مادة صفائح السيليكون</td><td>Grace Bio Labs</td><td>664475</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Click 1.7 مل أنبوب الطرد المركزي</td><td>الدقيق Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>غطاء زجاجي</td><td>فيشر أجود</td><td>وسائط نمو 12-548-B</td><td></td></tr><tr><td>TAP ، محسن ل Chlamydomonas ثقافة</td><td>ThermoFisher</td><td>A1379801</td><td></td></tr> فاصل <tr><td>سيليكون ، لوح سيليكون CultureWell ، سمك 0.25 مم / 13 سم × 18 سم</td><td>Grace Bio Labs</td><td>664475</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum ، الفازلين ،</td><td>الطيف</td> الأبيض <td>P1037</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب شعرية زجاجية من البورسليكات OD: 1.2 مم ، ID: 0.9 مم ، الطول: 10 سم.</td><td>أداة Sutter</td><td>B120-90-10</td><td></td></tr><tr><td>مجتذب إبرة P-87</td><td>أداة Sutter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stemi 2000 مجهر ستيريو</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiozoom V16 ، مجهر تكبير ستيريو</td><td>زايس</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

أساليب لدراسة التجديد في ستنتور

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

الخلايا بحاجة إلى أن تكون قادرة على تجديد أجزائها على التعافي من الاضطرابات الخارجية. سيلياتي أحادي الخلية كوروليس ستنتور هو الكائن نموذجا ممتازا لدراسة التئام الجروح وتجديد الخلايا اللاحقة. أن الجينوم ستنتور أصبح متاحاً في الآونة الأخيرة، جنبا إلى جنب مع طرق البيولوجيا الجزيئية الحديثة، مثل [رني]. هذه الأدوات تجعل من الممكن لدراسة تجديد خلية واحدة على المستوى الجزيئي. ويغطي الجزء الأول من البروتوكول ستنتور إنشاء خلية الثقافات من الخلايا المفردة أو أجزاء الخلية، جنبا إلى جنب مع المبادئ التوجيهية العامة للحفاظ على الثقافات ستنتور . استزراع ستنتور بكميات كبيرة تسمح باستخدام أدوات قيمة مثل الكيمياء الحيوية، وتسلسلها، والطيف الكتلي. وتغطي الأجزاء اللاحقة من البروتوكول نهج مختلفة لحفز التجدد في ستنتور. قص الخلايا يدوياً بإبرة زجاجية تسمح دراسة تجديد أجزاء الخلية الكبيرة، بينما علاج الخلايا مع السكروز أو اليوريا يسمح لدراسة تجديد هياكل محددة تقع في نهاية الأمامي للخلية. يتم توفير طريقة لتصوير الخلايا تجديد الفردية، جنبا إلى جنب مع شعار التدريج وتحليل ديناميات التجديد. وتنقسم العملية برمتها من التجدد في ثلاث مراحل. بتصور ديناميات تطور عدد سكان خلايا عبر المراحل، يتضح عدم التجانس في توقيت التجدد.

أنشئت الثقافات ستنتور موثوق بها والحفاظ على من خلايا فردية أو أجزاء الخلية باستخدام المادة 1 من البروتوكول. ويرد مثال ممثل لثقافة صحية كبيرة في الفيديو 1.
وتم قياس مسار وقت التجديد في ستنتور استخدام أسلوب العلاج السكروز من أجل الشروع في تجديد المذكورة في "الخطوة 3-1"، جنبا إلى جنب مع التصوير وطريقة التحليل التي نوقشت في الفرع 4 (الشكل 7). هذه المؤامرة تشير إلى أن هناك فرقا استمرت ساعة واحدة في الوقت الذي يستغرقه السكان للخلايا للوصول إلى أي مرحلة معينة. يسمح هذا النوع من التحليل دراسة التغاير الزماني في عملية التجديد في عدد سكان لتجديد الخلايا.
ما يلي هو موجز لتوقيت التجديد التي لوحظت حتى الآن بعد عشرات من العلاجات السكروز (الشكل 4 و الشكل 6). المرحلة الأولى عندما الخلايا ستنتور تبدو وكأنها الدموع دون أي الفرقة ميمبرانيلار (هذه المرحلة يبدأ فورا بعد تبييض السكروز). وتستمر هذه المرحلة هو حاء 3-6 المرحلة 2 عند عصابة ميمبرانيلار يظهر وينمو (3-6 ح بعد العلاج السكروز). تستمر هذه المرحلة 3-4 ﻫ. المرحلة 3 هو عند بريمورديوم عن طريق الفم يظهر في نهاية مؤخرة الفرقة ميمبرانيلار (6-8 ح بعد العلاج السكروز)، ويتم نقل كل الهياكل نهاية الأمامي للخلية. وتستمر هذه المرحلة ح 1-2. عند الفرقة ميمبرانيلار وجهاز الشفوي، الذي تم التوصل إليه نهاية الأمامي للخلية، هذا وأشارت إلى انتهاء تجديد. وقد اعتمدت الخلية الشكل يشبه البوق ستنتور المميزة. وكانت الزنزانات تماما المجددة 8-9 ح بعد العلاج السكروز.
<img alt="مخطط Paramecium مع شريط غشائي ، جهاز فموي ، فجوة طعام ، نواة كبيرة مسماة." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> الشكل 1. لقطة من ستنتور- وترد الفرقة ميمبرانيلار وجهاز الشفوي في نهاية الأمامي للخلية. هولدفاست نهاية الخلفي من الخلية. ماكرونوكليوس ستنتور نودولاتيد. وقد جيدا تغذية ستنتور الأخضر vacuoles الأغذية المحتوية على الأغلب Chlamydomonas. شريط مقياس هو 0.5 ملم. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="تشريح إعداد المجهر. شريحة زجاجية مع عينة Stentor للملاحظة في أبحاث علم الأحياء." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> رقم 2. إنشاء قطع ستنتور - قطع الخلية يتم عن طريق التلاعب إبرة زجاج يدوياً بينما تبحث في الخلية باستخدام مجهر ستيريو تشريح متاحة تجارياً. والغرض من المناديل الورقية توفير خلفية بيضاء لرؤية خلايا الأفضل. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="تسلسل الفحص المجهري للخلايا المنقسمة ، المسمى A-F ، يوضح مراحل العملية الانقسامية." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> الشكل 3. لقطات من الفيديو 3 توضح كيفية قص ستنتور بإبرة زجاجية. (A) A ستنتور فورا قبل الإبرة اللمسات عليه. (ب) ستنتور بلطف محشورة بين شريحة الإبرة والزجاج. A (ج) التعاقد مع ستنتور الرد على قوة الإبرة. (د) A ستنتور يجري خفض الضغط بلطف على الخلية مع الجانب من الإبرة. (ﻫ) A ستنتور قطع الآن في اثنين ولكن لا يفصل. (و) هما ستنتور الشظايا. هو شريط مقياس 0.25 مم. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="مخطط عملية تجديد الدعامات مع خطوات صدمة السكروز / اليوريا ، وأنابيب الطرد المركزي ، ومراحل الخلية." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig4v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> الشكل 4. التصور التخطيطي للمادة 3 والمادة 4 من البروتوكول. هذا بروتوكول مصورة لأداء السكروز أو علاج اليوريا والمراقبة لتجديد الخلايا. الوقت المحدد في أسفل لوحة تقاس من بداية الغسيل 1. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig4v2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="تشريح إعداد المجهر ، لوحة بقعة ذات 9 آبار ، تحليل تفاعل القطرات الدقيقة ، دراسة بصرية." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> الرقم 5. الإعداد للمراقبة التصوير و/أو مباشرة للتجديد مع مجهر تستقيم. في كل قطره 4 ميليلتر تتدلى من ساترة، وهناك خلية واحدة قيد التجديد. المياه في الآبار التي بليت بقعة الزجاج يحد تبخر القطرات. يسمح هذا الإعداد في أعقاب تجديد خلايا متعددة في نفس الوقت. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="تحليل بنية الخلية النباتية صور مجهرية A-E; التأكيد على اختلافات مورفولوجيا الخلية." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig6.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> الشكل 6. لقطات من ستنتور في كل مرحلة من الفرقة ميمبرانيلار وتجديد أجهزة الفم. (أ) المرحلة 1 تتميز بشكل خلية مثل الدمعة وغياب الفرقة ميمبرانيلار. (ب) المرحلة 2 يتميز بمظهر الفرقة ميمبرانيلار، وهيكل القائم على أهداب أن يدق باستمرار. عصابات ميمبرانيلار تتميز بخطوط متقطعة بيضاء في لوحات ب-دال (C و D) المرحلة 3 يتميز بمظهر بريمورديوم عن طريق الفم (ملحوظ مع سهم). بريمورديوم الشفوية يبدو وكأنه إينفاجينيشن في نهاية مؤخرة الفرقة ميمبرانيلار. سوف يتقدم بريمورديوم عن طريق الفم ثم صوب الأمامي للخلية ليصبح الجهاز عن طريق الفم. يتم إكمال التجديد (ه) عند الخلية قد اعتمد خاصية الشكل يشبه البوق ستنتور ، واتسعت على الجهاز عن طريق الفم (ملحوظ مع سهم) في نهاية الأمامي للخلية. هو شريط مقياس 0.25 مم. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="مخطط شريط توزيع مرحلة الخلية ، صدمة ما بعد السكروز ، يعرض أربع مراحل على مدار 9 ساعات." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> رقم 7. مكدس ارسم مربع إظهار كيفية تغيير أبعاد الخلايا في جميع مراحل التجديد بعد العلاج السكروز مع مرور الوقت. المؤامرة يظهر التباين في توقيت مراحل التجديد داخل سكان لتجديد الخلايا. "نهاية الصنع" يشير إلى انتهاء التجديد. عدد الخلايا: 28. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig7large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="دورق مع زراعة الطحالب الخضراء لدراسة التمثيل الضوئي في تجربة معملية." src="/files/ftp_upload/57759/57759video1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Movie 1"> الفيديو 1 من . مثال على ثقافة صحية ستنتور - عموما، إذا ثقافة مركزة، تقسيم الثقافة من المستحسن. <a href="/files/ftp_upload/57759/Video1.mp4" target="_blank">من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)</a>
<img alt="إسقاط تحت المجهر. دراسة التوتر السطحي السائل ؛ طريقة الفحص المجهري التحليل التربوي." src="/files/ftp_upload/57759/57759video2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Movie 2"> الفيديو 2 من . تباطؤ ستنتور مع ميثيلسيلولوسي- <a href="/files/ftp_upload/57759/Video2.mov" target="_blank">من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)</a>
<img alt="صورة مجهرية لإعداد الموائع الدقيقة ، مع تسليط الضوء على وضع القطرات على سلك رفيع." src="/files/ftp_upload/57759/57759video3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Movie 3"> الفيديو 3 من . قطع ستنتور- ويمكن خفض الخلايا الفردية يدوياً إلى قطع متعددة تحت ستيريو تشريح مجهر بضغط إبرة زجاج عن طريق الخلية. <a href="/files/ftp_upload/57759/Video3.mov" target="_blank">من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>مشكلة مع الثقافة</td>
			<td>علاج ممكن</td>
			<td>الوقاية الممكنة</td>
		</tr>
<tr>
<td>هو طغت الثقافة الروتيفر أو غيرها من الكائنات الكبيرة.</td>
			<td>إزالة العديد من ستنتور قدر الإمكان إلى طبق ثقافة جديدة. ثم تغسل الخلايا ثلاث مرات.</td>
			<td>يغسل ستنتور جيدا عند استلامها، حتى عند شرائها من مورد تجاري.</td>
		</tr>
<tr>
<td>الثقافة هي غارقة في الفطريات أو الكائنات الحية الصغيرة الأخرى.</td>
			<td>تحديد زاوية التي توجد فيها الأقل ستنتور. في هذا المجال، قم بإزالة الوسائط قدر ممكن دون إزالة العديد من ستنتور وإضافة كلمة جديدة. المزيج بلطف ولكن شاملة إلى ديستروبوتي الكائنات الغازية. تخطي تغذية القادم وسوف يأكل ستنتور لهم.</td>
			<td>مراقبة الثقافة بانتظام وإزالة الملوثات الصغيرة عن طريق تبادل الوسائط لكلمة جديدة.</td>
		</tr>
<tr>
<td>
يتم وضع ستنتور فوق بعضها البعض.</td>
			<td>تقسيم الثقافة حيث يكون التركيز أقل من 20 خلايا/مل.</td>
			<td>تقسيم الثقافات أكثر في كثير من الأحيان.</td>
		</tr>
<tr>
<td>
يتم التزاوج ستنتور الخلايا.</td>
			<td>تغذية كل 4 أيام بدلاً من كل 5 أيام.</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>الثقافة لديها الكثير من مواد النفايات الظلام.</td>
			<td>إزالة الكثير من المواد الداكنة، النفايات ستنتور بقدر الإمكان دون إزالة الخلايا. إذا تم إرفاق ستنتور مادة مظلمة، "الماصة؛" صعودا وهبوطاً الإفراج عن الخلايا ستنتور من نفاياتها ثم قم بإزالة وسائط الإعلام مع النفايات دون إزالة الخلايا. أو إزالة تلك ستنتور وتغذية تبعاً لذلك أقل.</td>
			<td>تغذية ستنتور 1 مل أقل الغذائية في 100 مل ثقافة.</td>
		</tr>
<tr>
<td>يبحث الصحية (الرغوة/المتضخمة أو مقربة) ستنتور.
</td>
			<td>قم بإزالة الوسائط قدر ممكن دون إزالة الخلايا ستنتور كثيرة وإضافة كلمة جديدة.</td>
			<td>تبادل وسائل الإعلام بانتظام.</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1. دليل استكشاف الأخطاء وإصلاحها لاستزراع ستنتور.

سيلياتي العملاقة، كوروليس ستنتور، نظام ممتاز لدراسة تجديد والتئام الجروح. نقدم الإجراءات لإنشاء ستنتور الثقافات الخلية من الخلايا المفردة أو أجزاء الخلية، وحفز التجدد بقطع الخلايا، كيميائيا حفز التجديد للفرقة ميمبرانيلار والجهاز عن طريق الفم، والتصوير، وتحليل للخلية التجديد.

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

الهدف العام من هذا البروتوكول هو زراعة Stentor لاستخدامها ككائن حي نموذجي لدراسة التجديد على مستوى الخلية الواحدة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال بيولوجيا الخلية مثل كيفية بناء الخلايا للهياكل من أجزاء منفصلة. تتمثل المزايا الرئيسية ل Stentor في أنها خلايا مفردة يمكن أن تتجدد وأنها كبيرة بما يكفي لإجراء عملية جراحية عليها.بشكل عام ، يتمثل الجزء الصعب في هذا البروتوكول في أن الناس معتادون على العمل مع الخلايا كثقافات وليس كأفراد. ابدأ بالبحث عن طبق بتري المحتوي على عينة Stentor تحت مجهر استريو باستخدام ضوء مائل بتكبير 5X. لاحظ أن خلايا Stentor تظهر شكلا يشبه البوق عندما يتم ربطها بركيزة.في حين أن خلايا Stentor السباحة غير متصلة ، إلا أنها أقل امتدادا في المظهر. باستخدام ماصة سعة مليلتر واحد، انقل خلايا Stentor الفردية إلى بئر صفيحة موضعية زجاجية تحتوي على 100 ميكرولتر على الأقل من مياه الينابيع المبسترة المتوفرة تجاريا. ثم قم بإزالة حوالي 90٪ من الماء في البئر دون إزالة خلايا Stentor وأضف 500 ميكرولتر من مياه الينابيع المبسترة العذبة إلى البئر ثلاث مرات لغسل الخلايا.لتغذية الخلايا ، قم أولا بنقل كمية ملليلتر واحدة من ثقافة الكلاميدوموناس إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل للطرد المركزي عند 2 ، 095 جم لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة. أعد تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من مياه الينابيع المبسترة لطرد مركزي ثان ، متبوعا بإعادة التعليق في 500 ميكرولتر من مياه الينابيع المبسترة. إذا كانت هناك حاجة إلى ثقافة Stentor نسيلة ، فقم بنقل 500 ميكرولتر من الوسط المكيف لكل ثقافة إلى آبار فردية من صفيحة موضعية زجاجية ونقل خلية Stentor واحدة إلى كل بئر متوسط.قم بإطعام كل مزرعة Stentor خمسة ميكرولترات من Chlamydomonas المحضرة كل 48 ساعة واحتفظ بالثقافات في منطقة مظللة. احسب عدد خلايا Stentor الجديدة قبل كل تغذية واضبط حجم Chlamydomonas التي يتم تسليمها وفقا لذلك. كل 96 ساعة ، قم بعمل ماصة وسط المزرعة برفق عدة مرات لفصل Stentor عن الغضروف المفصلي لكل بئر واستخدم ماصة سعة ملليلتر واحد لشفط الوسائط بعناية من الآبار دون إزالة أي خلايا.ثم أضف 500 ميكرولتر من الوسائط المكيفة الطازجة إلى كل بئر. عندما يتجاوز عدد الخلايا في بئر واحد على الأقل 20 ، أضف 20 مل من مياه الينابيع المبسترة إلى وعاء زجاجي معقم بالفم العريض وقم بفصل خلايا Stentor بعناية من قاع كل بئر كما هو موضح. اجمع كل خلايا Stentor باستخدام ماصة سعة مليلتر واحد وانقل الخلايا برفق إلى البرطمان الزجاجي.أضف مياه الينابيع المبسترة الطازجة إلى البرطمان كل 48 ساعة للحفاظ على كثافة Stentor إلى حوالي 20 خلية لكل مليلتر وتغذية خلايا Stentor ب 200 إلى 1،000 ميكرولتر من الكلاميدوموناس المحضرة. عندما يصل حجم المزرعة إلى حوالي 90٪ من سعة البرطمان ، انقل محتويات البرطمان بالكامل إلى وعاء زجاجي مكون من كوبين يغذي الثقافات ذات الحجم الكبير ملليلترين من الكلاميدوموناس المحضرة لكل 100 مل من المزرعة وإضافة مياه الينابيع المبسترة إلى المزرعة كل أربعة إلى خمسة أيام للحفاظ على كثافة Stentor عند حوالي 20 خلية لكل مليلتر. مرة واحدة في الأسبوع ، افحص الثقافات تحت مجهر تشريح 5X بحثا عن الروتيفر والفطريات والنمو الآخر باستخدام ماصة سعة مليلتر واحد لإزالة أي كائنات دقيقة ملوثة جنبا إلى جنب مع أي خلايا Stentor ذات شكل غير طبيعي وعديمة اللون.قم بتقسيم المزرعة عندما تكون الحاوية الزجاجية ممتلئة بنسبة 90٪ تقريبا ، مع إضافة 25 مل من مياه الينابيع المبسترة إلى المزرعة واستخدام ماصة سعة 50 مليلتر لفصل Stentor عن الزجاج كما هو موضح. ثم انقل حوالي 50٪ من الثقافة إلى وعاء زجاجي جديد بكوبين. للحث على التجدد عن طريق تجزئة الخلايا ، استخدم أولا مجتذب إبرة لعمل عدة إبر من الأنابيب الشعرية.بعد ذلك ، اجمع Stentor صحيا بشكل بوق محدد ، ولون أزرق وأخضر نابض بالحياة ، ولا توجد فجوات كبيرة في قطرة ميكرولتر. ضع القطرة على شريحة وأبطئ حركة Stentor باستخدام ميكرولترين من 4٪ ميثيل السليلوز. ضع القطرة تحت مجهر تشريح وأمسك الإبرة الزجاجية بالتوازي مع سطح القطع قدر الإمكان لمنع كسر الإبرة.اضغط برفق على الستانتر المتقلص بجانب الإبرة لتقسيم الطرف الأمامي للخلية من الطرف الخلفي للخلية. تأكد من أن كلا الجزأين لهما عقدة نووية واحدة على الأقل وانقل الشظايا إلى آبار فردية من صفيحة موضعية زجاجية. للحث على تجديد الشريط الغشائي والجهاز الفموي ، انقل 30 إلى 60 خلية Stentor في مليلتر واحد من وسط الثقافة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق واستخدم ماصة سعة 200 ميكرولتر لجمع جميع الخلايا من الأنبوب في سحب حجم واحد 125 ميكرولتر.قم بتوزيع الخلايا في أنبوب يحتوي على 500 ميكرولتر من السكروز الطازج بنسبة 25٪ وابدأ ساعة التوقف. بعد تحريك الخلايا الموجودة في الأنبوب في الرف لمدة دقيقة واحدة ، اجمع كل الخلايا في سحب واحد سعة 200 ميكرولتر واحتفظ بالخلايا في طرف الماصة حتى تعرض ساعة الإيقاف دقيقتين من معالجة السكروز. ثم قم بإخراج Stentor في أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على ملليلتر واحد من مياه الينابيع المبسترة لثلاث عمليات غسيل سنب.لتصوير التجديد، أضف 100 ميكرولتر من مياه الينابيع المبسترة في بئر واحد من صفيحة موضعية زجاجية واستخدم طرف ماصة سعة 20 ميكرولتر لتجميع خلية Stentor واحدة في أربعة ميكرولترات من وسائط الاستزراع. قم بإيداع القطرة في منتصف غطاء 22 × 22 ملم مربع وضع أربع قطرات أخرى حول القطرة السابقة. اقلب الغطاء وضعه برفق فوق البئر بمياه الينابيع المبسترة.ثم قم بتصوير الخلايا المتجددة تحت المجهر الضوئي بدقة الوقت المناسبة. خلال المرحلة الأولى من التجديد ، والتي تحدث مباشرة بعد غسل السكروز ، تبدو خلايا Stentor مثل قطرات الدموع بدون أي شريط غشائي بعد ثلاث إلى ست ساعات ، يظهر شريط غشائيهذه المرحلة ، المرحلة الثانية ، تستمر من ثلاث إلى أربع ساعات أخرى. تحدث المرحلة الثالثة عندما يظهر البدائية الفموية في الطرف الخلفي من الشريط الغشائي ويبدأ كلا الهيكلين في التحرك نحو الطرف الأمامي للخلية. تستمر هذه المرحلة لمدة ساعة إلى ساعتين.عندما يصل كل من الشريط الغشائي والجهاز الفموي إلى الطرف الأمامي للخلية ، يكتمل التجديد وستتبنى الخلية الشكل المميز الذي يشبه البوق Stentor. ارسم النسبة المئوية للخلايا في كل مرحلة من مراحل التجديد في كل نقطة زمنية في مخطط مربع مكدس. يكشف قياس وقت التجديد بعد قطع الخلايا والعلاج بالسكروز عن انتشار لمدة ساعة في الوقت الذي يستغرقه سكان الخلايا للوصول إلى أي مرحلة معينة مما يدل على عدم التجانس الزمني لعملية التجديد داخل مجموعة معينة من الخلايا المتجددة.بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية ثقافة Stentor وبدء تجديدها وتحديدها. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر التحلي بالصبر. يستغرق Stentor من ثلاثة إلى خمسة أيام للتقسيم في الثقافة ويتطلب تحديد مراحل تجديد Stentor ممارسة.ستمهد هذه التقنية الطريق لباحثي بيولوجيا الخلية لاستكشاف التجديد في Stentor.

methods-for-the-study-of-regeneration-in-stentor

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

نموذج لدراسة جاذبية تمايز الخلايا الجذعية داخل الحيوانات الحية هي دودة مسطحة مستورقة. هو درس تجارب التجديد التي بتر بسيطة التي يتم تنفيذها بسهولة في المختبر الأساسية وقابلة لل(والدوائية...

فحوصات الوراثية الدوائية وظيفية للتلاعب تجديد مستورقة Dugesia تفرضه اليابان</em

وصفت وسيلة فعالة لتطعيم الأنسجة من حجم محدد وثابت بين المستورقات. كما تضمنت وصفا للطريقة التي يمكن أن تتكيف تقنية تجميد المستخدمة لزراعة الأعضاء، وبالتزامن مع دروع الرصاص، لتشعيع جزئي للحيوانات الحية.

تجميد مستورقة، التشعيع جزئي، والنسج

يوصف نموذج من زرع الدعامات في الشريان السباتي الماوس. بالمقارنة مع الطرق الأخرى المماثلة، هذا الإجراء هو سريع جدا وبسيطة ويمكن الوصول إليها، وتقدم إمكانية للدراسة في وسيلة مريحة رد فعل جدار الأوعية الدموية لمختلف المخدرات يبلغ حجمه الدعامات والآليات الجزيئية لعودة التضيق.

نموذج الفئران من زرع دعامات في الشريان السباتي لدراسة عودة التضيق

الهدب العملاق Stentor coeruleus هو نظام كلاسيكي لدراسة التجديد والتئام الجروح في الخلايا المفردة. من خلال تصوير خلايا Stentor في وقت واحد بتكبير منخفض وعالي ، من الممكن قياس التدفقات السيتوبلازمية قبل الجرح وأثناءه وبعده.

تصور التدفق السيتوبلازمي أثناء التئام الجروح أحادية الخلية في Stentor coeruleus

لأنه يتم دراسة العديد من النماذج الزرد من الأمراض العصبية وغير العصبية في الأسماك البالغة بدلا من الجنين / اليرقات، وضعنا كمية الجانبي الخط التجديدي الفحص التي يمكن تطبيقها على نماذج المرض الزرد الكبار. تشارك مقايسة القرار في 1) neuromast و2) مستويات خلية الشعر الفردية.

على الفحص لتجديد الخط الجانبي في اسماك الزرد الكبار

هنا نقدم البروتوكول الذي يقوم على شرائح النخاع الشوكي مثقف على صفائف متعدد القطب لدراسة تجديد الوظيفي للاتصالات نخاعي مخصوص في المختبر.

التحقيق التجديد الوظيفي في الحبل الشوكي عضوي النمط المشارك الثقافات نمت على صفائف متعدد القطب

يتم عرض بروتوكول فيديو خطوة بخطوة للاستئصال القمي في هذه الدراسة. الاستئصال القمي هو نهج جراحي تم تسليط الضوء عليه مؤخرا في أبحاث تجديد قلب الثدييات. قد تعزز هذه الدراسة تطبيق الاستئصال القمي كمنهجية قياسية في البحث في الآلية الكامنة وراء تجديد القلب.

قمي استئصال نموذج الفأر لدراسة المبكر الثدييات تجديد القلب

نوضح هنا كيفية تحفيز ومراقبة التجدد في شقائق النعمان البحرية النجمية Nematostella vectensis ، وهو نموذج أنثوزوان مجوف مجوف.  نوضح كيفية بتر وتصنيف التجديد باستخدام نظام التدريج المورفولوجي ، ونستخدم هذا النظام للكشف عن متطلبات الالتهام الذاتي في تجديد هياكل الاورام الحميدة.

حمل كاملة ورم التجديد من مجافي الفم المنفخة من البحر شقائق النعمان النجيم Nematostella vectensis

نقدم بروتوكولا لتوصيف حركية وسلوك مجموعة من مائة خلية بحجم ميكرون إلى ملليمتر باستخدام المجهر الساطع وتتبع الخلايا. يكشف هذا الفحص أن Stentor coeruleus ينتقل عبر أربع مراحل متميزة سلوكيا عند تجديد جهاز فموي مفقود.

تحليل أنماط حركية السدادة أثناء وبعد تجديد الجهاز الفموي باستخدام تتبع الخلايا

هنا نوضح سير العمل لاستخدام نظام TetON لتحقيق التعبير الجيني الخاص بالأنسجة في زعنفة ذيل الزرد المتجددة للبالغين.

استخدام نظام تيتون لدراسة الآليات الجزيئية لتجديد الزرد

اكتشف أساليب دراسة التجديد في الخلية الواحدة باستخدام Stentor coeruleus كنموذج حي. تُمكّن هذه البروتوكولات الباحثين من إجراء عمليات جراحية دقيقة وتحليل آليات إعادة بناء الهياكل الخلوية.

أساليب لدراسة التجديد في ستنتور

استكشف المزيد من الفيديوهات