كثرة أخذ عينات الدم الذيل-نصيحة في الفئران للتقييم لإفراز الهرمون نابض

الهدف العام من أخذ عينات الدم المتكررة من طرف الذيل هو الحصول على عينات دم كاملة لقياس إفراز الهرمون اللوتيني النابض المشار إليه باسم LH في الفئران المستيقظة غير المخدرة والطبيعية التصرف. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الغشاء العصبي التكاثري من خلال توفير بروتوكول موثوق به لتقييم إفراز هرمون اللوتين النابض في الفئران. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن المناولة المتكررة والتعود عليها ستضمن قياسات قوية وموثوقة لنبض هرمون اللوتين بعد العلاجات التجريبية الحادة أو المزمنة.

لمدة خمسة أسابيع قبل جمع الدم ، تعامل مع الفئران يوميا من الاثنين إلى الجمعة. في الأسبوعين الأخيرين ، تعامل مع الفئران يومي السبت والأحد أيضا. قم بتنفيذ نظام التعامل مع الماوس في خزانة السلامة الحيوية.

قم بإزالة الماوس الأول من قفصه وضعه على سطح مناسب داخل الخزانة. كبح جماح الماوس برفق على هذا السطح عن طريق الإمساك بقاعدة ذيله. ثم باليد الأخرى ، قم بضرب السطح البطني للذيل بقوة من القاعدة إلى الحافة.

افعل ذلك ما مجموعه ست مرات ثم أعد الماوس إلى قفصه. هذا يشكل مجموعة مناولة واحدة. انتظر الآن ست دقائق وقم بإجراء مجموعة معالجة أخرى.

استمرارا لهذا النمط مع الفواصل الزمنية بين المجموعات، قم بإجراء أربع مجموعات مناولة لكل جلسة مناولة. في المجموع ، يوفر هذا أربعة وعشرين ضربة ذيل في كل جلسة. إذا كانت العلاجات التجريبية خلال فترة أخذ العينات ستتضمن أي طرق معالجة إضافية مثل التقشير أو الحقن داخل الصفاق ، فقم أيضا بتأقلم الفئران مع نشاط المناولة هذا أثناء جلسات المناولة.

قبل أسبوعين من يوم جمع الدم المخطط له ، قم بإيواء الفئران في أزواج لتقليل اضطرابها خلال فترة أخذ العينات. لجمع الدم ، قم بإعداد أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 0.6 مل لتخزين الدم. قم بتسمية الأنابيب وللحصول على ثلاث مجموعات دم ميكرولتر ، قم بإضافة سبعة وخمسين ميكرولترا من المخزن المؤقت للأنجيم المحول للأنجيوتنسين في كل أنبوب.

بمجرد تحضيرها ، قم بتخزين الأنابيب عند أربع درجات مئوية. في خزانة السلامة الحيوية ، جهز العناصر التالية: أطراف الماصة ، وصندوق النفايات ، والمؤقت ، والسجل التجريبي ، ودلو ثلج يحتوي على أنابيب جمع الدم ، ومقص حاد ، ومعقم ، وعلامة دائمة ، وشاش صغير. قبل خمس وأربعين دقيقة من البدء في جمع الدم ، أخرج الفأر الأول من قفصه وضعه على سطح مناسب.

ثم ضع علامة على الذيل للتعرف بسرعة على هذا الماوس من شريكه في القفص. استخدم الآن المقص لإزالة ملليمتر إلى ملليمتر من طرف الذيل. بعد قص هذا الذيل ، قم بضرب الذيل بعناية حتى تتشكل قطرة دم عند الحافة.

ثم اجمع ثلاثة ميكرولترات من الدم وتخلص من الدم والطرف في سلة المهملات. بعد ذلك ، تأكد من توقف تدفق الدم. إذا لزم الأمر ، قم بالضغط اللطيف بشاش معقم.

ثم أعد الماوس إلى قفصه لمدة ست دقائق. الآن على فترات ست دقائق على مدى خمس وأربعين دقيقة ، قم بضرب الذيل بقوة لأخذ عينات دم إضافية من الفأر. إذا لم تتشكل قطرة دم ، فقم بمسح الذيل بقطعة شاش مبللة بالمحلول الملحي للمساعدة في إزالة الجلطة الدموية.

خلال فترة ما قبل أخذ العينات ، تخلص من جميع حصص الدم. بعد خمس وأربعين دقيقة ، ابدأ فترة أخذ العينات. عند أخذ العينات، انقل ثلاثة ميكرولترات من الدم إلى أنبوب تجميع، امزج الأنبوب عن طريق الانعكاس وضعه مرة أخرى على الجليد.

تابع الآن أخذ العينات طالما كان ذلك ضروريا. بمجرد الانتهاء ، إما القتل الرحيم للفئران أو التأكد من توقف تدفق دم الذيل تماما ثم تزويد الفئران بقفص نظيف. بعد ذلك ، انقل عينات الدم إلى صندوق تخزين وقم بتخزين العينات عند درجة حرارة عشرين درجة مئوية تحت الصفر حتى يمكن تحليلها.

تم قياس الهرمون اللوتيني أو الهرمون اللوتيني في عينات الدم المتكررة لتحديد الاستجابة لتحدي الإجهاد النفسي والاجتماعي الحاد. تم تكميل المبيض للإناث البالغة C57 Black Black Six Ratect وتم جمع عينات الدم لمدة تسعين دقيقة لإنشاء خط أساس للمعالجة المسبقة لإفراز LH النابض. لعلاج الإجهاد خلال تسعين دقيقة من أخذ العينات ، تم وضع التجارب في أجهزة تقييد القوارض ونقلها إلى قفص جديد بينما بقيت الضوابط في أقفاص منازلهم ولم يتم تقييدها.

أظهر التحليل أن التحكم لديها نبضات LH واضحة لا لبس فيها طوال فترة أخذ العينات بأكملها. في المقابل ، أدى الإجهاد النفسي والاجتماعي لضبط النفس بسرعة وبشكل لا لبس فيه إلى قمع إفراز LH النابض في المجموعة التجريبية. عند التحضير لاستخدام هذه التقنية ، من المهم أن تتذكر تقليل الاضطرابات البيئية مثل الضوضاء أو الانقطاعات من قبل محققين آخرين والتي يمكن أن تضغط على الفئران وتقطع إفراز الهرمون اللوتيني النابض.

منذ تطويرها من قبل الدكتور شتاين وآخرين في مختبر تشين ، بدأت هذه التقنية في تمهيد الطريق للباحثين في مجال علم الغدد الصماء العصبية لاستكشاف تنظيم نبض الهرمون اللوتيني في الأنواع التي تكون فيها الأدوات الجزيئية والوراثية المعقدة عملية ومتاحة.