الآنف الفرق المحتملة التحديد الكمي للنقل عبر الظهارية أيون في الفئران

يعد اختلاف إمكانات الأنف طريقة قيمة لتوصيف النمط الظاهري للفئران المعدلة وراثيا التي تقوم بنمذجة التليف الكيسي. يسمح بالتحقيق في فعالية أنواع جديدة من العلاجات للتليف الكيسي. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية في أنها توفر قياسات موثوقة في الفئران المتكاثرة باستمرار.

يقلل من معدل الوفيات ذي الصلة ويسمح بتكرار الاختبار في نفس. لتحضير قسطرة الأنف ذات التجويف المزدوج ، احتفظ بمنتصف أنبوب البولي إيثيلين بطول 20 سم في اللهب لمدة 10 إلى 15 ثانية حتى يصبح طريا بدرجة كافية للسحب. بعد ذلك ، اسحب الطرفين بعيدا عن بعضهما البعض للحصول على أنبوب شعري رفيع جدا يبلغ طوله حوالي 15 سم وقطر خارجي يبلغ 0.1 ملم لمسبار الأنف.

بعد ذلك ، قم بتنظيف الشعيرات الدموية وتقليل الشحوم باستخدام الإيثانول النقي. انضم إليهم بشريط لاصق وألصقهم معا باستخدام غراء سيانواكريلات. اقطع الطول الزائد للمجسات بشفرة حلاقة للحصول على قسطرة التجويف المزدوجة التي يبلغ طولها حوالي ثمانية سنتيمترات.

بعد ذلك ، قم بحقن الماء من خلال كلا اللومن للتحقق من أنها قابلة للاختراق ، وقم بوضع علامة على مسافة خمسة ملليمترات من الحافة. بعد ذلك ، قم بإعداد مزيج كريمي عن طريق خلط كريم الإلكتروليت ومحلول البوتاسيوم المشبع بثلاثة مولار بنسبة واحد إلى واحد ، وتجنب تكوين فقاعات هواء صغيرة. بالنسبة للإعداد التجريبي ، لمنع انخفاض حرارة الجسم أثناء الاختبار وبعده ، استخدم وسادتي تسخين ، واحدة لإعداد القياس ، والأخرى للصندوق الذي سيتم وضع فيه للتعافي في نهاية الاختبار.

قم بتشغيل الكمبيوتر المتصل بذاكرة البيانات ومقاومة الإدخال العالية والفولتميتر عالي الدقة. ثم افتح البرنامج لالتقاط البيانات. قم بتوصيل الأقطاب الكهربائية بالفولتميتر.

اغمس طرف الأقطاب الكهربائية معا في مزيج الكريمة. تحقق من قيمة إزاحة القطب الأولي وارفض الأقطاب الكهربائية إذا كانت القيمة أكبر من زائد أو ناقص مللي فولت. بعد ذلك ، قم بتشغيل المضخة التمعجية وأدخل أنبوب المضخة في التجويف النفاذي للقسطرة الأنفية.

املأ لومن واحد من قسطرة الأنف بمزيج كريم الإلكتروليت من خلال طرف ماصة سعة 10 ميكرولتر. قم بتكييف القسطرة مع موصل أنبوب السيليكون ، واملأ الموصل بمزيج الكريم. بعد ذلك ، أدخل القطب الموجب في الموصل.

تحقق من قيمة إزاحة جسر قطب القياس وارفض الجسور إذا كانت القيمة أكبر من زائد أو ناقص مللي فولت. بعد ذلك ، قم بتوصيل المخرج القريب لأنبوب المضخة بالقارورة التي تحتوي على المحلول المحدد لنضح الأنف. ثم قم بتوصيل المخرج البعيد لأنبوب المضخة بتجويف التروية للقسطرة الأنفية.

بعد ذلك ، املأ التجويف الثاني لقسطرة الأنف بمحلول جديد A1. اغمس طرف القسطرة الأنفية في القارورة التي تحتوي على محلول أ.عكس اتجاه المضخة التمعجية لملء طول القسطرة الأنفية المقابلة ل 10 ثوان من التروية. بعد ذلك ، قم بطي ورقة من الأنسجة الممتصة لعمل وسادة بعرض ثلاثة سنتيمترات سيتم استخدامها كدعم لرأس الفأر. قم بتغطية وسادة التسخين بورقة الأنسجة الممتصة.

ثم ضع الماوس على ظهره على وسادة التدفئة ، وقم بلصق الأطراف والذيل على الوسادة. بعد ذلك ، أدخل القسطرة الوريدية المرجعية في الفراغ تحت الجلد للطرف الخلفي. قم بإزالة الإبرة وتكيف مع موصل أنبوب السيليكون.

املأ القسطرة والموصل بمزيج الكريم. بعد ذلك ، قم بتوصيل قطب القياس الموجب بالقسطرة الأنفية ، والقطب المرجعي السالب بالقسطرة التي يتم إدخالها في الفضاء تحت الجلد في الطرف الخلفي للحيوان. بعد ذلك ، قم بتثبيت القسطرة والقطب الكهربائي بشريط لاصق كما هو مطلوب لمنع أي إزاحة.

بعد وضع القطب المرجعي والجسور ، تحقق من قيمة إزاحة جسر القطب الكهربائي مرة أخرى عن طريق غمس طرف قسطرة الأنف في مزيج كريم القطب الكهربائي داخل موصل القسطرة الوريدية. سجل قيمة الإزاحة المستقرة والنهائية. الآن ، قم بتثبيت آذان الماوس بشريط لاصق على وسادة التسخين في مساحة خالية بين قطعتين من الأنسجة الممتصة.

إصلاح الحيوية دون لمس العينين. لامتصاص السوائل من تجويف الفم ، حرك اللسان جانبا وأدخل فتيلا مدببا من ورق الترشيح حوالي سنتيمتر واحد في الفم. لامتصاص السوائل التي تنفد من فتحة الأنف المنفوخة ، ضع قطعة ثانية من ورق الترشيح عند مقدمة الأنف.

تحقق من قيمة التحكم الإيجابي للإمكانات الظهارية عن طريق وضع طرف قسطرة الأنف في داخل الفم. أمسكها بالملقط الدقيق وتحت إضاءة مباشرة جيدة ، أدخل قسطرة الأنف بدقة في فتحة أنف واحدة ، حتى أربعة إلى ستة ملليمترات من طرف الأنف. بعد خمس دقائق من حقن أدوية التخدير ، قم بإمالة وسادة التدفئة برفق بحوالي 30 درجة مع وضع رأس لأسفل.

راقب الحد الأقصى لقيمة PD القاعدية. عندما يكون مستقرا لأكثر من 30 ثانية ، ابدأ في نفخ الغشاء المخاطي للأنف بمعدل 10 ميكرولتر في الدقيقة باستخدام المحاليل الأربعة المخزنة على التوالي. قم ببث المحلول الأول لمدة 10 ثوان ، وكل محلول لاحق لمدة خمس دقائق ، أو حتى يتم الوصول إلى جهد مستقر.

التوقف عن perfizing Forskolin عندما تبدأ استجابة Forskolin العابرة في الهبوط. بعد التقييم ، حرر الماوس من وسادة التدفئة. قم بإدارته بمزيج مضاد التخدير وانقله إلى صندوق الاسترداد مع وسادة التدفئة حتى الشفاء التام.

فيما يلي تتبع باركنسون الأنف التمثيلي من فأر متماثل الزيجوت وطبيعي وفأر متماثل اللواقح لطفرة CFTR لحذف F508 ، جنبا إلى جنب مع القيم الفردية التي تم الحصول عليها لمعلمات PD الأنفي. استجابة أميلوريد هي الفرق بين قيم PD الأنفي في نهاية وبداية نضح الغشاء المخاطي للأنف مع محلول الملح القاعدي المحزن الذي يحتوي على أميلوريد. الاستجابة الخالية من الكلوريد هي الفرق بين قيم PD الأنفي في نهاية وبداية نضح الغشاء المخاطي للأنف بمحلول ملح مخزن خال من الكلوريد ، بالإضافة إلى أميلوريد.

استجابة فورسكولين هو الفرق بين قيم PD الأنفي في نهاية وفي بداية نضح الغشاء المخاطي للأنف مع محلول الملح المحزن الحرة من الكلوريد, بالإضافة إلى فورسكولين وأميلوريد. الاستجابة الكلية للكلوريد هي مجموع المعلمتين الأخيرتين اللتين تم الحصول عليهما تحت تروية الكلوريد الصفرية. يمكن استخدام المشروع لاستكشاف وتوفير المنشقين في النقل في الفأر ، ولكن أيضا في النقانق ، في الكبير ، وفي نموذج التليف الكيسي النمس.

ومنشقي نقل الصوديوم في نموذج فأر الخصي. يمكن دراسة جميع الناقلات من خلال اعتماد البروتوكول. يعد العمل في تجويف الأنف للقوارض أمرا حساسا للغاية بسبب الجدار الأساسي للمدخلات الحسية من منطقة الوجه الأنفي.

الموت الكافي للتخدير هو تحدي خاص عند التشغيل في تجويف أنف الفأر.