تقييم صحة الأسماك البرية المستندة إلى نيكروبسي

يستخدم تقييم صحة الأسماك القائم على التشريح لتقييم صحة الأسماك البرية للمراقبة الروتينية والدراسات المحددة التي تقارن المواقع وكأساس لجمع الأنسجة لمزيد من التحليل المتعمق. تتعرض الأسماك باستمرار لمجموعة من الضغوطات مثل الخلائط المعقدة من المواد الكيميائية ومسببات الأمراض والطفيليات. يمكن أن تؤدي هذه المجموعات من الضغوطات إلى آثار ضارة مثل انخفاض مقاومة الأمراض والسرطان والفشل الإنجابي.

تسمح التقنيات الموضحة بإجراء تقييم موحد للتشوهات المرئية وجمع الدم والأنسجة لعلم الأنسجة المرضية ، والأذن للعمر والأنسجة لتحليلات المصب الأخرى. أولا سنوضح التقييم الروتيني القائم على التشريح باستخدام الدم والأذن والأنسجة لجمع الأنسجة لعلم الأنسجة باستخدام سمكة واحدة. مجموعة الكلى الأمامية لمقايسات الوظيفة المناعية والكبد أو الأنسجة الأخرى للتعبير الجيني هي إضافات إلى هذه الطريقة التي سنوضحها أيضا.

من المهم جمع الأنسجة في أسرع وقت ممكن لتجنب أي تغييرات بعد الوفاة. لذلك لدينا عموما عملية خط تجميع مع شخصين إلى ثلاثة أشخاص يجمعون الأنسجة وشخص ما يسجل البيانات. ستظهر هيذر والش وشيان سميث ، طلاب الدكتوراه من جامعة وست فيرجينيا وريان براهام ، خريج الدكتوراه حديثا ، الخطوات المختلفة في هذه العملية.

بعد جمع الأسماك وقتلها الرحيم وفقا للإرشادات المؤسسية ، قم بوزن وقياس الأسماك والحصول على عينة دم. بعد ذلك ، قم بقياس الطول الإجمالي للأسماكة من طرف الخطم إلى نهاية الذيل. أدخل حقنة CC ثلاثية بإبرة قياس 22 أو 23 ، مغلفة مسبقا بالهيبارين ، أمام المنطقة الذيلية أسفل الخط الجانبي.

قم بزاوية الحاجة لأعلى حتى تصل إلى العمود الفقري واسحبها قليلا للحصول على عينة دم. قبل نقل عينة الدم إلى أنبوب التجميع ، قم بإزالة الإبرة وضعها في سلة الأدوات الحادة. بالنسبة للرحلات النهارية ، يمكن الاحتفاظ بالدم على الجليد الرطب حتى العودة إلى المختبر.

ثم يتم طردها لإزالة البلازما التي تم تخزينها عند 80 درجة مئوية تحت الصفر حتى يتم تحليلها. إذا لم تعد إلى المختبر كل يوم ، فمن الضروري استخدام جهاز طرد مركزي وتخزين الثلج الجاف. بعد ذلك ، قم بتوثيق أي تشوهات أو آفات خارجية على الجسم والزعانف والعينين وخياشيم الأسماك.

افحص الأسماك بحثا عن الطفيليات الخارجية مثل واليرقات والخراجات المثقوبة وطفيليات الخياشيم. ثم استخدم المقص لفتح تجويف البطن من منطقة الشرج إلى الأوبركولوم. قم بإزالة رفرف العضلات لفضح الأعضاء الداخلية.

فحص الأعضاء الداخلية وتوثيق التغيرات العامة والبؤرية ، ووجود مناطق مرتفعة ، والخراجات ، والطفيليات ، وتشوهات الحجم. بعد ذلك ، لإزالة الكبد ، قم بقطع الشريان الكبدي والنسيج الضام للنهاية الأمامية. ارفع الكبد برفق من الذبيحة وقم بقص أي التصاقات ووصلات بالأمعاء والدهون الدهنية مع الحرص على عدم ثقب المرارة.

وزن الكبد. ثم احصل على مؤشر الكبد الجسدي كما هو موضح في بروتوكول النص. بعد ذلك ، قم بإزالة الغدد التناسلية ووزنها.

بعناية ، دون سحب ، قم بقطع عينات الأنسجة الصغيرة. ضع عينات الأنسجة من سمكة واحدة في نفس الحاوية. بعد ذلك ، قم بقص ما لا يقل عن خمس أو ثلاثة إلى أربعة قطع بسمك من مناطق مختلفة من الكبد وضعها في حاوية التثبيت.

اعتمادا على الحجم ، ضع غدد تناسلية كاملة أو قطعا من الغدد التناسلية في حاوية التثبيت. ثم ضع أعضاء كاملة أصغر وقطعا من الأعضاء الأكبر حجما الأخرى في الحاوية التثبيتية. إذا لوحظت أي أنسجة غير طبيعية ، فاحتفظ بقطعة مجاورة إضافية من الأنسجة الطبيعية.

يمكن استخدام العديد من الهياكل مثل المقاييس وأشعة الزعانف والأوتوليث لشيخوخة الأسماك. نحن هنا نستخدم otoliths لأنها الأكثر دقة. أولا ، قم بقطع برزخ الخياشيم وثني الرأس للخلف.

ثم لتحديد موقع الفقاعة المبدئية ، قم بإزالة الأنسجة الضامة والعضلية حول الأجزاء السفلية من الجمجمة العصبية. استخدم قاطع العظام لكسر الفقاعات المبتذلة وفضح الأذن. يجب أن تكون الأوتوليث مرئية للعين المجردة.

ضع الأوتوليت في قارورة مصنفة وغير مغطاة وقم بتخزينها في درجة حرارة الغرفة حتى يمكن إجراء تحليل العمر. يمكن أن يؤدي التعرض للعديد من المواد الكيميائية والضغوطات البيئية الأخرى إلى تثبيط المناعة. يمكن عزل الخلايا الليمفاوية والضامة والخلايا الحبيبية من هذا النسيج وفي المختبر قدرتها على قتل مسببات الأمراض وإنتاج الأجسام المضادة والاستجابة للخلايا السرطانية ويمكن قياس الوظائف الأخرى.

باستخدام مقص معقم ، يزيل المشرط والملقط أنسجة الكلى الأمامية. ضع عينة الكلية الأمامية في الوسط المناسب للحفاظ على الخلايا على قيد الحياة. استخدم مطحنة مناديل معقمة محمولة لتجانس العينة في معلقات أحادية الخلية.

واحتفظ بالعينات على الثلج الرطب. للحفاظ على الحمض النووي الريبي ، ضع قطعتين إلى ثلاث قطع صغيرة من الكبد في مادة حافظة مناسبة بنسبة 10 إلى واحدة من المواد الحافظة إلى الأنسجة. في هذه الدراسة ، تم جمع المصاصون البيض من ثلاث مناطق مثيرة للقلق في البحيرات العظمى ، أو AOCs ، والموقع المرجعي لنهر كيواني.

تراوحت النسبة المئوية للأسماك المصابة بأورام خارجية من 15.5٪ في St.Louis AOC إلى 58٪ في Milwaukee AOC. لوحظت عدة أنواع من الآفات الخارجية بما في ذلك البقع البيضاء السرية والآفات المخاطية المرتفعة قليلا والآفات الحليمية الكبيرة. كانت العديد من البقع البيضاء المنفصلة والآفات المخاطية التي لوحظت في هذه الدراسة ، لا سيما في موقع Kewanee المرجعي ، آفات مفرطة التنسج بدلا من الأورام.

حدد التحليل النسيجي المرضي أيضا أورام الكبد التي لم يكن من الممكن التعرف عليها من خلال الملاحظة البصرية. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في غضون 15 إلى 20 دقيقة لكل سمكة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم معرفة ما هو طبيعي لجنسك الخاص وأن تكون متسقا ودقيقا قدر الإمكان في وصف التشوهات.

قم بتضمين الحجم واللون والملمس والموقع. وثائق الصور مفيدة. يمكن استخدام هذه التقنية لأي نوع من أنواع الأسماك وهي مفيدة لتوثيق صحة الأسماك مكانيا وزمانيا لفهم الآثار الضارة للضغوطات البيئية بشكل أفضل وتحديد الأمراض الغازية.