أجبر اللعاب كأسلوب لتحليل اختصاص البعوض ناقل

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الأمراض التي ينقلها البعوض ، مثل ما إذا كان نوع البعوض ناقلا منافسا لفيروس معين أم لا. الميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي أنه يمكن تحليل كمية كبيرة من البعوض في وقت واحد ، دون استخدام المختبر مثل الفئران. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأنها تحتاج إلى مهارات حركية دقيقة لا يمكن اكتسابها إلا من خلال الممارسة.

العرض المرئي لهذه التقنية أمرا بالغ الأهمية ، حيث يصعب تعلم الخطوات الرئيسية. إنها تتطلب خبرة في التعامل مع البعوض والفيروسات ، وكذلك المهارات الحركية الدقيقة. للبدء ، قم بتخفيف مخزون الفيروس. بعد ذلك ، امزج دم الإنسان منتهي الصلاحية مع الفركتوز ومصل الأبقار المفلتر ومخزون الفيروس.

قم بتجميد 140 ميكرولتر من مزيج دقيق الدم لمزيد من التحليل عبر TCID50. بعد ذلك ، ضع قطرتين سعة 50 ميكرولتر من مزيج دقيق الدم في قارورة بلاستيكية ، واترك البعوض يتغذى لمدة ساعتين. بعد تخدير البعوض ، عد الأفراد المصابين بالاحتقان الكامل ، وانقلهم إلى قارورة جديدة تحتوي على وسادة قطنية مبللة بالفركتوز.

ثم حافظ على البعوض عند 27 درجة مئوية و 80٪ رطوبة لمدة 14 أو 21 يوما. قم بتجديد ضمادات القطن المشبعة بالفركتوز كل 72 ساعة ب 1.5 مل من الفركتوز. أولا ، قم ببذور 20،000 خلية فيرو لكل بئر في صفيحة 96 بئرا مع وسط نمو مكمل.

لتحضير جهاز إفراز اللعاب ، ضع لوحا زجاجيا مربعا على المقعد بزاوية 30 درجة. ثم قم بلصق شريط على الوجهين بالجزء العلوي من اللوحة الزجاجية. بعد ذلك ، قم بلف طين النمذجة حتى يبلغ قطره 0.5 سم ، وقم بتثبيته على اللوحة أفقيا على بعد سنتيمتر واحد من الشريط على الوجهين.

قم بقص الأطراف من العدد المطلوب من أطراف المرشح سعة 10 ميكرولتر ، واملأ كل طرف ب 10 ميكرولتر من PBS. بعد ذلك ، ضع النصائح على طين النمذجة ، وقم بتثبيتها بضغط لطيف. بعد ذلك ، قم بشل حركة البعوض عن طريق إزالة أرجلهم وأجنحتهم.

ثبت البعوض على الشريط الموجود فوق أطراف المرشح. ضع خرطوم كل بعوضة برفق في طرف مرشح. بعد 30 دقيقة ، قم بإزالة أطراف المرشح ، وتخلص من الطين والشريط اللاصق.

انقل اللعاب الذي تم جمعه إلى أنابيب تفاعل تحتوي على 10 ميكرولتر من PBS. اخلطي اللعاب و PBS برفق ، وانقلي الخليط إلى آبار طبق 96 بئرا. احتضان اللوحة لمدة سبعة أيام عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

باستخدام المجهر الضوئي ، تحقق من وجود الخلايا بحثا عن تأثير الاعتلال الخلوي. بمجرد أن يصبح البئر إيجابيا لتأثير الاعتلال الخلوي ، استخدم ماصة لحصاد 140 ميكرولترا من المادة الطافية. ثم انقل المادة الطافية إلى أنبوب التفاعل.

بعد ذلك ، امزج 140 ميكرولترا من المادة الطافية مع 560 ميكرولتر من المخزن المؤقت AVL ، واحتضنه لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أخيرا ، أضف 560 ميكرولتر من الإيثانول ، واقلب العينة للخلط. وباستخدام هذا البروتوكول، تم اختبار العديد من أنواع البعوض للكشف عن عدوى فيروس زيكا وانتقاله في ظل ظروف مناخية مختلفة.

في ظل ظروف حضانة 27 درجة مئوية ، أظهرت جميع أنواع الزاعجة لعاب فيروس زيكا. على العكس من ذلك ، لم تحتوي أي من عينات اللعاب من أصناف Culex على دليل على الفيروس. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية ل 50 بعوضا في ساعة واحدة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء تجارب إفراز اللعاب القسري. لا تنس أن العمل مع البعوض المصاب يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، لذلك يجب دائما اتخاذ تدابير السلامة الخاصة للتعامل مع البعوض في ظل ظروف BSA-3 أثناء إجراء أي تجربة.