سحجه الظهارة القرنية مع لدغ العين كنموذج للقرنية التئام الجروح

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة بالآليات الخلوية والجزيئية المتضمنة أثناء التئام جروح القرنية. من مزايا هذه التقنية أنها تعكس المواقف في غرفة الطوارئ في حالة إدخال القرنية ، مما يعني التآكل أو الخدش على سطح العين. خطرت لي فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما كنت أدرس الخلايا السلفية الظهارية للقرنية ، وسلوكها في موقف يتحدى الحفاظ على استتباب القرنية.

العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية ، لأن إجراء تآكل القرنية أمر صعب ، ويتطلب ممارسة. أولا ، قم بإعداد محلول فلوريسين بنسبة 0.1٪ لتصور التآكل تحت ضوء الكوبالت الأزرق عن طريق قياس 10 ملليغرام من ملح فلوريسين بمقياس دقيق. ثم أضف الملح إلى 10 مل من محلول ملحي مخزن في فوسفيت.

احم محلول فلوريسين من الضوء ورجه لمدة خمس دقائق. قم بتصفية المحلول المعقم في زجاجة قطارة ، واحميها من الضوء. يمكن تخزين محلول فلوريسين عند أربع درجات مئوية لمدة يومين إلى ثلاثة أيام.

نظف طرف الأزيز العيني قبل الاستخدام وبعده. أولا ، مع PBS ، ثم مع 70٪ إيثانول. ابدأ بوضع الفأر المخدر على منشفة ورقية على طبق تسخين ساخن إلى 37 درجة مئوية.

تحقق من مستوى التخدير عن طريق إعطاء قرصة الذيل وقرص إصبع القدم. يكون مستوى التخدير جيدا إذا كان منعكس الذيل غائبا ولكن منعكس إصبع القدم موجود. قم بتدوير قاعدة الشفرات لتشغيل الاهتزاز.

افتح العين لتتآكلها عن طريق فصل الجفون بالأصابع. بعد ذلك ، المس الأزيز بقوة على القرنية ، وحرك الأداة ذهابا وإيابا وجانبا على سطح العين دون رفع النتوء. اهتزاز الأزيز سيؤدي الخدش.

لا تضغط على القرنية أو تهز أو تمزقها. في القرنية المركزية ، تكفي 20 حركة تآكل على السطح للحث على الجرح. يعد إجراء تآكل القرنية أمرا صعبا ويتطلب ممارسة.

تأكد من الانتباه إلى الضغط الصحيح ، وحاول إجراء التآكل في محاولة واحدة فقط. قم بإعطاء قطرة واحدة من محلول فلوريسين للعين المتآكلة من زجاجة القطارة. ثم اغسل العين مرة واحدة باستخدام محلول ملحي بنسبة 0.9٪ لتقليل خلفية Florecine.

امتص السائل الزائد بمنديل ناعم ، ونظف رموش العين إذا لزم الأمر. لتصوير التآكل ، ضع مصباح طاولة مع ضوء قلم أزرق كوبالت مرفق فوق عين الماوس مباشرة. يمكن لصق زر مصباح القلم لأسفل لإبقاء الضوء مضاء عند العمل بمفرده.

ركز كاميرا SLR على العين في ضوء الغرفة ، ثم أطفئ جميع الأضواء الأخرى باستثناء ضوء القلم الأزرق الكوبالت. عندما تضيء بضوء القلم الأزرق الكوبالت ، تتألق المنطقة المتآكلة باللون الأخضر بسبب جزيئات Florecine المحاصرة في السطح غير المستوي. استخدم كاميرا SLR لالتقاط صور للعين.

بعد تصوير العين ، أعد الماوس إلى اللوحة الدافئة. ضع قطرة من مرهم العين Fucidin المضاد للبكتيريا في كل من العيون المتآكلة وغير المتآكلة لترطيب سطح العين والحفاظ عليه نظيفا من البكتيريا بعد التخدير. راقب الماوس على اللوحة الساخنة لمدة خمس إلى 20 دقيقة ، بعد التخدير ، فترة الاستيقاظ.

عندما يصبح متحركا ، ضع الماوس في قفص نظيف. بعد القتل الرحيم للحيوان باستخدام طريقة معتمدة ، اجمع مقلة العين عن طريق قص الجلد وفتحه أولا على جانب العين باستخدام مقص التشريح. ثم ضع المقص تحت مقلة العين ، واقطع العصب العيني لضخ مقلة العين خارج المدار.

ضع العين في طبق يحتوي على PBS. استخدمي إبرة قياس 26 لعمل ثقب في الجزء الخلفي من العين على جانب الشبكية ، للسماح بالتغلغل الحر للمحاليل داخل العين. انقل العين إلى أنبوب ملليلتر يحتوي على PBS.

ثم قم بإزالة PBS ، وأضف أربعة بالمائة بارافورمالدهايد ، وثب العين عند أربع درجات مئوية لمدة أربع إلى خمس ساعات. تظهر هذه الصورة عين الفأر مباشرة بعد التآكل. تشير إشارة Florecine إلى المنطقة المتآكلة باللون الأخضر الفاتح ، حيث تظل جميع المناطق الأخرى في الظهارة مظلمة.

الخط المتقطع يشير إلى حدود الجرح. تظهر الصورة العين الثنائية غير المصابة التي تعمل كعنصر تحكم. البقعة البيضاء هي الانعكاس من الكاميرا.

بعد 18 ساعة من التآكل ، أغلقت ظهارة القرنية إلى حد كبير فوق المنطقة المكشوفة مع بقاء تآكل صغير فقط. بعد 72 ساعة من التآكل ، لا توجد إشارة خضراء مرئية. يشير هذا إلى أن ظهارة القرنية قد أعيد تشكيلها بالكامل بعد 72 ساعة من التآكل.

يتركز التآكل على ظهارة القرنية ، كما هو موضح هنا في العين السليمة ، لذلك ظلت الطبقات العميقة من القرنية سليمة. مباشرة بعد التآكل ، يكشف تلطيخ H و E عن حافة التآكل ، المشار إليها بواسطة هذا النجمة على أنها حافة ضيقة خلوية ، مستمرة من ظهارة القرنية السميكة من أربع إلى خمس طبقات عادية. في 18 ساعة بعد الإصابة ، تكون عملية الشفاء نشطة ، وإعادة الظهارة مستمرة.

يقترح ذلك ظهور حافة أمامية من طبقة إلى طبقتين من الخلايا الظهارية التي تغطي المنطقة المكشوفة. يبدو أن السطح معاد تشكيله بالكامل لمدة 72 ساعة ، حيث تغطي الجبهات المهاجرة الجرح ، وجميع الطبقات الظهارية موجودة مرة أخرى. بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في غضون ساعتين إذا تم إجراؤها بشكل صحيح من قبل باحثين.

أثناء التخطيط لهذا الإجراء وتجربته ، من المهم أن تتذكر اتباع إرشادات رعاية المحلية ، والحفاظ على ممارسة معملية جيدة ومعقمة. باتباع هذا البروتوكول ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل تتبع الكبد للإجابة على أسئلة إضافية حول التئام جروح القرنية ، وإعادة تشكيل الظهارة ، واستعادة توازن الأنسجة في القرنية.