جراحة زرع cochlear وتسجيلات استجابة جذع الدماغ السمعية أثارت كهربائياً في الفئران C57BL/6

نماذج حيوانية لزرع cochlear يمكن النهوض بمعرفة الأسس التكنولوجية لعلاج فقدان السمع الحسي الدائمة مع التحفيز الكهربائي. تقدم هذه الدراسة بروتوكول جراحية يصم الأذان الحادة وزرع cochlear صفيف القطب في الفئران، فضلا عن التقييم الوظيفي مع استجابة جذع الدماغ السمعية.

يمكن أن تقدم النماذج الحيوانية من غرسات القوقعة معرفتنا بالأساس التكنولوجي لعلاج فقدان السمع العصبي الحسي الدائم بالتحفيز الكهربائي. يوضح هذا البروتوكول الصمم الحاد وزرع القوقعة في الماوس. والتقييم الوظيفي لتحفيز زراعة القوقعة مع استجابة جذع الدماغ السمعي.

بعض التحديات الرئيسية لإجراء جراحة زرع قوقعة الأذن في الفئران هي صغر حجم القوقعة ووجود الشريان الصغير الكبير بالقرب من محراب النافذة المستديرة. لقياس حالة السمع العادية ، قم بتحميل الرغوة الصوتية في حقنة ملليلتر وحقن 100 إلى 200 ميكرولتر من الرغوة في قناة الأذن المقابلة من ثمانية إلى اثني عشر أسبوعًا C57 أسود 6 ماوس لعزل استجابة الدماغ السمعي من الأذن الكارينية ، مع الحرص على أن تختم الحقنة بشكل وثيق إلى الأذن لتسليم الرغوة على طول الطريق إلى قناة الأذن. بعد ذلك، ضع مكبر صوت 10 سنتيمترات من الأذن ipsilateral وتنظيف أقطابVR مع 70٪ الإيثانول.

ضع القطب المرجعي تحت الجلد تحت الـ قناء الأذن الإبسيلية والكترود النشط تحت جلد الرأس. وضع القطب الأرض تحت جلد الساق الخلفية. قم بتوصيل الراسبر و preamplifier بالمعالج السمعي عبر منفذ الألياف البصرية.

وتحقق من مقاومة الأقطاب النشطة والمرجعية. عندما تعرض الأقطاب نفس المعاوقة، أغلق كشك عازل للصوت وقدم تحفيز النقر. تسجيل aVR في حالة حقل مجاني مع معالج السمع المعقدة المناسبة والبرامج.

توحيد التحفيز فوق إلى 0.1 ميلي ثانية نقرات أحادية القناة واحد المقدمة في 21 هيرتز مع انخفاض مستوى النقر من 90 ديسيبل من مستوى ضغط الصوت إلى 10 ديسيبل من مستوى ضغط الصوت في 10 خطوات ديسيبل في نافذة تسجيل 10 ميلي ثانية. ثم حدد عتبة aVR كأدنى مستوى ديسيبل مع استجابة موجة aVR يمكن التعرف عليها. للحث على يصم الآذان، وضع الماوس على جانبها الأيمن مع الحرص على الحفاظ على الجسم على التوالي حتى تبقى الشعب الهوائية مفتوحة.

إزالة الفراء وراء الأذن ipsilateral وتطهير الجلد المكشوف مع حل الإيثانول 70٪ متتابعة وPovidone اليود حل الدعك. نقل الحيوان تحت المجهر تشريح واستخدام الهدف 16 مرة ومشرط لجعل واحد إلى واحد ونصف سنتيمتر شق ما بعد الجراحة. تحت التكبير 25 إلى 40x، واستخدام ملقط لتشريح حادة من خلال طبقة الدهون تحت الجلد المكشوفة والتراجع عن العضلات sternocleidomastoid للكشف عن periosteum الثيران timpanic.

يلتف العصب الوجهي حول الحافة الظهرية الخلفية للعضلات الستيروكليومستويد ويمتد على طول قناة الأذن نحو الـ بينا. استخدام العصب الوجه كمعلم لتحديد الثيران السمعية بلطف وضع أداة الداهم الذاتي في شق للوصول إلى الثيران. إزالة الأنسجة الإفراط في منطقة البودودرسال من البولو للسماح التصور واضحة من الحافة بين الثيران وعملية mastoid لطيف تدوير إبرة 30 guage في الثور لتوليد ثقب على الجانب الخلفي متفوقة من الحافة.

قرصة قطع العظام الصغيرة مع ملقط يميل غرامة لتوسيع استئصال ثيران حتى يتعرض تجويف الأذن الوسطى. وتمديد ثقب dorsally نحو عملية mastoid حتى فراغ نافذة مستديرة واضحة من العظام الإفراط. الخطوة الأكثر أهمية هي إعداد مكانة النافذة.

تأكد من أن تأخذ وقتك حتى لا تضر الشريان stapedial. مع الحرص على عدم تلف الشريان stapedial، تمديد استئصال ثيران في الاتجاه الأمامي متفوقة لتصور ستابس، وعظم الأذن الوسطى متصلة نافذة البيضاوي. ثم قم بإزالة stapes لفضح الإطار البيضاوي.

لتطبيق عامل السامة، واستخدام إبرة 30 guage حادة لثقب بلطف أغشية النافذة المستديرة والبيضاوية، مؤكدا أن perilymph تنفد. واستخدام حقنة ملليلتر واحدة مجهزة بإبرة قياس 30 لثقب ببطء 0.2 ملليلتر من وزن 5٪، من قبل حجم النيومايسين حل في برنامج تلفزيوني من خلال النافذة البيضاوية. عندما تم تسليم كامل حجم وكيل بغزارة الحل في نافذة مستديرة مع الحرص على عدم تلف هياكل العظام النافذة.

ووضع قطعة واحدة ملليمتر مربع من spongostan غارقة في النيومايسين داخل نافذة مستديرة ومنافذ النافذة البيضاوية. ثم إزالة الداهم وإغلاق شق، وتسجيل aVR الصوتية بعد يصم الآذان كما هو موضح بعد 30 دقيقة. لإدراج مجموعة قطبة زرع القطب، ضع أداة الداهم مرة أخرى في الشق لإعادة الوصول إلى الثيران وإدراج صفيف القطب في سكاكالا tympani على عمق بحيث يقع الحلقة البلاتينية الرابعة من الصفيف داخل النافذة المستديرة.

يمكن أيضا إدخال الصفيف القطب تكون صعبة. حتى تأخذ وقتك للعثور على زاوية الإدراج جيدة باستخدام أداة واحدة قوة لقيادة الأسلاك وآخر لإدراج مجموعة. لفائف سلك الرصاص داخل الثيران والغاء السلك إلى الأنسجة فوق الثيران.

بعد إزالة بعناية الداود وإغلاق الإدراج مع الغراء الأنسجة، واستخدام مقياس لجعل شق 0.5 ملليمتر في الرقبة، عمودي على الخط الفاصل بين حيث أقطاب نشطة ومرجعية aVR سوف يكون. ضع الكرة الأرضية في الإدراج وتوصيل لوحة صفيف الأقطاب الكهربائية بمنصة محفز الحيوانات. لأداء وavvr الكهربائية، ووضع الأقطاب الكهربائية كما أظهرت سابقا وفتح البرمجيات منصة محفز الحيوان.

ثم حدد نموذج تحفيز النبض الكهربائي وتقديم قطارات النبض الكهربائي تسجيل ردود aVR الكهربائية أثار بشكل مستمر عبر TBT Headstage، preamplifier، والمعالج السمعي. قبل و بعد عتبات السمع الجراحية بمثابة قراءة وظيفية من الإجراء يصم الآذان. تطبيق موضعي من 5٪ نيوميسين إلى النوافذ البيضاوية والجوّل يزيد بشكل كبير من عتبات السمع المُثارة.

التحفيز الكهربائي من القطب intracochlear آخر يصم الآذان يمكن أن تولد بشكل موثوق النشاط aVR الكهربائية. في بعض الحالات، ينشط تحفيز زراعة القوقعة العصب الوجهي وينتج موجة سعة عالية إما باستجابة قصيرة تتميز بتضخيم سريع للموجة الثالثة حول ثلاثة مللي ثانية ومن المرجح أن تكون استجابة مباشرة لعصب الوجه، أو الكمون الطويل الذي يظهر حوالي خمسة إلى ستة مللي ثانية ومن المرجح أن يكون استجابة myogenic غير السمعية ، تحتج بشكل غير مباشر من قبل عصب الوجه. في هذه الدراسة لقد أثبتنا أن نموذج الماوس زرع قوقعة الأذن هو ممكن أيضا زرع القوقعة صغيرة والجراحة:التحدي.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم النظر في بروتوكول يصم الآذان للقضاء على أي استجابات كهربائية في تسجيلات aVR وتقليد تساقط خلايا الشعر الموجودة في معظم مستخدمي C.I.. . وباختصار، فإن العدد المتزايد من النماذج الوراثية للصمم البشري والأدوات الطبية الحيوية المتاحة في الفئران يجعلنا نموذجًا حيوانيًا جذابًا لأبحاث الأدوات بما في ذلك زراعة القوقعة.