Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

Xiujuan Peng; Jasmim Leal; Rashmi Mohanty; Melissa Soto; Debadyuti Ghosh

doi:10.3791/58165

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

PCR الكمي من عاثية T7 من بيوبانينج

Full Text

11,651 Views

05:42 min

September 27, 2018

DOI: 10.3791/58165-v

Xiujuan Peng¹, Jasmim Leal¹, Rashmi Mohanty¹, Melissa Soto¹, Debadyuti Ghosh¹

¹Division of Molecular Pharmaceutics and Drug Delivery, College of Pharmacy,University of Texas at Austin

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ويرد وصف استنساخه، ودقيقة، والوقت كمي PCR (qPCR) طريقة فعالة لتعداد عاثية T7 هنا. البروتوكول يصف بوضوح بالعاثية المجينية الحمض النووي إعداد وإعداد رد فعل بكر وظروف ركوب قبكر وتحليل البيانات قبكر.

ويمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على المشاكل الرئيسية في مجالات علم الفيروسات وعلم الأحياء الدقيقة المتعلقة بتعداد البكتيريا من العينات المعقدة والتشخيص والعلاجات القائمة على البكتيريا. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تمكن من القياس الكمي الفعال والدقيق للوقت لعدد كبير من العينات من تجارب عرض phage biopanning غير مجدية مع المقايسات التقليدية. ومن خلال هذا الإجراء سيكون رشمي موهانتي وجاسم ليال، طالبان في الدراسات العليا من مختبري.

بعد تصميم التمهيديات وخلق تركيز المخزون، والحصول على الحمض النووي T7 phage المرجعية بتركيز 0.1 ميكروغرام لكل ميكرولتر. باستخدام الماء فائق الخطورة ، تمييع هذا الحمض النووي بمقدار عشرة أضعاف ، من مليون رسم femtogram لكل ميكرولتر إلى واحد femtograms لكل ميكرولتر في أنابيب PCR 0.2 ملليلتر. إعداد 20 ميكرولترات من كل تركيز، مع التأكد من تغيير نصائح الماصات ودوامة الأنابيب بين كل مرحلة من مراحل التخفيف.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos