نظام ميكروبيوريكتور لإنتاج IgG1 النموذجي في الخلايا شو الآلي استخدام الفائق

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على بعض الأسئلة الهامة في مجال تصنيع العمليات الحيوية فيما يتعلق بجوانب من توصيف خط الخلية والتوسط وتحسين العملية. مزايا هذه التقنية هي أنه يوفر قدرا أكبر من السيطرة في قارورة هز ويسمح الآلي وأداء أعداد كبيرة من الدراسات على نطاق صغير لتوليد البيانات السريعة. وسوف يكون إثبات الإجراء، ساي راشميكا فيلوغولا و كيسي كونهورست، زملاء باحثين في مختبري.

تبدأ من خلال غمر الأسهم الخسيسة من ثلاث مرات 10 إلى الخلايا المعرض السابع لكل ملليلتر من تجميد المتوسطة في حمام الماء 37 درجة مئوية. عندما يبقى فقط شظية صغيرة من الثلج، pipet بلطف تعليق الخلية المذابة بسرعة عدة مرات ونقل ملليلتر واحد من الخلايا إلى 125 ملليلتر مفكك تنفيس قارورة تحتوي على 29 ملليلتر من متوسطة OptiCHO. ضع القارورة في حاضنة لثقافة الخلية عند 37 درجة مئوية و 8٪ ثاني أكسيد الكربون مع هزها 130 دورة في الدقيقة.

subcturing الخلايا بعد 72 ساعة في 100 ملليلتر من 37 درجة مئوية جديدة المتوسطة في قارورة الدوار 125 ملليلتر لاحتضان آخر 72 ساعة في 37 درجة مئوية و 8٪ CO2 مع اثارة في 70 دورة في الدقيقة. في اليوم الثالث من الثقافة الفرعية، إضافة جديدة قبل الدافئة المتوسطة إلى قارورة الدوار للحفاظ على الخلايا في ما لا يقل عن 90٪ قابلة للحياة لمدة 24 ساعة من الثقافة النهائية. في صباح اليوم التالي، انقر على أيقونة سطح المكتب البعيد وانقر فوق الاتصال.

عند توصيل سطح المكتب البعيد، افتح برنامج عداد الخلية ثم قم بتثبيت Pak جديد. ثم، إفراغ النفايات Trypan الأزرق ورئيس النظام. بعد ذلك ، تقليل الاتصال عن بعد وفتح برنامج المفاعل الحيوي الصغير باستخدام تجربة موجودة كقالب لإنشاء تجربة جديدة.

قبل البدء في تشغيل، وتحديد لوحات المستخدمة أثناء تشغيل في قسم تقليد البرنامج ووضع 12 وعاء الثقافة العقيمة في كل محطة الثقافة. ضع لوحات المشبك التلقائي فوق الأوعية ووضع لوحات التحريك فوق لوحات المشبك مع التأكد من إدراج كل دبوس بشكل آمن. ثم، تأمين لوحات المشبك مع مسامير ونوبات المقدمة.

لبدء النظام مسح الباركود المقدمة مع كل سفينة الثقافة. سيقوم النظام تهيئة والتحقق من وجود السفن المناسبة. تعيين التحكم في درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية واثارة إلى 1،000 دورة في الدقيقة وتشغيل جهاز الهيدروجين الأوكسجين المذاب.

بعد ذلك، قم بتنفيذ برنامج الشحن المتوسط. عندما تم تحميل كل من المتوسطة، 35 microliters من EX-CELL Antifoam سيتم إضافة من لوحة Antifoam إلى أوعية الثقافة. بعد 30 دقيقة تبدأ تسجيل الأوكسجين المذاب و PH داخل وسائل الإعلام الثقافة، والسماح للأكسجين المذاب للوصول إلى نقطة من 50٪ بعد توازن الأكسجين المذاب، بدوره على الإضافات قاعدة الخلفية لتحقيق نقطة PH من 7.1 لجميع الأوعية الثقافة.

في صباح اليوم التالي، تنفيذ خطوة PH متوقفة ونقل محتويات كامل من قارورة الدوار إلى أنبوب مخروطي مخروطي 250 ملليلتر عقيمة للطرد المركزي. Resuspend بيليه في وسط جديد بما فيه الكفاية أن الكثافة النهائية ستكون مرة واحدة 10 مرات لخلايا CHO السادسة لكل ملليلتر بعد إضافة inoculum إلى الأوعية الثقافية وإضافة الخلايا المعلقة في الآبار المناسبة من صفيحة 24 معقم. إضافة ثلاثة ملليلترات من inoculum إلى كل بئر ووضع لوحة inoculum على مكتب معين داخل غطاء محرك السيارة.

ثم، السماح للسفن الثقافة توازن لمدة ساعة على الأقل وبدء الخطوة عدد EX-CELL خمسة في البرنامج. للمغذيات اليومية وتحليل المستقلب في اليوم الثاني مكان لوحة حامل أنبوب عينة على الطوابق المعينة وتحميل أنابيب microcentuge مفتوحة في أصحاب المناسبة. ثم ضع العينات في علبة المحلل، لإجراء تحليل المغذيات.

لإنهاء تشغيل أولا إيقاف التحكم في درجة الحرارة تليها الانفعالات. إيقاف الأكسجين المذاب PH التحكم و الإضافات الأساسية الخلفية، كل من عناصر التحكم الأخرى، و مراقبة النظام. فك المشبك ولوحات تحريك، وإزالة الأوعية الثقافية، وبرغي لوحات التجفيف في محطة الثقافة.

ثم، تنفيذ دورة التجفيف لمدة ساعتين على البرنامج؛ النقر على وقف في برنامج مفاعل حيوي بمجرد الانتهاء من دورة التجفيف. لحصاد الخلايا نقل السائل ثقافة الخلية من أوعية المفاعل إلى أنابيب مخروطية المقابلة للطرد المركزي وتصفية المنابات الفوقية من خلال 0.22 ميكرومتر PVDH مرشحات. ثم, نقل ملليلتر واحد من كل خلية عقيمة ثقافة مغرور في الفردية 1.5 ملليلتر microcentrifuge أنابيب للتخزين السلبي 20 درجة مئوية حتى تحليل تيتر.

لقياس IgG titers من العينات، أولا بدوره على نظام الحساسية الحيوية المعونة البروتين. بعد أن دفأ المصباح لمدة ساعة واحدة على الأقل، تسمح للعينات بالتكرار إلى درجة حرارة الغرفة و presoak واحد من البروتين المعونة تلميح لكل عينة في خلية جديدة المتوسطة لمدة 30 دقيقة على الأقل. ثم، تعيين درجة حرارة لوحة إلى 26 درجة مئوية.

تحميل العينات في النظام، وتشغيل المقايسة باستخدام الحساسية العالية الافتراضية المقايسة مع تجديد في برنامج الحصول على البيانات. باستخدام عداد الخلية المتكاملة، يمكن الحصول على كثافة الخلايا القابلة للحياة في المتوسط و viabilities يوميا لجميع ظروف الثقافة. باستخدام محلل المغذيات يمكننا أيضا الحصول على المغذيات وملامح المنتجات الثانوية مما يدل على جدوى رصد هذه السمات في نظام مفاعل ميكروبيو.

وعلاوة على ذلك، يمكن كمي الإنتاجية الإجمالية لثقافات الخلايا في ظل ظروف الثقافة المختلفة من الفائدة باستخدام نظام استشعار حيوي المعونة البروتين كما هو موضح. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن البروتوكول يعمل فقط إذا تم البرمجة بشكل صحيح؛ضمان تنفيذ في الوقت المناسب من خطوات البروتوكول مع أخطاء أدنى. بعد هذا الإجراء يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل: الكروماتوغرافيا السائلة، وقياس الطيف الكتلي، وتشتت الضوء متعدد الزوايا للإجابة على أسئلة إضافية تتعلق بالخصائص الفيزيائية والكيميائية للمنتج المصنع.