أنسنة إيماءة/نظام/IL2rγ^فارغة الماوس (هو جين تاو-مجموعة موردي المواد النووية) نموذج للنسخ المتماثل من فيروس نقص المناعة البشرية والدراسات الكمون

ويمكن لهذه المسائل أن تساعد في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في البحوث المتعلقة بفيروس نقص المناعة البشرية/الإيدز، مثل الآلية الجزيئية والتوقعات المتعلقة بعدوى فيروس نقص المناعة البشرية، وكيف وأين يتم إنشاء خزان الكمون. وميزة هذه التقنية هي أنها غير غازية، وأنشأت فئران هو-إنسغ التي يجب أن تعالج تطور متعدد النسب على الخلايا الجذعية البشرية المزروعة المعرضة للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية وتقبلاً للمعالجة القلبية المعالجة بطب الارت. تبدأ عن طريق تصفية هضم, الإنسان, الجنين, أنسجة الكبد, عينة الطين من خلال معقم, 70 ميكرومتر, نايلون, شبكة مصفاة للحصول على تعليق خلية واحدة, وإثراء لD34 + HSCs عن طريق الخلايا المغناطيسية تنشيط الفرز وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

بعد العد، إعادة تعليق HSC في مرتين عشر إلى السابع خلايا قابلة للحياة لكل ملليلتر تركيز في DPBS جديدة على الجليد. في المكان التالي كامل الإنسان حديثي الولادة NOD / SCID / غاما أو NSG القمامة الماوس في العقيمة ، على شكل فطيرة ، وتشعيع قفص ، وعلاج الحيوانات مع 200 إلى 250 درجة مئوية من أشعة غاما من مصدر الإشعاع cesium - 137. ثم تحميل الخلايا في صنع مخصص، هاملتون 80508 50 ميكرولتر حقنة مجهزة بإبرة 30 قياس، وحقن كل حديثي الولادة مباشرة في الكبد مع خمس مرات عشر إلى الخامس الإنسان قابلة للحياة CD34 + HSCs و 25 ميكرولترات من DPBS.

عشرة إلى اثني عشر أسبوعا بعد العدوى، تدور أسفل الرجعية المدارية، الطرفية، عينات الدم من كل فأرة عن طريق الطرد المركزي، ونقل عظمى البلازما إلى أنابيب microcentrifuge لتخزين سلبية 80 درجة مئوية كما هو مناسب تجريبيا. للتحقق من صحة engraftment HSC، إعادة تعليق الكريات مع 200 ميكرولترات من خلايا الدم الحمراء العازلة، وسحب تعليق الخلية في أنبوب microcentuge 1.5 ملليمتر لاحتضان لمدة عشر دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم جمع ما تبقى من خلايا الدم البيضاء عن طريق الطرد المركزي لاثنين من يغسل في 0.5 ملليلتر من الطازجة، 0.01 في المئة الألبومين مصل البقر، أو BSA، في DPBS لكل غسل.

بعد الغسيل الثاني، كتلة الخلايا مع 100 ميكرولترات من حظر كوكتيل لمدة عشرين دقيقة في 4 درجات مئوية تليها وضع العلامات مع كوكتيل المضادة للجسم المناسبة من الاهتمام في 2 ميكرولترات من المضادة للجسم لكل مرة واحدة إلى التركيز الخلايا السادسة. بعد 30 دقيقة في 4 درجات مئوية، وغسل الخلايا مرتين في DPBS جديدة بالإضافة إلى BSA، وتقييم عينات الدم المحيطية عن طريق تدفق الخلايا وفقا للبروتوكولات القياسية لتحديد النسبة المئوية للإنسان CD45 + CD3 + CD14 + أو CD19 + الخلايا لكل عينة. ثم حساب نسبة CD4 + إلى CD8 + T الخلايا ، وتقييم الحمل الفيروسي مع في عينات البلازما وفقا لمعايير ، وكمية ، وعكس transcriptase ، وبروتوكولات PCR.

لتقييم آثار الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، وتقديم فيروس نقص المناعة البشرية بالة للفيروس إلى تخدير، وفئران NSG مع أكبر من 20 في المئة البشرية CD45 + خلية السكان في الدم المحيطي، في 200 نانوغرام من التركيز P24 لكل فأرة عن طريق الإدارة intraperitoneal، وجمع عينات الدم عن طريق النزيف الرجعية المدارية كل أسبوعين، وتحليل كل من CD4 إلى CD8 نسبة وحمالة البلازما الفيروسية ، كما هو موضح. للتحقق من صحة قمع الفيروسية تزويد المصابين, الحيوانات NSG الإنسان مع الطازجة, الجمع بينات, المضادة للفيروسات الرجعية العلاج, أو cART, في الماء المحلاة كل أسبوع لمدة 4 أسابيع, جمع عينات الدم عن طريق النزيف الرجعية المدارية كل أسبوعين وتحليل كل من نسبة CD4 إلى CD8 والحمل الفيروسي البلازما كما هو موضح. لحابس انتعاش الفيروسية عندما الأحمال الفيروسية البلازما هي أقل من حد الكشف ويتم استعادة نسبة CD4-إلى-CD8 بين 1.5 و 2.5 جمع عينات الدم الطرفية من خلال نزيف الرجعية المدارية كل 2 أسابيع بعد انسحاب CART وتقييم العينات كما هو موضح.

أثناء التحقق من صحة engraftment الأولي، يجب أن يتراوح عدد الخلايا CD45 البشرية من 20 إلى 80 في المائة، ويجب أن تظهر المجموعات الفرعية من الكريات البيض البشرية كسكان منفصلة عن طريق تحليل تدفق الخلايا. تبقى نسبة CD4 + إلى CD8 + الخلايا بين 1.5 و 2.5 في الأفراد الأصحاء في حين لوحظ استنفاد خلايا CD4 + T بشكل كبير عند العدوى الفيروسية. وتجدر الإشارة إلى أن نسبة صحية يتم استعادة استجابة لعلاج CART.

ويمكن رسم الكشف عن الأحمال الفيروسية البلازما بواسطة كمية RT PCR طوال مسار العدوى ونظام CART واستخدامها لتقييم كفاءة التسليم الفيروسي والعلاج المضاد للفيروسات، على التوالي. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في دراسات الفيروسات فيروس نقص المناعة البشرية / الإيدز والتنمية العلاجية، ويمكن أيضا أن تطبق على دراسات أخرى تتعلق بأمراض الإنسان، مثل السرطان والسكري وأمراض المناعة الذاتية. مهد تطوير نموذج الماوس هوو-NSG الطريق للباحثين في علم المناعة والأورام لاستكشاف خلل وظيفي جديد وعلم الأمراض في البشر، وخاصة الدراسات الميكانيكية والعلاجية التي تستهدف العدوى المزمنة بفيروس نقص المناعة البشرية وخزان الكمون.