بالقطع وأسلوب عائم للأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين لتقطيع

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في المجال المورفولوجي ، مثل تقسيم البارافين. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تتوج بالقطع وإجراء الطي وتجنب عملية النقل التي تتطلبها الطريقة التقليدية. للبدء ، اجمع كل الأجزاء المصنعة مسبقا في غطاء الدخان.

استخدم الكلوروفورم لدمج ألواح الأكريليك السبعة ، كما هو موضح هنا. سيكون المنتج النهائي عبارة عن خزان مجهز بقناة قسم وحمام مائي. قم بتثبيت عنصر التسخين الكهربائي الأنبوبي من خلال الفتحة الموجودة في لوح الأكريليك رقم اثنين.

باستخدام المثقاب الكهربائي ، قم بعمل ثقب صغير في لوح الأكريليك رقم سبعة ، وقم بتثبيت ترموستات رقمي على الخزان ، مع التأكد من أنه أقل من سنتيمتر واحد على الأقل من مستوى سطح الماء المقصود ، والذي يشار إليه بالنقطة السوداء على الخزان. اضبط الجهد بحيث يكون أقل من 24 فولت قبل تشغيل الجهاز. قم بإزالة صينية نفايات القسم من الميكروتوم.

بعد ذلك ، استخدم مادة مانعة للتسرب من السيليكون المحايد لربط قناة الأقسام بحامل الشفرة الدقيقة ، مع التأكد من عدم وضع أي مادة مانعة للتسرب فوق الجزء العلوي من الشفرة. اترك الإعداد يجف طوال الليل لمنح الكلوروفورم ومانع التسرب السيليكوني المحايد وقتا للتصلب. في اليوم التالي ، قم بتثبيت الشفرة في حامل الشفرة.

أضف الماء إلى الحمام المائي ، وتأكد من أن سطح الماء يلامس الجزء العلوي من الشفرة. بعد إجراء تقسيم البارافين التقليدي ، قم بتشغيل الجهاز لبدء تقسيم البارافين المحسن. استخدم مفتاح الكشف عن درجة الحرارة لفتح المدفأة.

اضبط درجة الحرارة المستهدفة بين 38 درجة مئوية و 40 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لتسخين الماء. استخدم سكينا لتعديل كتلة البارافين المكتسبة عن طريق تضمين البارافين. ثم ضع الكتلة على مشبك الكاسيت الميكروتوم ، وأغلقها.

قص الأقسام السميكة للاقتراب بسرعة من العينة. اضبط على سمك القسم المناسب للعينات. سيؤدي تدوير عجلة اليد إلى تحميل الأقسام تلقائيا إلى أقسام وقناة وحمام.

بعد ذلك ، قم بتقسيم العينة بضربة قطع بطيئة وموحدة. قم بتوجيه الأقسام إلى حجرة الحمام بحيث تطفو في خط. إذا كان قسم الرأس ملتصقا بجدار الغرفة ، فاستخدم دليل الفرشاة لإبقائه عائما.

بعد أن تتكشف الأقسام بالكامل في الحمام المائي ، استخدم الملقط لفصل العديد منها ، ثم التقطها على شريحة مجهرية. انقل الشرائح إلى فرن على حرارة 42 درجة مئوية حتى تجف طوال الليل. يمكن بعد ذلك تخزين الشرائح في درجة حرارة الغرفة إلى أجل غير مسمى حتى تصبح جاهزة للتحليل.

عندما تكون جاهزا للتحليل ، استخدم تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين لتقييم الأقسام باستخدام الطريقة المحسنة. في هذه الدراسة ، يتم استخدام طريقة محسنة لإعداد أقسام البارافين لأنسجة الحصين للفئران البالغة ، وكلى الفئران البالغة ، وأدمغة الفئران الجنينية ، وعيون الزرد. كما هو موضح هنا ، فإن الطريقة الجديدة تتجنب فقدان القسم وتزيد من نسبة الأقسام السليمة في كل نوع من أنواع الأنسجة التي تم فحصها.

عند إجراء تقسيم سلسلة كاملة ، ينظر إلى هذه الطريقة لتسريع سرعة تقسيم البارافين في جميع العينات المختبرة. بمعنى آخر ، توفر هذه الطريقة تقسيم البارافين عالي الجودة في وقت أقل من الطريقة التقليدية. ثم يتم ملاحظة الأقسام المتسلسلة من شبكية العين البصرية لسمك الزرد عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين - اليوزين.

ينظر إلى الأقسام التي تم حصادها من الطريقة المحسنة على أنها تتمتع بسلامة أفضل من تلك التي يتم حصادها من طريقة تقسيم البارافين التقليدية. في حين أنه لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية في جودة معظم الأقسام التي يتم حصادها عند مقارنة هاتين الطريقتين ، إلا أن بعض الأقسام التي يتم حصادها من الطريقة التقليدية ينظر إليها على أنها ذات جودة منخفضة نسبيا. لا تنس أن العمل مع الكلوروفورم يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل غطاء الدخان أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إضافة الماء بعناية وتجنب الإفراط في الملأ.