تصنيع متباين مستضد الاصطناعية البوليمر عرض خلايا CD8 + تي خلية التنشيط

يمكن أن يساعد هذا الأسلوب في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الهندسة الأمينية. مثل, ما هو دور الخواص الفيزيائية الجسيمات على التفاعلات الخلايا المناعية الحيوية الحيوية وتنشيط. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تمكن من التحكم المستقل في حجم وشكل الجسيمات الحيوية.

الآثار المترتبة على هذه التقنية تمتد نحو علاج السرطان كما هو خارج العلاج الجسيمات الجرف التي يمكن أن تسبب في استجابات المناعة الخلايا الحية بوساطة. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في علاج السرطان الأمينية، ويمكن أيضا أن تطبق على أنظمة أخرى. مثل الأمراض المعدية أو مرض السكري من النوع الأول.

لتخليق الجسيمات الدقيقة، تبدأ من خلال وزنها من أصل 100 ملليغرام من بولي (اللاكتيك شارك الجليكوليك حمض) أو PLGA، في قارورة التلألؤ وحل PLGA في خمسة ملليلتر من ديكلوروميثان عن طريق دوامة. وضع التجانس في الكلاك التي تحتوي على 50 ملليلتر من 1٪ من البولي فينيل الكحول، أو حل PVA، بحيث التجانس هو أقرب إلى الجزء السفلي من الكوابر ممكن دون لمسه. بدوره على التجانس إلى السرعة المناسبة وإضافة حل PLGA إلى beaker لمدة دقيقة واحدة من التجانس.

في نهاية التجانس، صب حل الجسيمات الدقيقة PLGA الكحول بوليفينيل في الكوابر التي تحتوي على 100 ملليلتر من 5٪ محلول PVA على لوحة ضجة في غطاء محرك السيارة الكيميائية وتحريك الحل لمدة أربع ساعات على الأقل. عندما يتبخر المذيب، صب حل الجسيمات في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر وجمع الجسيمات عن طريق الطرد المركزي. استبدل المابير في كل أنبوب بـ 20 ملليلتر من الماء المُتأين ثم أعد تعليق الجسيمات عن طريق الدوامة.

ثم جلب حجم النهائي في كل أنبوب تصل إلى 50 ملليلتر مع المياه الطازجة دي المتأينة وغسل الجسيمات مرتين أكثر كما هو موضح للتو. لتخليق الجسيمات النانوية، قم بحل 200 ملليغرام من PLGA في خمسة ملليلتر من ديكلوروميثان ووضع مسبار صوتاتور في منبر يحتوي على 50 ملليلتر من محلول PVA 1٪ على الجليد دون لمس الجزء السفلي من القارص. تبدأ سونيكيشن في 12 واط وعلى الفور إضافة حل PLGA إلى beaker لمدة دقيقتين سونيكيشن لتوليد جزيئات نانو مع قطر 200 نانومتر تقريبا.

بعد سونيكيشن، صب 1٪ بوليفينيل الكحول PLGA حل الجسيمات النانوية في beaker تحتوي على 100 ملليلتر من 5 محلول PVA على لوحة ضجة لمدة أربع ساعات من التبخر المذيب في غطاء الدخان الكيميائية. عندما يتبخر كل من المذيبات، صب حل الجسيمات في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر للطرد المركزي لإزالة أي جزيئات صغيرة وإزالة المواد الفوقية. ثم نقل جزيئات النانو إلى أنابيب أجهزة الطرد المركزي عالية السرعة لثلاثة يغسل في المياه دي المؤين كما هو موضح.

لتصنيع الجسيمات البوليمرية، بعد الغسيل الأخير، إعادة تعليق الجسيمات في ما يقرب من ملليلتر من المياه الطازجة دي المتأينة وإضافة حل صب الفيلم إلى الجسيمات إلى تركيز نهائي من 2.5 ملليغرام لكل ملليلتر الجسيمات. نقل تعليق الجسيمات في 10 ملليلتر aliquots في 75 من 50 ملليمتر مستطيلة أطباق بيتري لتمتد واحدة الأبعاد. أو في 15 ملليلتر aliquots في 100 من قبل 100 ملليمتر أطباق بيتري مربع لتمتد ثنائية الأبعاد.

بعد التجفيف بين عشية وضحاها في غطاء محرك السيارة الكيميائية، واستخدام ملاقط لإزالة الأفلام وتقليم حواف مع مقص. لتمتد 1D، ضع حواف قصيرة اثنين من فيلم واحد بين قطعتين من المطاط النيوبرين لتركيب على كتل الألومنيوم من محور واحد من جهاز تمديد فيلم رقيقة الآلي. ثم استخدام وجع ألن المسمار قبضة معدنية على رأس المطاط لعقد الفيلم في مكان.

لتمتد 2D، جبل جميع حواف أربعة على أربع كتل الألومنيوم لتمتد الفيلم على كلا محاور قياس وتسجيل طول الفيلم في ما بين كتل الألومنيوم على محور واحد لD واحد تمتد أو كلا المحورين لتمتد 2D وحساب المسافة المطلوبة لتمتد الفيلم في اتجاه واحد أو اثنين على أساس امتداد أضعاف المطلوب. ثم ضع الفيلم تحميل جهاز التمدد في فرن في 90 درجة مئوية بجانب أكبر من كمية كبيرة من الماء لجلب الفيلم إلى درجة الحرارة أكثر من 10 دقيقة. عندما يكتمل التمدد، دع الفيلم يبرد لدرجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.

لتمدد 1D، قطع الفيلم من جهاز تمتد على حواف. ل2D تمتد، وقطع وحفظ مربع مركز الفيلم الذي يتم امتدت بشكل موحد على كلا المحورين. ضع الأفلام في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر مع ما لا يزيد عن فيلمين لكل أنبوب وإضافة ما يقرب من 25 ملليلتر من المياه المنزوعة المؤينة إلى كل أنبوب للدوامة.

عندما تكون الأفلام قد حلت، وغسل الجسيمات ثلاث مرات في المياه دي المتأين كما هو موضح. إعادة تعليق الجسيمات في ما يقرب من ملليلتر من المياه الطازجة دي المتأينة لكل أنبوب بعد الغسيل الماضي. ثم تجميد الجسيمات في ناقص 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة أو بين عشية وضحاها التجميل.

في صباح اليوم التالي، إعادة تعليق الجسيمات الصغيرة أو النانوية الlyophilized في 20 ملليغرام لكل ملليلتر في عازلة ميس الطازجة المعدة مع دوامة. إضافة 100 ميكرولترات من حل الجسيمات إلى أنبوب الطرد المركزي الجزئي البولي بروبلين التي تحتوي على 900 ميكرولترات من المخزن المؤقت ميس وإضافة 100 ميكرولترات من حل NHS EDC الطازجة. اخلط الجسيمات عن طريق الدوامة واحتضان الجسيمات على العاكس في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.

في نهاية الحضانة، وجمع الجسيمات عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق كريات الجسيمات الدقيقة في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني عن طريق دوامة أو إعادة تعليق الجسيمات النانوية في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني من قبل خمس ثوان من سونيكيشن في اثنين إلى ثلاثة واط. بعد ذلك، إضافة ثمانية ميكروغرام من إشارة مناسبة بروتين واحد و 10 ميكروغرام من الأجسام المضادة للماوس CD28 إلى الجسيمات الدقيقة، أو 16 ميكروغرام من إشارة بروتين واحد و 20 ميكروغرام من المضادة للماوس CD28 إلى الجسيمات النانوية. جلب حجم النهائي في كل أنبوب إلى 1.1 ملليلتر مع برنامج تلفزيوني واحتضان الجسيمات بين عشية وضحاها على العاكس في أربع درجات مئوية.

في اليوم التالي، غسل الجسيمات ثلاث مرات في المياه دي المتأين كما هو موضح. تم تصنيع هذه الجزيئات النانوية والصغرى PLGA باستخدام تقنيات مستحلب واحدة كما هو موضح وصور باستخدام المجهر الإلكتروني انتقال ومسح. وبعد التجانس، أظهرت الجسيمات الدقيقة قطرها المتوسط البالغ حوالي ثلاثة ميكرومترات.

وكان للجسيمات الدقيقة الكروية حصة جانبية تبلغ حوالي واحد، في حين أن الجسيمات الإهليلية الزهجية الممتدة من الـ 1D كانت لها نسبة أكبر من الارتفاع تبلغ حوالي ثلاثة ونصف، وكانت الجسيمات الإهليلية المتمددة 2D ذات نسبة إلى الارتفاع تبلغ حوالي 1.2، مما يحافظ على نسبة إلى الارتفاع تبلغ 1. تكشف نتائج كفاءة الاقتران عن كميات مماثلة من البروتين على سطح الخلايا الاصطناعية الدقيقة المجهرية الكروية والإهليلجية التي تقدم، أو AAPC و NANO-AAPC، مما يدل على أن اقتران البروتين أثناء تخليق AAPC يحدث بطريقة تعتمد على التركيز. تم العثور على prolate اهبسويديال AAPC للحث على مستويات أعلى من انتشار الخلايا T في جرعات دون تشبع من AAPC كروية مع أفضل فصل يتحقق في جرعة 01 مليغرام.

بعد سبعة أيام، كشف العد اليدوي للخلايا التائية أن البرلات الإهليلجي AAPC تحفز الخلايا التائية بشكل أكثر فعالية مقارنة بنظرائها الكروية في النطاق الصغير والنانو بطريقة تعتمد على الجرعة. بعد هذا الإجراء، يمكن أن يكون مدير AAPC في الجسم الحي لقياس فعاليتها العلاجية و الدوائية. بعد تطورها ، ساعدت هذه التقنية في تمهيد الطريق للباحثين في مجال الهندسة المناعية لاستكشاف تأثير النظائر على فعالية AAPC.