تسجيل الكهربية لنشاط الجهاز العصبي المركزي للطور الثالث Melanogaster المورفولوجية

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالات علم السموم الحشرية وعلم وظائف الأعضاء الحشرية من خلال قياس التشكل الكهربائي للجهاز العصبي المركزي Drosophila melanogaster. وهذا يسمح للمرء باختبار مجموعة واسعة من الفرضيات العلمية والمساعدة في اكتشاف أساليب جديدة للعمل في مجال المبيدات الحشرية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توفر نظام بسيط، قابل للتكرار، وعالية الإنتاجية نسبيا مع الحد الأدنى من المدخلات المالية لدراسة الجهاز العصبي من Drosophila.

للبدء، افتح برنامج الاكتساب/التحليل. انقر فوق الإعداد في شريط الأدوات الرئيسي، وحدد إعدادات القناة، التي ستفتح مربع حوار. تقليل عدد القنوات الإجمالية إلى ثلاثة.

القناة الأولى ستسجل الإشارة الخام من مكبر الصوت مع مجموعة من 100 ملليفولت. سيتم استخدام القناة الثانية لحساب عدد الأحداث من القناة الأولى التي تتجاوز عتبة معينة. لهذا، انقر فوق علامة التبويب الحساب لفتح قائمة منسدلة للقناة الثانية.

حدد قياسات دورية، والتي ستفتح مربع حوار ثاني. حدد القناة الأولى كمصدر. ثم، في قياس القائمة المنسدلة، حدد "سبايك الوحدة" في الأحداث.

وأخيراً، في منطقة إعدادات الكشف، من القائمة المنسدلة، حدد عتبة بسيطة. مستوى العتبة هو الإدخال في نافذة ضبط الكشف ليتم تعيينها فوق ضجيج الخلفية. لتحويل النشاط الكهربائي إلى رسم معدل مُعبر عنه في هرتز، حدد حسابي على القناة الثالثة.

على الإطار الجديد، إدخال 1000 مرة smoothsec، أقواس قناة اثنين الفاصلة الثانية. ثم، حدد في القائمة المنسدلة وحدات وحدة التردد هرتز. أغلق مربعات الحوار للعودة إلى الشاشة الرئيسية.

يجب التعبير عن المحور ص من القناة الثالثة في هرتز والمحور س في الوقت المناسب. تشريح اليرقات Drosophila CNS عن طريق تحديد واستخراج تجول في الثالث في Drosophila melanogaster من قارورة الثقافة ووضعها في 200 ميكرولترات من المالحة. ثم، فهم الفم السنانير مع زوج من ملقط غرامة، والاستيلاء على البطن من اليرقات مع زوج الثاني من ملقط، مع ضغط خفيف، لتجنب تمزيق طبقة جميلة رقيقة.

سحب بلطف الفم السنانير والبطن في اتجاهات مختلفة لفصل نهاية السد من اليرقات من منطقة الرأس وفضح الأحشاء من اليرقات. سيتشابك الجهاز العصبي المركزي مع القصبة الهوائية والجهاز الهضمي. ندف الجهاز العصبي المركزي من الجهاز الهضمي والقصبة الهوائية مع ملقط.

تشريح الجهاز العصبي المركزي Drosophila من اليرقات هو خطوة حاسمة للنجاح. يجب أن تكون العصابات تشريح سليمة، دون أي ضرر كبير لأعصاب السيارات التنازلية. زيادة عدد أكبر من الأعصاب الحركية تعلق على ganglia ترددات اطلاق خط الأساس.

إذا لزم الأمر، تعطيل حاجز الدم في الدماغ عن طريق تحويل يدويا الجهاز العصبي المركزي الخلفي إلى الفصوص الدماغية مع مقص الربيع فاناس. وينبغي أن يتم النقل على أساس الخصائص الفيزيائية الكيميائية للمواد الكيميائية المستخدمة. الخط الأحمر هو نقطة النقل المقترحة وNS مقطّع مع جذوع العصب المحيطي التنازلي سليمة هو مبين هنا.

للبدء ، أولا سحب قطب الماصات الزجاجية من الشعيرات الدموية الزجاجية borosilicate إلى مقاومة من خمسة إلى 15 megaohms. أدخل الجهاز المركزي العصبي المركزي المُحولي في حجرة شمعية تحتوي على 200 ميكرولترات من الملح الملحي. المشبك دبوس حشرة غير المصقول مع مقطع التمساح مُلهم إلى السلك الأرضي، وإدراج دبوس في المالحة لإكمال الدائرة.

باستخدام ميكرومانيبولاتورس، توجيه القطب إلى نهاية السد من الجهاز العصبي المركزي المُحولية. القضاء على الضوضاء الخلفية عن طريق ضبط مستوى العتبة في اقتناء / تحليل البرمجيات قبل توصيل جذوع الأعصاب الطرفية. تطبيق ضغط سلبي طفيف على حقنة لرسم الأعصاب الطرفية في القطب شفط.

بدء التسجيل على برنامج الحصول على البيانات، ومعدل إطلاق خط الأساس لتكبيل لمدة خمس دقائق قبل جمع بيانات معدل إطلاق خط الأساس. بعد خمس دقائق، إضافة 200 ميكرولترات من المالحة والمركبات لتحقيق الحجم الإجمالي للغرفة إلى 400 ميكرولترات لبدء تسجيل معدلات إطلاق النار السيطرة. تجاهل الإعداد والتسجيل إذا كان نمط إطلاق العلاج بالتحكم لا يشبه المثال الموضح هنا.

عندما تم تحديد خط الأساس بعد ثلاث إلى خمس دقائق من التسجيل، سحب 200 ميكرولترات من المالحة وإضافة 200 ميكرولترات من العامل التجريبي solubilized في المالحة. تسمية هذه النقطة الزمنية من تطبيق المخدرات في اقتناء / تحليل البرمجيات بما في ذلك التعليق الذي يتضمن المخدرات والتركيز النهائي. يظهر هنا هو تتبع إفرازات عصبية تمثيلية قبل وبعد التعرض لـ DMSO.

يشير السهم إلى وقت التطبيق. ويُرى وجود استجابة محدودة لمعالجة هذا الأمر. جرعات متزايدة من propoxur تضخيم ارتفاع وتيرة التفريغ من DRosophila الجهاز العصبي المركزي عبر مُنَزَعِبِجِيَة بطريقة تعتمد على التركيز، في حين أن GABA العصبية خفضت تردد التفريغ الارتفاعات بطريقة تعتمد على التركيز.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر أنه تجربة vivo السابقين ، وبالتالي فإن ظروف المالحة ، مثل درجة الحرارة ودرجة الحرارة ، أمر بالغ الأهمية للنشاط المطول لإعداد الجهاز العصبي المركزي. وبالمثل، فإن عدم وجود نشاط كهربائي خارجي، وكقف فاراداي فعال، وتخفيض ضوضاء 60 هرتز أمر بالغ الأهمية لنجاح هذه الأقوال. ويمكن للبيانات التي يتم جمعها من خلال هذا الفحص أن تساعد في تحديد طريقة عمل مبيدات الحشرات.

ويمكن إجراء التحقق اللاحق من هذه البيانات من خلال أساليب أخرى مثل الفيزيولوجيا الكهربائية الجهد- المشبك، والتحليلات الكيميائية الحيوية، والتحاليل الدوائية إضافية.