استزراع الفردية الكانفاس تيجريوبوس والتحليل الكمي لسلوكهم حراسة ماتي

الميزة الرئيسية لهذه التقنية زراعة هو أنه يمكنك الحصول على كوببودس العذراء مع السيطرة على تجربتهم الاقتران وتتبع تطورها. يمكن أن تساعد طريقة تحليل السلوك التالية في التحكم في التجارب القابلة للتكرار على سلوك حراسة التابلوس الذي يشكل العوالق الحيوانية الشائعة في برك المد الصخرية. على الرغم من أن هذه الطرق يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في السلوك الإنجابي لتايغرابوس، فإنها يمكن أيضا أن تستخدم للنظر في كيفية العوامل الوراثية والبيئية تؤثر على علم وظائف الأعضاء والسلوك من هذه copepods.

للبدء، استخدم ماصة باستور لجمع الإناث جرافيد تحمل بيض البرتقال واضحة من ثقافة الأسهم. شطف الإناث مع ثقافة نظيفة المتوسطة عن طريق الأنابيب لطيف. بعد ذلك، ضع كل أنثى في بئر فردي من لوحة ثقافة الخلايا الستة بشكل جيد مع وسط ثقافة نظيفة.

ثم ضع الطبق في حاضنة لثقافة الإناث حتى يطلقن حويوض البيض. بعد أن يتم الإفراج عن الألواح البيض، واستخدام ماصة باستور لإزالة الإناث من آبار لوحة. بمجرد أن تبدأ الحيوانات في المرحلة الأولى من الكومبودي أو CI في الظهور ، استخدم p-10 micropipette لجمعها.

كل يومين إلى ثلاثة أيام، راقب الآبار لـ(exuviae) المنصهر. بعد هذا، الجنس الحيوانات من خلال فحص مورفولوجيا الهوائي بهم. وللتعرف على الإناث البالغات بشكل صحيح، تأكد من أنهن قد قذفن بالفعل خمسة اكزوفيا في آبار ثقافية لأن الاختلافات في شكل الهوائيات بين الإناث البالغات والأحداث ليست كبيرة بشكل واضح في بعض السكان.

بعد اختيار الحيوانات من المرحلة المناسبة والجنس، وإطعام الأفراد المختارين مع الغذاء الأسماك الأرض ناعما. في حين أن الحيوانات تأكل ، وإعداد اثنين من 48 شقة جيدا أسفل الخلية ثقافة لوحات كغرف الاختبار. بعد مرور 30 دقيقة، شطف كل عن طريق الأنابيب في سلسلة من أربعة آبار من لوحة 24 جيدا مليئة مياه البحر الاصطناعية النظيفة.

ثم ضع الأفراد المشطفين في آبار الألواح A و B على وسادة ضوء LED. السماح للحيوانات للتأقلم لمدة 30 دقيقة، ثم استخدام ماصة باستور لنقل الأهداف من لوحة B إلى لوحة A.Allow ذكر وهدف للتفاعل في كل بئر لوقت المراقبة المحدد قبل إيقاف تسجيل الفيديو. أولاً، فحص الفيديو عن التوقيت عندما تم نقل كل هدف إلى بئر على لوحة A.Next، وتحديد بدء محاولة حراسة من قبل الذكور كهواة لهوائي الذكر مع أي جزء من الجسم من الهدف.

تحديد إنهاء محاولة حراسة من قبل الذكور كنقطة عندما كلا من هوائي الذكور فصل عن الجسم الهدف. ثم، تعريف بدء الجماع من قبل منحنى الجسم الظهري من الذكور، تليها الصحافة المتكررة من urosome ضد تلك التي من الأنثى. أولا ، توليد مقطع فيديو يضم الحلقة من الفائدة عن طريق تقليم الفيلم مع برامج تحرير الفيلم.

ثم افتح ImageJ وقم باستيراد قصاصة الفيديو. حدد الخيار الرمادي 8 بت سرية لتقليل الذاكرة المطلوبة لمعالجة الصور. بعد ذلك، حدد أداة تحديد الخط المستقيم للمعايرة الرياضية ورسم خط التحديد على طول قطر البئر.

افتح قائمة مقياس مجموعة وأدخل الطول المعروف في مربع المسافة المعروفة والوحدة في مربع وحدة الطول. بعد ذلك، افتح قائمة الخصائص وأدخل الفاصل الزمني للإطار في مربع الفاصل الزمني للإطار. افتح المكون الإضافي MTrackJ عن طريق اختيار المكونات الإضافية و MtrackJ.

ثم انقر فوق زر التعقب في نافذة الحوار لفتح قائمة تكوين التتبع. تحقق من تطبيق التقاط المؤشر المحلي أثناء المسار وحدد المركزية الداكنة كميزة المفاجئة. بعد ذلك، انقر فوق الزر إضافة في إطار الحوار MTrackJ لبدء التعقب.

ضع المؤشر لتغطية الأفراد في مقطع الفيديو ليتم تعقبه. ثم انقر فوق للكشف عن المركزية المظلمة للكائن داخل المربع. لإنشاء جدول بيانات، انقر فوق جدول القياس في إطار الحوار MTrackJ، ثم انقر فوق زر الفيلم لإنشاء فيلم مع مسار متعقب مرسوم كخط ملون.

وأخيراً، انقر فوق الزر حفظ في إطار الحوار MTrackJ لحفظ النتائج، بما في ذلك البيانات في مسار ثنائي الأبعاد المتعقبة. في هذه التجربة، تم تسجيل سلوك حراسة التزاوج من كوببودس دجلة ولوحظ. ويظهر التحليل وجود فرق في متوسط مدة محاولات الحراسة بين الأزواج الذكور والإناث وأزواج الذكور والذكور من التيجلوبوس كاليفورنيكوس حيث أظهر الذكور في الأزواج الذكور والذكور مدة المحاولات أقصر نسبيا من تلك الموجودة في أزواج الذكور والإناث.

وكشف تتبع مكاني البعدان لأزواج الحراسة المشكلة حديثًا من Tigriopus californicus أن الأزواج الذكور والذكور تميل إلى إظهار سرعة أعلى من الأزواج بين الذكور والإناث في الثواني الثلاث الأولى من محاولات الحراسة. بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجالات علم الإثولوجيا والكيمياء الحيوية وعلم الوراثة التطوري لاستكشاف نظام التزاوج الفريد من هذا النوع من الـ copepods.