رامان الرنين المزودة بسطح نثر راتيوميتري نانوبروبي للكشف عن سرطان المبيض المجهرية عن طريق مستقبلات حمض الفوليك استهداف

هذه الطريقة توظف التطبيق الموضعي للجسيمات النانوية لصورة الأورام المجهرية، وخاصة في الأورام الخبيثة التي ليس لديها حتى الآن الوصول إلى الأوعية الدموية، مثل الانبثاث من سرطان المبيض. هذه التقنية هي نسبة، تصوير المستهدفة وغير المستهدفة الجسيمات النانوية في مسح واحد للحد من الإشارات الكاذبة والكشف عن المدى الحقيقي للورم. يمكن أن تدار هذه الجسيمات النانوية عن طريق الحقن داخل الصفاق أو الحقن الوريدي للتصوير عالية الدقة لسرطان المبيض والعديد من أنواع الأورام الأخرى.

للذهب نانوستار الأساسية التوليف مكان قارورة مخروطية تحتوي على 800 ملليلتر من حمض الاسكوربيك الطازجة أعدت على لوحة ضجة المغناطيسي في أربع درجات مئوية والحث على دوامة ثابتة. إضافة بسرعة ثمانية ملليلتر من محلول حمض رابع الكلوروريك الطازجة إلى الدوامة. في غضون ثوان سوف تشكل النجوم النانوية والحل سوف تفترض اللون الأزرق الداكن.

صب تعليق نانوستار في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر للطرد المركزي وpirate جميع ما عدا آخر 200 ميكرولترات من عظمى من كل أنبوب في نهاية الدورة. استخدم ميكروبيبيت لإعادة تعليق الجسيمات النانوية في كل أنبوب قبل تجميع جميع الجسيمات النانوية في كاسيت غسيل كلوي واحد. ثم dialyze الجسيمات النانوية لمدة ثلاثة أيام على الأقل ضد لترين من المياه ديوند تغيير المياه يوميا.

بالنسبة لتشكيل قشرة السيليكا، أضف أولاً 10 ملليلترات من الأيزوبروبانول، و500 ميكرولتر من TEOS، و200 ميكرولتر من المياه الأيونية، و60 ميكرولترات من الصبغة إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. وأضيف ثلاثة ملليلترات من الإيثانول، و200 ميكرولتر من هيدروكسيد الأمونيوم إلى أنبوب 15 ملليلتر. المقبل، سونيكات النجوم النانوية dialyzed لتفريق أي مجموعات وإضافة 1.2 ملليلتر من النجوم النانوية إلى الأنبوب.

ضع أنبوب 50 ملليلتر على خلاط دوامة والحث على دوامة ثابتة. إضافة بسرعة حل نانوستار إلى أنبوب 50 ملليلتر مع حوالي خمس ثوان أخرى من الاختلاط قبل نقل الأنبوب بسرعة إلى شاكر لمدة 15 دقيقة في 300 دورة في الدقيقة في درجة حرارة الغرفة. يجب الجمع بين أنبوبين بسرعة وتحت nixing المستمر لضمان أن يحدث رد فعل silication على النجوم النانوية ولتقليل إنتاج السيليكا الحرة.

في نهاية الحضانة ملء الأنبوب بالإيثانول لإخماد رد الفعل وجمع النجوم النانوية عن طريق الطرد المركزي. التعرق كل شيء ولكن حول آخر 500 ميكرولترات من المابير مع الحرص على عدم إزعاج بيليه وإعادة تعليق الجسيمات النانوية في ملليلتر واحد من الإيثانول الطازج. ثم نقل الحل إلى أنبوب الطرد المركزي 1.5 ملليلتر لمدة أربعة ملليلتر واحد من الإيثانول يغسل عن طريق الطرد المركزي، resuspending بيليه عن طريق ultrasonication لمدة ثانية واحدة تقريبا بين كل غسل.

لإدخال ثيول إلى أسطح الجسيمات، بعد الغسيل الأخير resuspend بيليه في ملليلتر واحد من الإيثانول 85٪، 10٪3-mercaptopropyl-trimethoxysilane، و 5٪ محلول المياه deionized لاحتضان لمدة ساعة إلى ساعتين في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، وغسل الجسيمات النانوية وظيفية thiol عن طريق الطرد المركزي كما هو مبين، resuspending بيليه عن طريق ultrasonication بين يغسل. للأجسام المضادة وظيفية المضادة للفولات مستقبلات nanoprobes تتفاعل 200 ميكروغرام من المضادة المضادة للبروتين المضادة للفولات ملزمة مع عشرة أضعاف الضرس الزائدة من ربط الربط عبر في 500 ميكرولترات من العازلة HEPES.

بعد 30 دقيقة التركيز على الجسم المضاد عن طريق الطرد المركزي في مرشح الطرد المركزي، واستعادة الجسم المضاد عن طريق عكس مرشح في أنبوب جديد للطرد المركزي إضافية. ثم اخلط الجسيمات النانوية الوظيفية ثيول مع الأجسام المضادة المركزة وتحتضن الخليط لمدة 30 دقيقة على الأقل في درجة حرارة الغرفة. لتشكيل نانوprobes غير المستهدفة إضافة خمسة ملليغرام ميثوكسي إنهاء PEG 5000 maleimide حل في DMSO إلى الجسيمات النانوية ثيول وظيفية في 500 ميكرولترات من العازلة HEPES لاحتضان ما لا يقل عن 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

لحقن نانوبروب تدور أسفل كل من نكهات نانوروب و resuspend الكريات في العازلة MES الطازجة في تركيز 600 picomolar. اخلط الجسيمات النانوية وحمّل ملليلتر واحد من المحلول الناتج في حقنة واحدة ذات ملليلتر مجهزة بإبرة قياس 26 لكل فأرة وحقن الحجم بالكامل في بطن كل فأرة. ثم تدليك بلطف البطن لتوزيع الجسيمات النانوية في جميع أنحاء تجويف البريتوني.

بعد ما لا يقل عن 25 دقيقة تأمين أطراف حقن القتل الرحيم على منصة جراحية واستخدام ملقط مسننة ومقص تشريح لإزالة الجلد لفضح الصفاق. اِنز الصفاق نعلق اللوحات البريتونية إلى المنصة وغسل داخل تجويف البريتوني مع ما لا يقل عن 60 ملليلتر من برنامج تلفزيوني.

ثم نقل المنصة إلى مقياس طيفي رامان مع تكوين بصري مستقيم ومرحلة آلية وصورة البطن تحت معلمات التصوير المناسبة. وهذا أمر بالغ الأهمية أن تكون الطائرة المحورية لمسح رامان على سطح معظم الأحشاء. إذا كانت الأجهزة خارج المستوى، فإن الإشارة المكتسبة لن تكون مفيدة.

لأغراض مراقبة الجودة يمكن أن تتميز الجسيمات النانوية باستخدام مجموعة متنوعة من الطرق أثناء عملية التوليف، بما في ذلك المجهر الإلكتروني انتقال، وتشتت الضوء الحيوي، وتحليل تتبع الجسيمات النانوية، والأشعة فوق البنفسجية الماصة الطيفية. تكشف قياسات رامان عن وجود أطياف فريدة من كل نكهة من الجسيمات النانوية في جميع أنحاء التوليف. تعتمد غلة التركيزات النموذجية في التفاعلات بشكل كبير على تقنية الخفق أثناء خطوات الغسيل.

يمكن معالجة أطياف رامان لإزالة الفلوريسنس وتطبيعه إلى منطقة الوحدة للتعويض عن قوة الإشارة قبل تطبيق المربعات الأقل الكلاسيكية. على الرغم من أن الدرجات التقليدية الأقل تربيعًا على كل طيف مرجعي نانوي لا توفر بشكل فردي المواقع المحددة للأورام ، فإن النسب ذات النقطة الحكيمة تكشف عن وجود الانتشار المجهري المنشور. أثناء محاولة هذا الإجراء من المهم أن نتذكر للتحقق من صحة الجسيمات النانوية في كل خطوة من عملية التوليف حيث تؤثر جودة الجسيمات النانوية بقوة على النتائج النهائية.

هذه التقنية توضح إمكانية استخدام الباحثين نانوروبس للكشف عن علامات مرتبطة بالورم في النماذج الحيوانية وأنسجة المريض المُخَرَّرة بدرجة عالية من الدقة المجهرية.