Name: ميكروهيموررهاجيس الدماغي شبه الحاد الناجم عن حقن ليبوبوليساكتشاريدي في الفئران (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: تعلم بروتوكولاً لإحداث نزيف دماغي دقيق شبه حاد في فئران Sprague-Dawley باستخدام حقن LPS. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة التهاب الدماغ وآليات إصابة الأوعية الدموية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ونحن نشكر "المعلم جيان فنغ ليو" وزملاؤه من جامعة الطب في العاصمة للتوجيه أثناء التصوير بالرنين المغناطيسي. ونشكر أيضا تسنغ جينغ من قسم الأعصاب، مستشفى من ييتشانغ "الشعب الثانية" لتوفير الدعم التقني.

جميع الأساليب الموصوفة هنا أقرها "العناية بالحيوان" واستخدام اللجنة (ACUC) من المستشفى العام في الجيش جيش التحرير الشعبي الصيني.
1-المواد
<ol><li>التحضير للحقن بلبس<ol>
<li>إضافة 25 مل ماء المقطر إلى 25 ملغ مسحوق لبس المستمدة من S. typhimurium بتركيز 1 ملغ/مل نهائي. تخزين الحقن في أنبوب عقيم في 4 درجات مئوية. تنبيه: لبس السامة.</li>
		<li>إعداد حل المجلس التنفيذي 2% في المحلول الملحي 0.9% العادي لإبقاء EB حقن بتركيز العمل.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2-الحيوانات
<ol><li>إدارة لبس لذكور الفئران سبراغ داولي (SD)، الذين تتراوح أعمارهم بين 10 أسابيع (متوسط الوزن: 280 ± 20 g) بالحقن داخل. تنبيه: إذا الفئران يتم شراؤها من منظمة أخرى، ثم مرحلة التكيف ينبغي أن لا تكون أقل من 7 أيام.</li>
</ol>3-لبس حقن
<ol><li>حقن لبس إينترابيريتونيلي في كل الفئران بجرعة مقدارها 1 مغ/كغ، والعودة على الفئران إلى القفص المنزل. ملاحظة: التخدير غير ضروري.</li>
	<li>وبعد ست ساعات حقن جرعة نفس لبس بالحقن في الفئران.</li>
	<li>ستة عشر ساعة في وقت لاحق بنفس جرعة لبس حقن الفئران. تنبيه: حقن الفئران SD مع لبس عند جرعة مقدارها 1 مغ/كغ قد ينتج بمعدل وفيات 5%. ويمكن زيادة معدل وفيات في الفئران الأصغر أو الأكبر سنا أو إناث الفئران الحوامل.</li>
	<li>العودة على الفئران إلى اقفاصها بعد حقن لبس وتقديم إعلانية libitum الحصول على الطعام والشراب. ملاحظة: سوف يحمل الفئران استجابة التهابات الجهازية متميزة، وبالتالي فمن الضروري أن تظل الأقفاص نظيفة طوال التجربة. الجرذان ينبغي أن يكون كثيرا ما (يوم 2 x) رصد للوزن والمظهر العام والموقف بعد حقن لبس أول. إذا الفئران ابدأ إلى المعرض موقف متحدب، الرغبة في التحرك، فقدان وزن كبير (> 20%)، البورفيرين تلطيخ أن تكون إنسانية euthanized قبل يوم 7 نقطة نهاية الدراسة EB.</li>
</ol>4. جمع العينات
<ol><li>حقن EB<ol>
<li>سبعة أيام بعد الحقن الأول، تخدير الفئران التي إينترابيريتونيلي وفقا لبروتوكول IACUC المعتمد الخاص بك.</li>
		<li>الانتظار 1-2 دقيقة حتى الفئران لا تظهر الردود منعكس القرنية. أداء مم 5 – 8-ثقب القلب عميقة على كل الفئران؛ وينبغي أن تكون نقطة •اجراء 5 مم إلى الهامش الأيسر من القص في الفضاء إينتيركوستالس الثالثة والرابعة.</li>
		<li>الانتظار لحين استرداد الدم ويلاحظ ومن ثم ضخ EB بجرعة 0.2 مل/100 جم من وزن الجسم في البطين الأيسر من القلب. تنبيه: ثقب القلب وحقن EB ينبغي إمعان إجراء. قد حقنت EB داخل تجويف الصدر أو تامور بدلاً من البطين الأيسر من القلب.<ol>
<li>تمتص مرة أخرى مع أنبوب فارغ واستبدال هذا المجلد مع أنبوب EB قبل الحقن للمساعدة على تقليل معدل الفشل (على سبيل المثال-، الحقن إلى القفص الصدري عن طريق الخطأ).</li>
		</ol>
</li>
		<li>ابق الفئران في موقف ضعيف لمدة 10 دقائق. ملاحظة: إذا لم يتم استخدام عينة للكشف عن التسرب EB في تصوير الفلورة، ثم هذه الخطوة قد تكون محذوفة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>المراقبة الإجمالي<ol>
<li>أداء القلب بيرفوسيونس استخدام المثلج م 1 الفوسفات المالحة المخزن المؤقت (PBS) لمسح المفرج الدماغي والعقول.<ol>
<li>استخدام مشرط، جعل شق البطن عبر طول الحاجز.</li>
			<li>غادر قطع من خلال الأضلاع فقط من خط الوسط القفص الصدري.</li>
			<li>فتح تجويف الصدر. استخدام المشابك لفضح القلب وتسهيل تصريف الدم والسوائل الأخرى.</li>
			<li>أثناء الضغط بثبات القلب مع الملقط (لا يزال ينبغي أن يكون ضرب القلب)، مباشرة تأمين إدراج إبرة في بروز البطين الأيسر لتوسيع هذا إلى حوالي 5 ملم. الإبرة في هذا الموضع لقط قرب نقطة الدخول. تنبيه: لا تمتد مفرطة الإبرة، كما يمكن اختراق الجدار الداخلية وحل وسط تداول الحلول.</li>
			<li>الإفراج عن صمام للسماح بتدفق الجليد برنامج تلفزيوني الحل (200-300 مل) بمعدل بطيء وثابت في حوالي 20 مل/دقيقة باستخدام مضخة التروية. إذا الحيوانات يتطلب التثبيت بدلاً من مراقبة الإجمالي، ثم استخدم نفس جرعة المثلج المحلول الملحي 0.9 في المائة.</li>
			<li>باستخدام مقص حاد، جعل شق في الحديقة الشتوية، ضمان أن الحل باستمرار تدفق. إذا كان السائل لا تتدفق بحرية أو قادم من الحيوان في آنفة أو فمه، قم بتغيير موضع الإبرة.</li>
		</ol>
</li>
		<li>الشاشة كمهس بالمراقبة الإجمالي. ملاحظة: إذا لم يتم استخدام العينة في حساب عدد كمهس بالمراقبة الإجمالي، ثم هذه الخطوة يمكن إهماله.</li>
	</ol>
</li>
	<li>التثبيت<ol>
<li>أداء القلب بيرفوسيونس استخدام المثلج 0.9% المحلول الملحي (200-300 مل) لمسح المفرج الدماغي والعقول.</li>
		<li>أداء القلب بيرفوسيونس استخدام المثلج 4% بارافورمالدهيد للتثبيت.</li>
		<li>قطع رأس الفئران، وعزل الدماغ، وتزج في الدماغ في محلول السكروز 20% على الأقل من 6 ح.</li>
		<li>تغيير الحل إلى السكروز 30% وإصلاح لآخر ح 6.
</li>
	</ol>
</li>
	<li>إعداد 10 مقاطع أنسجة الدماغ مم سميكة استخدام كريوستات.</li>
</ol>5-وقال أنه يلطخ
ملاحظة: يتم تنفيذ هذا الإجراء استخدام "أنه يلطخ عدة".
<ol><li>يغسل الشرائح في ماء مقطر.</li>
	<li>وصمة عار في الحل توضع على 8 كحد أدنى من المياه والصرف الصحي في تشغيل مياه الحنفية لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>التفريق في الكحول حمض 1% ليغسل س. 30 في إدارة مياه الحنفية لمدة 1 دقيقة.</li>
	<li>وصمة عار في 0.2% الأمونيا المائية (لالتشطيب) أو كربونات الليثيوم المشبعة الحل لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة أغسل في إدارة مياه الحنفية لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>شطف في الكحول 95% (10 الانخفاضات).</li>
	<li>كونتيرستين مع الحل ثم لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة.</li>
	<li>يذوي من خلال الكحول 95%، اثنين من التغييرات من الكحول المطلق، لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>واضح في زيلين نفط لمدة 30 ثانية.</li>
	<li>جبل استخدام الأسلوب ليو9.</li>
	<li>تحليل استخدام مجهر الأسفار برايتفيلد. ملاحظة: تظهر خلايا الدم الحمراء صدر من الأوعية الدموية، وهي مكونات كمهس، في الأحمر-البرتقالي تحت أنه يلطخ.</li>
</ol>6-بيرل البروسية الأزرق تلطيخ
ملاحظة: يتم تنفيذ هذا الإجراء باستخدام مجموعة "أدوات تلوين بيرلز".
<ol><li>تغسل شرائح مع الماء المقطر.</li>
	<li>وصمة عار في حل رد فعل مع خليط أجزاء متساوية فيروسيانيد وحامض الهيدروكلوريك لمدة 10 دقائق.</li>
	<li>يذوي وواضحة، وجبل، وتحليل الشرائح كما هو موضح في الخطوات 5.7 – 5.10.</li>
</ol>7-EB مزدوجة تلطيخ
ملاحظة: هذا الإجراء يتبع الخطوة 4.1.3.
<ol><li>تغسل شرائح مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>احتضان الشرائح مع 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) الحل لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>يغسل الشرائح مع برنامج تلفزيوني حل ثلاث مرات لمدة 5 دقائق في كل، وتحميل الشرائح مع الحل والغليسيرول برنامج تلفزيوني.</li>
	<li>تحليل الصور على مجهر الأسفار. تتم الإشارة إلى ترسب EB بالأسفار الحمراء؛ يتم الإشارة إلى الأنوية الفلورية الزرقاء.</li>
</ol>8-التصوير بالرنين المغناطيسي-مؤسسة الرعاية الاجتماعية
<ol><li>إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي على مغناطيس 7-T مجهزة بنظام تدرج بنشاط محمية (16 سم القطر الداخلي).</li>
	<li>سبعة أيام بعد العلاج، تخدير الفئران باستنشاق facemask isoflurane % 1.5 – 2.0 باستخدام نظام تخدير إيسوفلوراني.</li>
	<li>تطبيق مرهم البيطرية على عيون الفئران لمنع جفاف بينما تحت التخدير.</li>
	<li>الحفاظ على الفئران في موقف المعرضة وإجراء فحص التصوير بالرنين المغناطيسي-مؤسسة الرعاية الاجتماعية.</li>
	<li>الحصول على فحص SWI المرجح باستخدام تسلسل صدى سبين سريعة باستخدام المعلمات التالية: صدى الوقت (TE) 8 مللي ثانية، تكرار الوقت (TR) 40 مللي ثانية، والوجه زاوية = 12°، مجال الرؤية (FOV) 35 ملم × 35 ملم، اقتناء مصفوفة 384 × 384، للحصول على 1 مم سميكة شرائح.</li>
	<li>تحديد كمهس في التصوير بالرنين المغناطيسي-مؤسسة الرعاية الاجتماعية وفقا غرينبرغ et al. 11، التي تشمل المعايير التالية: (1) يبلغ قطرها مم دي وان زيرو، والبقع (2) دائرية ومعزولة، وإشارة منخفضة الكثافة.</li>
	<li>في نهاية التجربة، euthanize على الفئران باستخدام الأسلوب جرعة زائدة من ثاني أكسيد الكربون (تدفق 6 لتر في الدقيقة) أو 30 في المائة من حجم الحاوية.</li>
</ol>

<ol><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218(2016).</li>
<li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li>
<li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbleed+topography%2C+leukoaraiosis%2C+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li>
<li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li>
<li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Aging+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170(2016).</li>
<li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22(2018).</li>
<li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice%3A+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+H%26E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of H&E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li>
<li>Zeng, J., Zhào, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li>
<li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds%3A+A+guide+to+detection+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441(2016).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114(2017).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69(2018).</li>
<li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li>
<li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li>
<li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lipopolysaccharide+Parkinson%27s+disease+animal+model%3A+mechanistic+studies+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Fundamental+%26+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental & Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li>
<li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li>
<li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li>
<li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+small+vessel+disease%3A+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li>
<li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li>
<li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822(2017).</li>
<li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease%3F+-+New+insights+from+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Translational+Stroke+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental & Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4(2013).</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

الدراسات البحثية في كمهس زادت في السنوات القليلة الماضية. ومع ذلك، لا تزال الآلية كمهس غير واضحة، مما دفع العلماء وضع النماذج الحيوانية التي تحاكي هذا الشرط على وجه الخصوص. على سبيل المثال، هوفمان et al. وضع الناجمة عن نقص كمهس ماوس نموذج يوضح أن كمهس هي سبب نقص واضطراب autoregulation المخية12. رويتر et al. 5 إنشاء نموذج كمهس في الفئران المعدلة وراثيا APP23، الذي أظهر أن أنجيوباثي اميلويد الدماغي (الجهاز المركزي للمحاسبات) يلعب دوراً رئيسيا في مسببات كمهس....

ميكروهيمورهاجيس الدماغية الكلاسيكية (كمهس) تشير إلى الودائع ارتشاح صغيرة من نواتج انحلال الدم مثل هيموسيديرين من خلايا الدم الحمراء في المخ1. وفقا "دراسة مسح روتردام"، يمكن العثور على كمهس في ما يقرب من 17.8% أشخاص الذين تتراوح أعمارهم بين 60-69 سنة و 38.3 في المائة في تلك ما يزيد على 80 عاماً2. انتشار كمهس في كبار السن مرتفع نسبيا، ووجود علاقة بين تراكم كمهس والإدراكية والنفسية العصبية الخلل ثابتة3،4. العديد من النماذج الحيوانية من كمهس ذكرت في الآونة الأخيرة، بما في ذلك نماذج القوارض الناجم عن النوع الرابع كولاجيناز حقن ستيريوتاكسيك5والتطبيق المعدلة وراثيا6، التعرض β-N-ميثيلامينو-L-ألانين7، و8من ارتفاع ضغط الدم، مع كمهس الناجمة عن الالتهابات الجهازية كواحد من الخيارات الأكثر قبولا جيدا. فيشر وآخرون 9 أول من استخدم لبس المستمدة من typhimurium السالمونيلا إلى وضع نموذج ماوس كمهس حاد. وفي وقت لاحق، أفادت نفس المجموعة تطوير طراز الماوس كمهس شبه حادة باستخدام النهج نفسه2.
ويعتبر لبس كحافز تحريضية موحدة عن طريق حقن داخل. أكدت الدراسات السابقة أن حقن لبس يمكن أن يسبب نيوروينفلاميشن كما يتبين من كميات كبيرة من microglia ونماذج التنشيط أستروسيتي في الحيوان2،10. وعلاوة على ذلك، كان ارتباط إيجابي بين التنشيط لتفعيل نيوروينفلاميشن وعدد كمهس المنشأة2،10. استناداً إلى هذه الدراسات السابقة، نحن كانت تطالب بوضع نموذج فأر كمهس بالحقن داخل للبس.
التقدم في الكشف عن التكنولوجيات قد أدت إلى زيادة في عدد التحقيقات للبحث عن كمهس. الأكثر على نطاق واسع وتشمل أساليب الكشف عن كمهس الكشف عن خلايا الدم الحمراء الهيماتوكسيلين ويوزين (أنه) تلطيخ، كشف الحديديك الحديد قبل Blue البروسية تلطيخ9، الكشف عن إيفانز الأزرق (EB) ترسب من الفلورة التصوير، والتصوير بالرنين المغناطيسي-التعرض المرجحة تسلا 7.0 التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي-SWI)10. وتهدف الدراسة الحالية لتطوير طريقة للكشف عن كمهس.

<table><tbody><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2630</td><td>لتحريض الالتهاب</td></tr><tr><td>EB</td><td>Sigma-aldrich</td><td>E2129</td><td>للكشف عن تسرب EB</td></tr> محلول <tr><td>الموت DAPI</td><td>Servicbio</td><td>G1012</td><td>عد متوسط ل IF</td></tr><tr><td>Perl ' s تلطيخ بروسية</td><td>Solarbio</td><td>G1424</td><td>Kit للتلوين البروسي</td></tr><tr><td>HE تلطيخ</td> مجموعة <td>Solarbio</td><td>G1120</td><td>ل HE تلطيخ</td></tr><tr><td>هيدرات الكلور</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47335U</td><td>للتخدير</td></tr> محلول <tr><td>ملحي عازل للفوسفات (PBS)</td><td>Solarbio</td><td>P1022</td><td>نوع من المحلول العازل يشيع استخدامه في تجربة</td></tr><tr><td>محلول</td> <td>ملحي 0.9٪Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co.، Ltd. ، حل الصين</td><td></td><td>للتروية</td></tr><tr><td>بارافورمالدهايد</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>نوع من المحلول يشيع استخدامه للتثبيت</td></tr><tr><td>محلول السكروز 20٪</td><td>Solarbio</td><td>G2461</td><td>نوع من المحلول يشيع استخدامه للتثبيت</td></tr><tr><td>محلول السكروز 30٪</td><td>Solarbio</td><td>G2460</td><td>نوع من المحلول يشيع استخدامه للتثبيت</td></tr><tr><td>مرهم بيطري</td><td>Solcoseryl Eye gel ، Bacel ، سويسرا</td><td></td><td>لحماية عيون الفئران</td></tr></tbody></table>

ميكروهيموررهاجيس الدماغي شبه الحاد الناجم عن حقن ليبوبوليساكتشاريدي في الفئران

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

شائعة في المرضى الذين تتراوح أعمارهم بين ميكروهيمورهاجيس الدماغي (كمهس) وترتبط بالاضطرابات العصبية المختلفة. مسببات كمهس معقدة، وكثيراً ما يلاحظ neuroinflammation كتواجد المشارك. وهنا، يمكننا وصف شبه حادة نموذج الفئران كمهس الناجم عن حقن lipopolysaccharide (LPS)، فضلا عن أسلوب للكشف عن حقن كمهس. "لبس المنهجي" بسيط نسبيا، واقتصادا، وفعالة من حيث التكلفة. ميزة واحدة كبرى لحقن لبس هو استقرارها للحث على التهاب. كمهس الناجم عن حقن لبس يمكن الكشف عنها بواسطة المراقبة الإجمالية وتوضع وتلطيخ ويوزين (أنه)، بيرل تلطيخ البروسية، إيفانز الأزرق (EB) مزدوجة-وضع العلامات والتصوير بالرنين المغناطيسي-قابلية مرجح التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي-SWI) التكنولوجيا. وأخيراً، تناقش أيضا أساليب أخرى لتطوير نماذج حيوانية كمهس، بما في ذلك مزايا و/أو عيوب، في هذا التقرير.

ويمكن الكشف عن كمهس باستخدام نهج مختلف. الأساليب الأكثر قبولا جيدا وتشمل ما يلي: (1) إجمالي المراقبة والتقييم من سطح كمهس (كما هو موضح في الشكل 1، اللوحة العلوية)؛ (2) وتلطيخ للكشف عن خلايا الدم الحمراء (هو مبين في الشكل 2 ألف، اللوحة العلوية) أو البروسية تلطيخ الحديد الحديديك كشف المتأتية من تحلل خلايا الدم الحمراء (الشكل 2A، لوحة أقل)؛ (3) EB تضاعف تلطيخ للكشف عن ترسب EB المستمدة من التسرب BBB (<st...

نقدم بروتوكولا للحث والكشف عن كمهس الناجمة عن لبس حقن الفئران سبراغ داولي، التي قد تكون استخدمت في المستقبل التحقيقات للبحث في الآلية المرضية من كمهس.

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال النزف الدماغي الدقيق مثل المسببات، والتوزيع، والكشف عن النزيف الدماغي الدقيق وهلم جرا. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن حقن LPS تستحث الالتهاب بشكل ثابت. بالإضافة إلى ذلك، حقن LPS بسيط جداً، اقتصادية، وفعالة من حيث التكلفة.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في الحث نزيف الدماغ، ويمكن أيضا أن تطبق على اضطرابات الدماغ الأخرى مثل الاكتئاب، والفصام، ومرض باركنسون، ومرض الزهايمر، ومرض البريون. إدارة LPS بجرعة من ملليغرام واحد لكل كيلوغرام من وزن الجسم ل10 أسابيع الذكور الجرذان Doley Sprague عن طريق الحقن داخل الصفتون، ثم العودة كل الفئران إلى القفص المنزلي. كرر حقن LPS بعد ست ساعات و 16 ساعة.يرجى ملاحظة أن حقن الفئران SD مع LPS بجرعة من مليغرام واحد للكيلوغرام الواحد قد يؤدي إلى 5٪ وفيات. ويمكن أن يزداد معدل الوفيات في الجرذان الأصغر سنا أو الأكبر سنا أو الجرذان الحامل. إعادة الفئران إلى أقفاصها بعد حقن LPS، وتوفير الإعلان libitum الوصول إلى الطعام والشراب.تحت التخدير النهائي، قم بإجراء ثقب قلبي عميق من 5 إلى 8 ملليمترات على كل جرذ. يجب أن تكون نقطة الثقب خمسة ملليمترات إلى الهامش الأيسر من القص في الفضاء الوربي الثالث والرابع. عقد الإبرة في مكان واستبدال أنبوب فارغ مع أنبوب يحتوي على ايفانز الأزرق.انتظر حتى يتم ملاحظة استعادة الدم ، ثم حقن ايفانز الأزرق بجرعة من 0.2 ملليلتر لكل 100 غرام من وزن الجسم في البطين الأيسر للقلب. إبقاء الفئران في موقف supine لمدة 10 دقائق إذا تقييم ايفانز تسرب الأزرق من خلال حاجز الدم / الدماغ عن طريق التصوير المناعي. إجراء ضخ القلب باستخدام الجليد الباردة 200 إلى 300 ملليلتر من 0.9٪ محلول ملحي لمسح الأوعية الدموية الدماغية والعقول.التحول إلى الجليد الباردة 4٪ شبهformaldehyde لتثبيت. ثم، بعد عزل الدماغ، غمره في 20٪ من السكروز في برنامج تلفزيوني لمدة ست ساعات على الأقل أو حتى يغرق الدماغ إلى أسفل الأنبوب. تغيير الحل إلى 30٪ السكروز وإصلاحه لمدة ست ساعات أخرى.وأخيراً، أعد أقسام أنسجة الدماغ السميكة 10 ملليمتر باستخدام جهاز التبريد. غسل الشرائح مع برنامج تلفزيوني ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل من هذه، ثم احتضان الشرائح مع 4، 6'diamidino-2-فينيليندول أو DAPI حل لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد غسل الشرائح في برنامج تلفزيوني كما كان من قبل، تحميل الشرائح مع برنامج تلفزيوني- محلول الجلسرين.التقاط الصور على المجهر المفلور. يشار إلى ترسب EB بواسطة الفلوري الأحمر ، ويشار إلى النوى من قبل الفلورسينس الأزرق. ابدأ تلطّخ H&E عن طريق غسل الشرائح في الماء المقطر.ثم تزج في حل الهماوكسيلين لمدة ثماني دقائق. بدلا من ذلك، لبيرل البروسية الأزرق تلطيخ، وصمة عار في حل رد فعل مع خليط متساو أجزاء من حمض ferrocyanide وحمض الهيدروكلوريك لمدة 10 دقائق. بعد تلطيخ، وغسل في مياه الصنبور الجارية لمدة خمس دقائق.التفريق في 1٪ من الكحول الحمضي لمدة 30 ثانية. بعد الغسيل في مياه الصنبور الجارية لمدة دقيقة واحدة، وصمة عار في 0.2٪ ماء الأمونيا أو محلول كربونات الليثيوم المشبعة لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. بعد ذلك، اغسل في مياه الصنبور الجارية لمدة خمس دقائق.مضادة للصم مع حل إيوسين لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. الجفاف من خلال 90٪ الكحول، ثم 95٪، والكحول المطلق لمدة 0.5 إلى دقيقتين لكل منهما. بعد الجفاف، واضحة في إكسيلين لمدة 30 ثانية.بعد التركيب، تحليل تلطيخ H & E باستخدام المجهر الفلوريfield. تظهر خلايا الدم الحمراء المُطلقة من الأوعية الدموية، وهي مكونات لـ CMHs، في اللون الأحمر البرتقالي تحت تلطيخ H&E. يمكن الكشف عن CMHs السطح من قبل المراقبة الإجمالية كما هو مبين من قبل السهام الحمراء.ايفانز الأزرق تلطيخ يكشف الفلوريسين الأحمر مرئية حيث ايفانز الجزيئات الزرقاء تسربت من حاجز الدم في الدماغ المصاب. يُظهر تلطيخ H&E خلايا الدم الحمراء الموجودة خارج الشعيرات الدموية، ويكشف التلطين البروسية عن نقاط أيونات الحديديك المشتقة من تحلل خلايا الدم الحمراء. أثناء محاولة هذا الإجراء, من المهم أن نتذكر أن جرعة من LPS للحث على الدماغ الجزئي النزيف أكبر من تلك المستخدمة في مرض باركنسون أو نموذج الفصام.ولذلك، ينبغي الحفاظ على بيئة الحيوانات نظيفة للحد من معدل الوفيات. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل المجهر الإلكتروني، والتصوير بالرنين المغناطيسي، والتصوير المناعي لتحديد الضرر الذي لحق بالبنية الخارجية لحواجز الدم في الدماغ في النزيف الدماغي الدقيق، وتوزيع نزيف الدماغ الدقيق في الدماغ parenchyma في الجسم الحي، فضلا عن تنشيط الخلايا الدبقية.

sub-acute-cerebral-microhemorrhages-induced-lipopolysaccharide

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

أم الدم نزيف تحت العنكبوتية (SAH) والذي يحدث نزيف في الفضاء تحت العنكبوتية عندما تمزق تمدد الأوعية الدموية. في حين كانت معدلات الاعتلال والوفيات من هذا الحدث على انخفاض بسبب النهج تحسين العلاج، وخطر بالتشنج بعد نزيف تحت العنكبوتية لا يزال هو نفسه كما كان قبل عدة سنوات. كانت أهمية إنشاء نموذج حيواني شاملة وقابلة للتكرار لتحديد بدء الأحداث من تشنج وعائي دماغي محور البحوث منذ أول استخدام للالفئران في نموذج بالتشنج التجريبية في عام 1979 من قبل...

A فأر معدل وفيات منخفض الموديل بالتشنج الدماغي لتقييم تأخر بعد نزيف تحت العنكبوتية التجريبية

وهناك حاجة إلى نماذج حيوانية ذات الصلة سريريا من نزيف داخل المخ (ICH) لتوسيع نطاق معرفتنا السكتة النزفية ودراسة استراتيجيات علاجية جديدة. في هذه الدراسة، فإننا وصف وتقييم النماذج ICH اللذين تنفيذ حقن الدم إما من طرف واحد أو كلها ذاتي كولاجيناز البكتيرية في العقد القاعدية (الجسم المخطط) من الفئران.

نزف الدماغي الداخلي النمذجة في الفئران: حقن الدم الذاتي أو البكتيرية كولاجيناز

يوضح هذا الفيديو عملية إحداث اضطراب الحاجز الدموي الدماغي (BBB) والنزيف الدقيق الدماغي في نموذج الفئران باستخدام عديدات السكاريد الدهنية (LPS). يسلط الضوء على تسلسل الاستجابات المناعية التي تؤدي إلى زيادة نفاذية BBB وتلف أنسجة المخ لاحقا.

تحريض النزيف الدقيق الدماغي في نموذج الفئران باستخدام عديدات السكاريد الدهنية

يوضح هذا الفيديو فحصا للكشف عن النزيف الدماغي الدقيق (CMHs) في نموذج الفئران. CMHs هي نزيف في الدماغ بسبب اضطراب الحاجز الدموي الدماغي ، والذي يتم تحديده بواسطة خلايا الدم الحمراء المتسربة (كرات الدم الحمراء). في نموذج الفئران ، تكون أنسجة المخ الثابتة محمية بالتبريد ، ومقسمة ، وملطخة بالهيماتوكسيلين يوزين لكرات الدم الحمراء ، مما يسمح بالتصور المجهري ل CMHs. تظهر كرات الدم الحمراء المسربة باللون الأحمر البرتقالي تحت المجهر.

الكشف عن النزيف الدماغي الدقيق في نموذج الفئران

&lt; p class = 'jove_content'&gt; تستخدم النماذج قبل السريرية للنزيف داخل المخ لتقليد جوانب معينة من الأمراض السريرية. وبالتالي ، يمكن استكشاف آليات الإصابة والاستراتيجيات العلاجية المحتملة. في هذا البروتوكول ، يتم وصف نموذجين من النزيف داخل المخ ، الحقن داخل المخطط (العقد القاعدية) للدم الذاتي أو الكولاجيناز.

حقن Intrastriatal من ذاتي الدم أو اللاهوائية كولاجيناز كنماذج الفئران من نزف الدماغي الداخلي

يشمل  الاعتلال الدماغي للخداج تشوهات الجهاز العصبي المركزي المرتبطة بالإصابة من الولادة المبكرة. يصف هذا التقرير نموذجا ذا صلة سريريا لنقص الأكسجة الجهازي العابر في الرحم وإدارة عديدات السكاريد الدهنية داخل السلى (LPS) التي تحاكي التهاب المشيمة والسلى ، والتأثير المرتبط بالمحفزات المعدية ونقص تروية المشيمة على تطور الجهاز العصبي المركزي.

النمذجة دماغي من الولادة المبكرة قبل الولادة عن طريق نقص الأكسجة-نقص التروية مع lipopolysaccharide في البينية الذي يحيط بالجنين في الفئران

يسمح البروتوكول المعروض هنا بإعادة إنتاج مادة رمادية واسعة الانتشار لإزالة الميالين من نصفي الكرة الأرضية القشرية في فئران أغوتي الداكنة الذكور البالغين. وتتألف هذه الطريقة من زرع داخل الدماغ من القسطرة, التحصين دون السريري ضد المايلين oligodendrocyte بروتين غليكوبروتين, وحقن داخل الدماغ من خليط السيتوكين الموالية للالتهابات من خلال القسطرة المزروعة.

نموذج الفئران من إزالة المزيل القشرية الدماغية على نطاق واسع الناجمة عن الحقن داخل الدماغ من السيتوكينات الموالية للالتهابات

نقدم بروتوكولا لإنشاء نموذج نزيف بونتين ضخم في الفئران عن طريق الحقن المزدوج للدم الذاتي.

نزيف بونتين ضخمة عن طريق الحقن المزدوج للدم الذاتي

لا يزال النزف تحت العنكبوتية يحمل عبئا كبيرا من الوفيات والمراضة لدى الإنسان. لتسهيل إجراء مزيد من البحث في الحالة والفيزيولوجيا المرضية ، يتم تقديم نموذج حقن واحد قبل chiasmatic.

حقنة واحدة من الدم الذاتي قبل Chiasmatic للحث على نزيف تحت العنكبوتية التجريبي في نموذج الفئران

يمكن نمذجة استسقاء الرأس الخداجي بعد النزف (PHHP) في الفئران حديثي الولادة من خلال الجمع بين التهاب المشيمة والسلى والنزيف داخل البطين. يلخص الجمع بين هذه الأحداث قبل الولادة وبعدها بدقة السمات المميزة السريرية ل PHHP ، بما في ذلك ضخامة الرأس ، وتضخم البطين ، والضغط المرتفع داخل الجمجمة ، طوال العمر.

نمذجة استسقاء الرأس التالي للنزف للخداج في الفئران

في هذه الدراسة، تم إثبات أن تقنية الغرس غير الغازية في الحنجرة تطور ALI في الفئران باستخدام منظار الحنجرة الأساسي لضمان توصيل LPS بدقة إلى الرئتين. يتم حقن LPS عبر أنبوب في القصبة الهوائية باستخدام منظار الحنجرة. يتم تقييم حجم إصابة الرئة في عدة نقاط زمنية.

إعطاء دهنية السكاريد غير الجراحية في القصبة الهوائية لتحفيز إصابة حادة في الرئة لدى القوارض

تعلم بروتوكولاً لإحداث نزيف دماغي دقيق شبه حاد في فئران Sprague-Dawley باستخدام حقن LPS. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة التهاب الدماغ وآليات إصابة الأوعية الدموية.

ميكروهيموررهاجيس الدماغي شبه الحاد الناجم عن حقن ليبوبوليساكتشاريدي في الفئران

استكشف المزيد من الفيديوهات