Name: التصوير في الوقت الحقيقي والتحديد الكمي للتنمية بيوفيلم الفطرية باستخدام نظام تدفق دائرية ذات مرحلتين (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 16 s
Description: تعلم تقنية التصوير في الوقت الحقيقي لدراسة تطور الأغشية الحيوية الفطرية باستخدام نظام التدفق الدائري ذي المرحلتين. تتيح هذه الطريقة التحليل الكمي لتأثيرات الجريان على نمو البيوفيلم.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

الكتاب يود أن ينوه الدكتور واد سيجوردسون لتقديم مساهمة قيمة في تصميم جهاز التدفق.

<ol><li>Pankhurst, C. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2907793/">Candidiasis (oropharyngeal).</a> BMJ clinical evidence. 2012, 1304(2012).</li>
<li>Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., López-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15496122">Characteristics of biofilm formation by Candida albicans.</a> Revista iberoamericana de micología. 18 (4), 163-170 (2001).</li>
<li>Nobile, C. J., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cell-surface+genes+and+biofilm+formation+by+the+C.+albicans+transcription+factor+Bcr1p%5BTitle%5D)+AND+%22Current+biology%3A+CB%22%5BJournal%5D)">Regulation of cell-surface genes and biofilm formation by the C. albicans transcription factor Bcr1p.</a> Current biology: CB. 15 (12), 1150-1155 (2005).</li>
<li>Blankenship, J. R., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+build+a+biofilm%3A+a+fungal+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+microbiology%22%5BJournal%5D)">How to build a biofilm: a fungal perspective.</a> Current opinion in microbiology. 9 (6), 588-594 (2006).</li>
<li>Araújo, D., Henriques, M., Silva, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portrait+of+Candida+Species+Biofilm+Regulatory+Network+Genes%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+microbiology%22%5BJournal%5D)">Portrait of Candida Species Biofilm Regulatory Network Genes.</a> Trends in microbiology. 25 (1), 62-75 (2017).</li>
<li>Lane, W. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel-plate+flow+chamber+and+continuous+flow+circuit+to+evaluate+endothelial+progenitor+cells+under+laminar+flow+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%22%5BJournal%5D)">Parallel-plate flow chamber and continuous flow circuit to evaluate endothelial progenitor cells under laminar flow shear stress.</a> Journal of visualized experiments. (59), e3349(2012).</li>
<li>Bakker, D. P., van der Plaats, A., Verkerke, G. J., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+velocity+profiles+for+different+flow+chamber+designs+used+in+studies+of+microbial+adhesion+to+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+environmental+microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of velocity profiles for different flow chamber designs used in studies of microbial adhesion to surfaces.</a> Applied and environmental microbiology. 69 (10), 6280-6287 (2003).</li>
<li>Zhang, W., Sileika, T. S., Chen, C., Liu, Y., Lee, J., Packman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+planar+flow+cell+for+studies+of+biofilm+heterogeneity+and+flow-biofilm+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+bioengineering%22%5BJournal%5D)">A novel planar flow cell for studies of biofilm heterogeneity and flow-biofilm interactions.</a> Biotechnology and bioengineering. 108 (11), 2571-2582 (2011).</li>
<li>Uppuluri, P., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+easy+and+economical+in+vitro+method+for+the+formation+of+Candida+albicans+biofilms+under+continuous+conditions+of+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">An easy and economical in vitro method for the formation of Candida albicans biofilms under continuous conditions of flow.</a> Virulence. 1 (6), 483-487 (2010).</li>
<li>Diaz, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+interaction+between+Candida+albicans+and+commensal+oral+streptococci+in+a+novel+in+vitro+mucosal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Synergistic interaction between Candida albicans and commensal oral streptococci in a novel in vitro mucosal model.</a> Infection and immunity. 80 (2), 620-632 (2012).</li>
<li>McCall, A., Edgerton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-Time+Approach+to+Flow+Cell+Imaging+of+Candida+albicans+Biofilm+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+fungi%22%5BJournal%5D)">Real-Time Approach to Flow Cell Imaging of Candida albicans Biofilm Development.</a> Journal of fungi. 3 (1), Basel, Switzerland. 13(2017).</li>
<li>Zhang, B., Zerubia, J., Olivo-Marin, J. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gaussian+approximations+of+fluorescence+microscope+point-spread+function+models%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+optics%22%5BJournal%5D)">Gaussian approximations of fluorescence microscope point-spread function models.</a> Applied optics. 46 (10), 1819-1829 (2007).</li>
<li>Tati, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+glabrata+Binding+to+Candida+albicans+Hyphae+Enables+Its+Development+in+Oropharyngeal+Candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">Candida glabrata Binding to Candida albicans Hyphae Enables Its Development in Oropharyngeal Candidiasis.</a> PLoS pathogens. 12 (3), 1005522(2016).</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

باستخدام نظام تدفق كما هو مبين أعلاه يسمح لتوليد كمية من أشرطة الفيديو الوقت الفاصل بين بيوفيلم الفطرية في النمو والتنمية. للسماح بإجراء مقارنات بين التجارب أنها ذات أهمية حاسمة لضمان بقاء المعلمات التصوير نفسه. وهذا يشمل ضمان أن يتم إعداد المجهر لإنارة كوهلر لكل تجربة (أدلة كثيرة على شبكة الإنترنت لهذه العملية). وبصرف النظر عن التصوير المعلمات، وهناك بعض الخطوات الهامة التي يجب وضعها في الاعتبار عند العمل مع جهاز التدفق. أولاً، من المهم لضمان المحافظة على فخ فقاعة تحت الفراغ أثناء تدفق السوائل، كما أن عدم القيام بذلك سي...

المبيضات البيض (المبيضة) هو الممرضات فطرية انتهازية من البشر التي يمكن أن تصيب العديد من أنواع الأنسجة، بما في ذلك الأسطح المخاطية الفموية وتسبب داء المبيضات المكنسية ونتج عنه انخفاض نوعية حياة للأفراد المتضررين1. تشكيل بيوفيلم سمة هامة للآلية المرضية المبيضة، وقد أجريت دراسات عديدة على تكوين ووظيفة المبيضة الأغشية الحيوية2،،من34، 5، أجريت الكثير منها ثابت (لا التدفق) في المختبر باستخدام النماذج. ومع ذلك، المبيضة يجب التقيد وتنمو حضور تدفق اللعاب في تجويف الفم. وقد وضعت العديد من نظم تدفق للسماح لخلية يعيش التصوير6،،من78،9،10. وقد صممت هذه الأنظمة تدفق مختلفة لأغراض مختلفة، وذلك كل نظام مختلف نقاط القوة والضعف. وجدنا أن العديد من تدفق النظم الملائمة المبيضة كانت مكلفة، المعقدة المطلوبة ملفقة أجزاء، أو يمكن عدم تصويرها أثناء تدفق وكان أن توقفت قبل التصوير. ولذلك، قمنا بتطوير جهاز تدفق رواية لدراسة المبيضة بيوفيلم تشكيل إطار تدفق11. أثناء تصميم جهازنا التدفق، تابعنا هذه الاعتبارات الرئيسية. أولاً، أننا نريد أن تكون قادرة على قياس جوانب متعددة من بيوفيلم النمو والتنمية في الوقت الحقيقي دون الحاجة إلى استخدام خلايا الفلورسنت (مما يسمح لنا لدراسة سلالات متحولة ويعزل السريرية غير معدلة بسهولة). ثانيا، كنا نريد جميع أجزاء لتكون متاحة تجارياً مع قليل من لا تعديلات (أي.، لا تلفيق مخصصة)، والسماح للآخرين بأكثر بسهولة إعادة إنشاء نظامنا، والسماح للتصليح سهلة. ثالثا، أردنا أيضا للسماح بتمديد التصوير مرات في معدلات التدفق مرتفعة بشكل معقول. وأخيراً، أردنا، بعد فترة من الخلايا إرفاق الركيزة تحت التدفق، لتكون قادرة على رصد النمو بيوفيلم على مدى فترة طويلة دون إدخال خلايا جديدة.
هذه الاعتبارات أدت بنا إلى تطوير نظام تدفق تدوير قارورة اثنين هو موضح في الشكل 1. قوارير اثنين تسمح لنا بتقسيم هذه التجربة إلى مرحلتين، مرحلة مرفق يستمد من قارورة مرفق المصنف الخلية، ومرحلة نمو التي تستخدم وسائل الإعلام الحرة خلية على مواصلة نمو بيوفيلم دون إضافة خلايا جديدة. صمم هذا النظام للعمل مع غرفة حضانة للمجهر، مع الشريحة والأنابيب السابقة لها (2 إلى 5، الشكل 1) يتم وضعها داخل الحاضنة، وتوضع جميع المكونات الأخرى في حاوية كبيرة ثانوي خارج المجهر. بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام محرض هوتبلت مع مسبار درجة حرارة مرفقة الحفاظ على الخلايا الفطرية في قارورة المرفقات عند 37 درجة مئوية. كما أنه يتم تعميم، هذا النظام قادر على تصوير مستمر أثناء تدفق (يمكن أن يكون أكثر من 36 ح تبعاً للظروف)، ويمكن استخدامها على المجاهر الأكثر القياسية، بما في ذلك مجاهر benchtop رأسي أو مقلوب. هنا، نحن مناقشة الجمعية العامة، عملية، وتنظيف جهاز تدفق، كذلك كما تقدم بعض الخوارزميات ImageJ الكمية الأساسية لتحليل أشرطة الفيديو بعد تجربة.

<table><tbody><tr><td>مضخة</td><td>كول بارمر</td><td>07522-20</td><td>6</td></tr><tr><td>رأس مضخة</td><td>كول بارمر</td><td>77200-60</td><td>6</td></tr><tr><td>أنابيب</td><td>كول بارمر</td><td>96410-14</td><td>N / A</td></tr><tr><td>محول فخ الفقاعات</td><td>كول بارمر</td><td>30704-84</td><td>3</td></tr><tr><td>محول فراغ مصيدة الفقاعات ل 1/4 " معرف خط فراغ</td><td>كول بارمر</td><td>31500-55</td><td>3</td></tr><tr><td>محول مرشح في الخط (4 مطلوبة)</td><td>كول بارمر</td><td>31209-40</td><td>8,9</td></tr><tr><td>الجانب البرتقالي Y</td><td>كول بارمر</td><td>31209-55</td><td>7</td></tr><tr><td>الجانب الأخضر Y</td><td>ibidi</td><td>10827</td><td>2</td></tr> <tr><td>* الشرائح</td><td>ibidi</td><td>80196</td><td>4</td></tr> <tr><td>* سحر الشرائح</td><td>ibidi</td><td>10802</td><td>4</td></tr><tr><td>فراغ مصيدة الفقاعات المساعدة</td><td>Elveflow / داروين الموائع الدقيقة</td><td>KBTLarge - مجموعة مصيدة الفقاعات</td> الدقيقة <td>3</td></tr><tr><td>قوارير وسائط</td><td>Corning</td><td>4980-500</td><td>1</td></tr><tr><td>0.2 & micro ؛ م فلتر الهواء</td><td>Corning</td><td>431229</td><td>1</td></tr><tr><td>زجاجة زجاجية ملولبة ل PD وقارورة الفلتر (2 مطلوبة)</td><td>Corning</td><td>1395-100</td><td>5,10</td></tr><tr><td>غطاء لولبي منقل ل PD وقارورة الفلتر (2 مطلوب)</td><td>Wheaton</td><td>1129750</td><td>5,10</td></tr><tr><td>موصل أنابيب Screwcap</td><td>Wheaton</td><td>1129814</td><td>5,10</td></tr><tr><td>موصل أنابيب غسالة مشطوفة</td><td>Danco</td><td>88579</td><td>5,10</td></tr><tr><td>موصل الأنابيب غسالة مسطحة</td><td>Danco</td><td>88569</td><td>5,10</td></tr><tr><td>مشابك للمرشحات المضمنة والمصب Y (7 مطلوبة) شركة</td> <td>Oetiker / MSC Industrial Supply</td><td>Company 15100002-100</td><td>7،8،9</td></tr><tr><td>أداة المشبك</td><td>Oetiker / MSC Industrial Supply Company</td><td>14100386</td><td>N / A</td></tr><tr><td>20 & mu ؛ م في خط تصفية الوسائط</td><td>الأدوات العلمية التحليلية</td><td>850-1331</td><td>8</td></tr><tr><td>10 & م في خط تصفية الوسائط</td><td>الأدوات العلمية التحليلية</td><td>850-1333</td><td>9</td></tr><tr><td>2 & mu; م مرشح وسائط مدخل</td><td>Supelco / Sigma-Aldrich</td><td>58267</td><td>10</td></tr> <tr><td>* 0.22 & مرشح الوسائط M</td><td>Millipore</td><td>SVGV010RS</td><td>11</td></tr> <tr><td>* 0.22 & micro ؛ مرشح الوسائط M " محول"</td><td>BD Biosciences</td><td>329654</td><td>11</td></tr><tr><td>سدادة مطاطية</td><td>فيشر Scientific</td><td>14-131E</td><td>1</td></tr> محرك <tr><td>صفيحة تسخين مع منفذ مسبار خارجي</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>88880006</td><td>N / A</td></tr><tr><td>مسبار درجة الحرارة</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>88880147</td><td>N / A</td></tr></tbody></table>

التصوير في الوقت الحقيقي والتحديد الكمي للتنمية بيوفيلم الفطرية باستخدام نظام تدفق دائرية ذات مرحلتين

Real-time Imaging and Quantification of Fungal Biofilm Development Using a Two-Phase Recirculating Flow System

في داء المبيضات المكنسية، يجب التقيد بأعضاء جنس المبيضات وتنمو على سطح الغشاء المخاطي الشفوي في حين ظل آثار تدفق اللعاب. بينما تم تطوير نماذج للنمو في ظل تدفق، العديد من هذه النظم غالية الثمن، أو عدم السماح بالتصوير في حين الخلايا قيد التدفق. قمنا بتطوير جهاز رواية التي تسمح لنا بصورة نمو وتطور الخلايا المبيضات البيض في ظل تدفق وفي الوقت الحقيقي. هنا، نحن تفاصيل البروتوكول للجمعية واستخدام هذا الجهاز التدفق، فضلا عن التحديد الكمي للبيانات التي يتم إنشاؤها. نحن قادرون على تحديد المعدلات التي نعلق على الخلايا، وفصل من الشريحة، فضلا عن تحديد مقياس للكتلة الأحيائية على الشريحة مع مرور الوقت. هذا النظام اقتصادا وتنوعاً، وتعمل مع العديد من أنواع المجاهر الخفيفة، بما فيها مجاهر benchtop غير مكلفة، على حد سواء، وقادر على تمديد التصوير مرات مقارنة بغيرها من نظم تدفق. عموما، هذا هو نظام منخفضة الإنتاجية التي يمكن أن توفر معلومات مفصلة للغاية في الوقت الحقيقي على نمو بيوفيلم الأنواع الفطرية تحت التدفق.

الممثل صور عادية بين عشية وضحاها الوقت الفاصل بين تجربة استخدام البرية من نوع المبيضة يمكن رؤية الخلايا عند 37 درجة مئوية في الشكل 2ألف و التكميلي فيديو 1. وقد الصور التباين المحسن لتحسين الرؤية. تم إجراء القياس الكمي للبيانات الأصلية، ويمكن رؤية الرسومات البيانية الممثل في الشكل 2ب. لتوليد هذه الرسوم البيانية، تم تطبيع البيانات أولاً إلى منطقة التصوير (أي، مقسو...

يصف لنا الجمعية العامة، عملية، وتنظيف جهاز تدفق تهدف إلى تكوين بيوفيلم الفطرية الصور في الوقت الحقيقي في حين ظل تدفق. ونحن أيضا تقديم ومناقشة خوارزميات الكمية المراد استخدامه على الصور المكتسبة.

In oropharyngeal candidiasis, members of the genus Candida must adhere to and grow on the oral mucosal surface while under the effects of salivary flow. ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأحياء الدقيقة، مثل كيفية تغيير تدفق السوائل نمو وتطور الأغشية الحيوية الفطرية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح لنا بتقييم كمي لآثار التدفق على نمو وتطور الأفلام الحيوية في الوقت الحقيقي. تبدأ هذه التجربة مع تجميع جهاز تدفق، كما هو موضح في بروتوكول النص.في يوم التجربة، قم بإرفاق فخ الفقاعة، ومسبار درجة الحرارة، وجميع مكونات الاستخدام الفردية. لتجميع المرشح، قم بإزالة المكبس من حقنة ذات ملليلتر واحدة لجعله محولًا. فرض الأنابيب من زجاجة تصفية في هذه الغاية واربط مرشح 2 ميكرون إلى الأنابيب المؤدية إلى قارورة النمو.تطبيق الشحوم فراغ سيليكون حول بارب من محول الشريحة قبل توصيله، وهذا يساعد على منع تسرب الهواء في النظام. ملء قارورة المرفق مع 100 ملليلتر من YPD، وملء قارورة النمو مع 200 ملليلتر من YPD. تأكد من أن أنابيب الجانب الأخضر تصل إلى وسائل الإعلام في كل قارورة.تأكد من أن جميع الصمامات مفتوحة. إرفاق فخ فقاعة إلى فراغ، وربط المضخة إلى الجانب الأخضر أنابيب المصب من فخ فقاعة. ضخ السائل بمعدل تدفق 3.3 ملليلتر في الدقيقة الواحدة لملء تماما الجانب الأخضر.ثم dispense والتخلص من ما يقرب من 1-2 ملليلتر من وسائل الإعلام، لأن أول زوجين من milliliters غالبا ما تحتوي على خلايا ميتة أو الحطام العشوائي. تأكد من أن الجانب الأخضر من الأنابيب مليء وسائل الإعلام وليس لديه فقاعات المصب من فخ فقاعة قبل المضي قدما. ملء شريحة القناة والخزان مع YPD، مع الحرص على عدم إدخال فقاعات.قم بتوصيل الشريحة بجهاز التدفق. ثم ضخ المزيد من السوائل لإنشاء عازلة من حوالي 5 أمتار على الجانب البرتقالي. هذا هو لمنع بطريق الخطأ محاصرة الهواء في الشريحة في حالة تدفق الظهر.الآن، وإعداد جهاز تدفق للنقل إلى المجهر عن طريق أول زرع مدخل ومنفذ من فخ فقاعة مغلقة. ثم المشبك الأخضر والبرتقالي جانب مرفق صمامات مغلقة. تأكد من أن قبعات المسمار لإخماد النبض وزجاجة مرشح ضيقة، لأنها يمكن أن تخفف أثناء الطلاء التلقائي.افصل المضخة من الأنابيب لتسهيل النقل. ثم نقل جميع المكونات، بما في ذلك لوحة الساخنة، في حاوية ثانوية بالقرب من المجهر. إرفاق مسبار درجة الحرارة إلى مُحرّك الصفيحة الساخنة، والبدء في تسخين قارورة المرفق إلى 37 درجة مئوية.حرك وسائل الإعلام في 300 دورة في الدقيقة، والحفاظ على هذا لكامل التجربة. قم بتركيب الشريحة على المجهر، واستخدم الشريط إذا لزم الأمر لتأمينه بإحكام. ثم نعلق فخ فقاعة إلى فراغ.الآن، قم بتوصيل المضخة بجهاز التدفق. بدء المضخة بمعدل تدفق 3.3 ملليلتر في الدقيقة الواحدة، والسماح لها لتشغيل لمدة خمس إلى 10 ثوان تقريبا. ثم، إزالة فخ فقاعة في السماح التدريجي عشيرة غطاء.السماح للمضخة لمواصلة تشغيل بينما قارورة المرفقات يسخن. مرة واحدة في قارورة المرفق وغرفة الحضانة على حد سواء في 37 درجة مئوية، إضافة ما يكفي من ثقافة بين عشية وضحاها من الخلايا الفطرية إلى قارورة المرفق للوصول إلى مليون خلية لكل ملليلتر. انتظر 15 دقيقة للسماح للخلايا بالتأقلم.فتح كل من صمامات قارورة جانبية خضراء وبرتقالية مع إغلاق كل من صمامات قارورة النمو لبدء تدفق الخلايا. انتظر لمدة خمس دقائق تقريباً للسماح للخلايا بالوصول إلى الشريحة. خلال هذا الوقت، ركز المجهر وضبطه مع نفس معلمات التصوير المستخدمة في التجارب السابقة.ابدأ الحصول على الصورة لمرحلة المرفق. تحقق مرة أخرى بعد حوالي خمس دقائق و 10 لضمان الحفاظ على التركيز. إذا لم يكن كذلك، حاول ضبط التركيز مباشرة بعد الحصول على الصورة التالية.بعد الانتهاء من مرحلة المرفق مباشرة، قم بحفظ الملف. ثم فتح كل من صمامات قارورة الجانب الأخضر والبرتقالي مع إغلاق كل من صمامات قارورة المرفق. الحرص على عدم عثرة المرحلة إذا كانت هناك أي صمامات داخل غرفة الحضانة.افصل مسبار ميزان الحرارة، واستبدل قارورة المرفق بقارورة النمو. الآن ، تكوين البرنامج للحصول على صورة كل 15 دقيقة على مدى 22 ساعة ، والبدء في الحصول على صورة لمرحلة النمو. بمجرد الانتهاء من عملية الاستحواذ على مرحلة النمو وحفظ الملف ، افتح صمامات قارورة المرفقات الجانبية الخضراء والبرتقالية ، والتي قد تجعل من الضوضاء إطلاقات الضغط على الجانب البرتقالي.سحب ما يصل على أنابيب الجانب الأخضر القادمة من كل من قارورة وسائل الإعلام، حتى أنها على الأقل عدة سنتيمترات فوق وسائل الإعلام. ثم، تشغيل المضخة بسرعة عالية لإزالة جميع وسائل الإعلام من الأنابيب، مما يجعل التنظيف أسهل بكثير. وأخيراً، كمي مقاطع الفيديو كما هو موضح في بروتوكول النص.هذا الوقت الفاصل الظلام حقل المجهر الفيديو يظهر تعلق من نوع البرية المبيضات الخلايا ألبيكية إلى الركيزة تحت التدفق خلال مرحلة المرفق، تليها النمو والتطور اللاحقة خلال مرحلة النمو مما يؤدي إلى تشكيل بيو فيلم. يمكن تحليل البيانات من هذه الفيديوهات عن معدلات مرفق الخلايا وفرزها والكتلة الحيوية مع مرور الوقت، وتظهر هنا الكتلة الحيوية الإجمالية داخل منطقة التصوير كما يحددها تحليل قياس الكثافة. كما يتم عرض المعدل التراكمي لمرفق الخلية وفرز الكتلة الحيوية في المائة مع مرور الوقت.أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر استخدام نفس ظروف التصوير في جميع التجارب، لأن هذا يسمح بإجراء مقارنات كمية بينهما.

real-time-imaging-quantification-fungal-biofilm-development-using-two

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

بروتوكول يصف تطبيق نظام تدفق لزراعة الخلايا والأغشية الحيوية الميكروبية تحليل ليزر متحد البؤر المجهر الضوئي (CLSM).

والزائفة الزنجارية السكيراء بيوفيلم في خلايا خميرة تدفق

المصدر: كورز، د. ل. وآخرون. منصة ميكروفلويدية لدراسة السد الحيوي في الأوساط المسامية. J. Vis. Exp. (2022)يوضح الفيديو استخدام جهاز ميكروفلويديك لدراسة تكوين الأغشية الحيوية. يتم إدخال تعليق بكتيريا في القناة الدقيقة، يتبعه الحضانة للسماح بتطور الأغشية الحيوية. ثم يستأنف التدفق، ويستخدم مراقبة الضغط مع التصوير لاكتشاف تكوين الغشاء الحيوي وانسداد المسام مع مرور الوقت.

جهاز ميكروفلويديك للتصوير في الوقت الحقيقي وتتبع الضغط أثناء تكوين الفيلم الحيوي

يتم تقديم بروتوكول للقياس الكمي المتزامن والمقارنة بين ثلاثة مكونات خلوية وخارج الخلية داخل الأغشية الحيوية. تتضمن المنهجية استخدام الفحص المجهري للمسح الضوئي بالليزر متحد البؤر ، وبرامج التحليل الهيكلي للأغشية الحيوية والتصور ، وبرامج التحليل الإحصائي.

الكمي المتزامنة الخلوي ومكونات خارج الخلية من الأغشية الحيوية

والهدف من هذه الورقة هو طرق لوصف استخدام نظام ميكروفلويديك لتطوير الأغشية الحيوية متعددة الأنواع التي تحتوي على الأنواع التي تم تحديدها عادة في الإنسان لوحة الأسنان فوق اللثة. طرق لوصف العمارة بيوفيلم، قابلية بيوفيلم، ونهجا لحصاد بيوفيلم عن التحليلات التي تعتمد على الثقافة أو ثقافة مستقلة وتسليط الضوء عليها.

استخدام إنتاجية عالية<em&gt; في المختبر</em&gt; نظام ميكروفلويديك لتطوير الأغشية الحيوية متعدد الأنواع عن طريق الفم

Biofilms لها تفاعلات معقدة مع البيئة المحيطة بها. للتحقيق الشامل في تفاعلات الأغشية الحيوية والبيئة ، نقدم هنا سلسلة من الطرق لإنشاء بيئة كيميائية غير متجانسة لتطوير الأغشية الحيوية ، وتحديد سرعة التدفق المحلي ، وتحليل النقل الجماعي داخل وحول مستعمرات الأغشية الحيوية.

طرق للتميز الرئيسين تطوير بيوفيلم والموئل التجانس

يبحث في المرونة اللزوجة للمواد. هنا ، يتم استخدام هذه التقنية لتحديد مرونة اللزوجة والامتثال للزحف وأدوار التشابك الفعالة لمكونات المصفوفة المختلفة للأغشية الحيوية البكتيرية. تتكون المصفوفة من مواد بوليمرية تفرزها البكتيريا وتحدد مكوناتها بنية الأغشية الحيوية والخصائص الميكانيكية.

في الموقع خارطة الخواص الميكانيكية لالأغشية الحيوية التي تتبع الجسيمات Microrheology

يصف هذا البروتوكول طريقة جديدة لزراعة وتحليل الأغشية الحيوية البكتيرية على خيوط فطرية بواسطة المجهر متحد البؤر والإلكترون نوعيا.

طريقة جديدة لتحليل نوعي متعدد حجم البكتيرية الأغشية الحيوية على شعيري الفطرية المستعمرات عن طريق متحد البؤر والمجهر الإلكتروني

ويصف هذا البروتوكول استخدام جهاز موائع جزيئية الآلي للتخصيص لتصور تشكيل بيوفيلم في المبيضات البيض تحت ظروف فسيولوجية المضيف.

التصور "تشكيل بيوفيلم" في المبيضات البيض باستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي

تشكل الأغشية الحيوية الميكروبية بنيات معقدة في المراحل البينية وتتطور إلى أنماط مكانية تعتمد على النطاق إلى حد كبير. هنا، نقدم نظام تجريبي (الثابت والبرمجيات) للاقتناء الآلي للتصوير المقطعي للتماسك البصري 3D (OCT). تسمح مجموعة الأدوات هذه بالتوصيف غير الغازي والمتعدد النطاق لمورفوجينيسيس الفيلم الحيوي في المكان والزمان.

التصوير المقطعي الآلي للتماسك البصري ثلاثي الأبعاد لأتمتة المورفولوجيا الحيوية على الموازين المكانية الكبيرة

نظرا لعتامة التربة ، لا يمكن بسهولة تصور التفاعلات بين الميكروبات المكونة لها بدقة خلوية. هنا ، يتم تقديم أداتين للسوائل الدقيقة ، والتي توفر فرصا جديدة للتحقيق في التفاعلات الفطرية الميكروبية. الأجهزة متعددة الاستخدامات وسهلة الاستخدام ، مما يتيح التحكم الزماني المكاني العالي والتصوير عالي الدقة على المستوى الخلوي.

أدوات الموائع الدقيقة للتحقيق في التفاعلات الفطرية الميكروبية على المستوى الخلوي

تعلم تقنية التصوير في الوقت الحقيقي لدراسة تطور الأغشية الحيوية الفطرية باستخدام نظام التدفق الدائري ذي المرحلتين. تتيح هذه الطريقة التحليل الكمي لتأثيرات الجريان على نمو البيوفيلم.

التصوير في الوقت الحقيقي والتحديد الكمي للتنمية بيوفيلم الفطرية باستخدام نظام تدفق دائرية ذات مرحلتين

استكشف المزيد من الفيديوهات