مقايسة متحاور تضخيم (مصباح) بوساطة حلقة "التعرف السريع على" دراسة حيث

توفر هذه الطريقة أداة تشخيصية سريعة وموثوقة لتحديد بيميسيا طباتشي، وهي آفة حشرية غازية تؤثر على إنتاج الخضروات والمحاصيل الزينة في العديد من البلدان حول العالم. نظرا لسهولة، يمكن تنفيذ هذه الطريقة في الموقع مباشرة في نقاط الدخول للمنتجات استيراد النباتات، مثل الموانئ والمطارات، وبالتالي لديه القدرة على الحد من تشتت بيميا tabaci على طول شبكات التداول. للبدء، واستخدام مقص لقطع شريط مصباح ثمانية أنبوب إلى اثنين، أربعة أنابيب شرائط مصباح.

ثم، تسمية الأنابيب وفقا للمخطط المبين في الشكل واحد من بروتوكول النص. بعد هذا، إعداد ما يكفي من تفاعل تفاعل تاباتشي اختلطة ماجستير لـ 80 ردة فعل. ثم، الاستغناء 22.5 ميكرولترات من مزيج الرئيسي في كل من أنابيب شرائط مصباح أربعة أنابيب.

النبض الطرد المركزي، ووضعها على الجليد. بسرعة دوامة والنبض الطرد المركزي B.tabaci المصباح PAC. ثم، إضافة 2.5 ميكرولتررس في أنبوب المسمى PAC في كل من أربعة أنابيب شرائط مصباح.

بعد ذلك، أغلق الأغطية، واخزن وحدات مجموعة أدوات B.tabaci LAMP الجاهزة للاستخدام عند درجة حرارة 20 درجة مئوية ناقصًا. لبدء استخراج الحمض النووي ، استخدم مسواك معقمة لنقل عينات الحشرات إلى أنابيب ميكروسنتر 0.5 ملليلتر مع 30 ميكرولترات من محلول استخراج الحمض النووي. ثم، احتضان العينات لمدة خمس دقائق في 95 درجة مئوية في ThermoMixer تعيين إلى 300 دورة في الدقيقة.

بإيجاز دوامة ونبض جهاز طرد مركزي العينات. ذوبان واحدة من مجموعات الجاهزة للاستخدام مصباح B.tabaci. ثم، دوامة عدة بسرعة، والنبض الطرد المركزي عليه.

إضافة 2.5 ميكرولترات من عينة استخراج الحمض النووي إلى أنابيب S-واحد و S-اثنين. ثم، إضافة 2.5 ميكرولترات من محلول استخراج الحمض النووي القلوية نقية إلى أنبوب NAC. بعد دوامة والنبض الطرد المركزي عدة، أدخل عدة في جهاز تحليل مصباح، وإجراء تحليل تضخيم الحمض النووي متساوي الحرارة في 65 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة.

في نفس الشوط، إجراء تحليل درجة حرارة ذوبان منتجات تضخيم الحمض النووي عن طريق تسخين أول عدة إلى 98 درجة مئوية وتبريده إلى 75 درجة مئوية. التحقق من صحة قراءة المصباح باستخدام تطبيق التحقق التلقائي من صحة المصباح. أولاً، حدد الأنواع المستهدفة وعدد العينات التي تم اختبارها قبل النقر فوق الزر إنشاء تقرير.

وأخيراً، نقل القراءة إلى حقول الإدخال المناسبة من تطبيق التحقق من الصحة. فور إدخال البيانات، سيتم عرض نتيجة التحقق من الصحة. في هذا البروتوكول ، تم تحليل عينات حشرة B.tabaci التي تم اعتراضها أثناء عملية مراقبة الاستيراد السويسرية العادية عن طريق اختبار مصباح.

ومن بين ما مجموعه 80 عينة تم تحليلها، تم تحديد 75 عينة بشكل صحيح على أنها إيجابية حقيقية، وتم تحديد عينتين بشكل صحيح على أنها سلبية حقيقية. غير أن ثلاث عينات كانت سلبية زائفة وتم تحديدها خطأ على أنها ليست ب. تاباتشي. وقد قام مفتشو الصحة النباتية في مطار زيوريخ بإجراء مجموعة فرعية من عمليات الفحص في الموقع.

في النتائج التمثيلية، تم تحديد العينتين الأولى والاثنان بشكل صحيح على أنهما B.tabaci عن طريق تضخيم الحمض النووي بعد حوالي 30 دقيقة في درجة حرارة الطن المتوقعة التي تبلغ حوالي 82 درجة مئوية. بعد تطويرها، مهدت هذه الطريقة الطريق لتحديد سريع وسهل الأداء في الموقع من بيميسيا طباتشي. وقد صُمم البروتوكول بطريقة يمكن أن يؤديها مفتشو الصحة النباتية الذين لا يتوفرون إلا تدريباً مختبريًا محدودًا.

وبعد نجاح التحقق من صحة هذه الطريقة في نقطة دخول سويسرية للمنتجات المستوردة النباتية، يمكن تكييف هذه الطريقة مع مسببات الأمراض النباتية الأخرى، ولكن أيضا، إذا لزم الأمر، لمسببات الأمراض البشرية أو البيطرية الأخرى.